摘要：目的建立实时定量PCR检测血浆病毒载量的方法,对马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)强毒株攻毒马和疫苗免疫攻毒马血浆中病毒载量进行了跟踪检测,探讨病毒载量和临床疾病状态的相关性.方法以EIAV强毒株LN40序列为标准,在gag保守区设计1对引物和Taqman探针,用于实时定量PCR扩增,用含扩增目的基因的体外转录RNA作标准品,获得标准曲线,对扩增样品进行准确定量.强毒株LN40直接攻毒,或者疫苗株DLV免疫马6个月后用强毒株LN40进行攻毒,跟踪检测攻毒马及免疫攻毒马血浆中EIAV载量情况.结果反应在101～109copies/ml之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10 copies/ml.强毒攻毒马出现发热并最终死亡,发热期间马血浆中EIAV载量与体温呈正相关,载量最高达107 copies/ml.免疫攻毒马未出现发热,其血浆EIAV载量的总体水平低于强毒攻毒马,攻毒后3个月低至10 copies/ml以下.结论成功建立了实时定量PCR检测血浆EIAV载量的方法,并证实了用实时荧光定量PCR检测EIAV病毒载量的方法来监测动物感染状态具有可行性,为EIAV致病机制研究和弱毒疫苗免疫保护机制的研究提供良好的技术平台.

摘要：本试验选取11头6周龄健康仔猪（母源抗体呈阳性4头为A组；母源抗体呈阴性7头，随机选取其中4头为B组；剩余3头为c组，作为空白对照），A、B组进行人工攻毒，获得了实际生产中PCV2亚临床感染状态，采用荧光定量PCR与组织病理切片技术相结合，旨在探究机体各脏器（心、脾、肺、肾、淋巴结）组织中PCV2病毒栽量与病理损伤的相关性。结果显示，A组以淋巴结、脾免疫器官的组织病毒载量最高，然而，B组，淋巴结、脾免疫器官的组织病毒载量反而偏低；组织病理学发现PCV2主要引起淋巴结、脾免疫器官的淋巴细胞坏死、损耗，肺脏间质性肺炎，肾脏间质性肾炎，心脏心肌炎等病变。相同脏器的组织病毒载量和病理损伤程度相关性统计结果表明：不同个体其相同脏器的组织病毒载量与病理损伤程度呈正相关性，而相同个体其不同的脏器之间组织病毒栽量与病理损伤程度的规律性还有待进一步试验。本试验为PCV2的实践病理诊断，疫苗免疫效力评价，疾病防控提供理论参考。

摘要：目的探讨育龄期女性宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ合并高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染患者多肿瘤抑制基因P16、细胞增殖核抗原Ki67的表达,并分析二者与HR-HPV病毒载量对CIN病变转归的影响。方法选择2020年1月至2021年1月本院收治的103例CINⅡ合并HR-HPV感染的育龄期女性患者作为观察组,另选择同期医院收治的51例CINⅡ未合并HR-HPV感染的育龄期女性患者作为对照组;观察组患者均接受手术治疗并随访1年,根据患者随访1年时CINⅡ转归情况,将患者分为病变消退组、病变持续组、病变进展组;设计患者基线资料调查表,检测患者相关实验室指标,比较不同宫颈病变转归患者的基线资料、实验室指标;重点分析P16、Ki67的表达及HR-HPV病毒载量对CINⅡ病变转归的影响。结果103例CINⅡ合并HP-HPV感染患者随访1年,病变消退66例,病变持续21例,病变进展16例;观察组患者P16、Ki67阳性表达程度高于对照组,差异有统计学意义(P0,有临床意义。结论育龄期女性CINⅡ合并HR-HPV感染患者P16、Ki67呈异常表达,且二者与HR-HPV载量均可能影响患者宫颈病变转归。

摘要：病毒载量动力学的检测被越来越广泛地用来预测抗病毒药物的治疗效果,先前的免疫学检测受很多因素的影响,已不能正确反应病毒的复制.而病毒载量定量检测可使人们能够比较清楚地了解病毒在体内的变化情况,弥补了免疫学方面的不足.通过对病毒动力学的研究可以使我们了解病毒在清除过程中的特点,从而用于指导临床来评估药物疗效,以及针对不同的患者设计合理的治疗方案.

摘要：目的建立鼠艾滋病模型血浆病毒载量荧光定量聚合酶链(PCR)检测方法。方法将体外合成的鼠艾滋病病毒(FLV)核糖核酸(RNA)标准品稀释为10个浓度梯度,进行逆转录,PCR荧光定量检测,经批内与批间差异分析,再以PCR荧光定量检测不同倍数FLV脾悬液FLV拷贝数及相应被注射小鼠模型的血浆病毒载量,计算脾指数。结果研究设计的荧光定量PCR方法能检测到20～2×108copiesFLVRNA逆转录反应体系,在5个注射的FLV拷贝数范围内,血浆病毒载量与脾指数均不与初始注射的FLV拷贝数成正比,二者亦不呈现平行关系。结论研究采用的FLV荧光定量PCR方法敏感性好,特异性强,重现性好,显著提高FLV病毒的检测水平。

摘要：目的探讨人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）DNA的病毒载量检测在亚临床型女性宫颈癌筛查中的应用价值。方法拟设计4条分别针对HPVl6，18，33，58与人肛球蛋白的特异性引物与探针，建立一种新型的荧光定量PCR方法，对541例亚临床型女性宫颈组织细胞进行HPV型别和病毒栽量检测。结果541例样本中p球蛋白结果阳性的标本521例，其中56例HPVDNA阳性。HPV16，HPV18型以及多重感染的阳性检出率分别为46．42％（26／56），23．21％（13／56），30．36％（17／56）；感染的最低病毒栽量分别为≥10。拷贝／“细胞”，≥10^4拷贝／“细胞”，≥10^2拷贝／“细胞”；单一型别HPV感染的病毒载量高于多重感染的病毒载量，且二者之间差异有统计学意义（P〈O．05）。结论HPVl6，HPVl8是亚临床女性感染HPV的主要型别，HPVDNA病毒载量的检测为宫颈癌的常规筛查提供了一个动态监测手段。

摘要：目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)分型定量检测在宫颈癌筛查中的临床价值。方法:收集2019年5月-2021年5月本院收治并有细胞学和(或)组织病理学结果的204例HPV阳性患者资料,采用分型定量检测试剂盒(BMRT)检测21种HPV病毒并进行分型和标准化定量,比较不同HPV亚型病毒载量与宫颈病变程度关系,分析预测≥HSIL的HPV亚型病毒载量最佳临界值。结果:高危HPV感染率前3位为HPV16(45.6%)、HPV18(14.5%)、HPV52(5.4%)。不同细胞学分级者HPV16、18、58、68亚型病毒载量有差异且与分级成正相关,不同病理学分期者HPV16、52、58和68亚型病毒载量有差异且与分期成正相关(均P<0.05)。当HPV16、52、58亚型病毒载量临界值达到4.18、3.478和3.875时,可预测发生宫颈病变≥HSIL的风险,曲线下面积分别为0.839、0.738、0.837。结论:HPV亚型病毒载量与宫颈病变的严重程度相关,BMRT HPV检测对宫颈病变初筛有一定意义。

摘要：背景 肠道病毒为非包膜病毒、是频繁感染人类的RNA病毒。该病毒可能会通过输注处于抗体血清转换前病毒血症期的供者的血液或血液成份传播。为调查肠道病毒对输血安全的威胁,作者进行了一项大范围的供血者感染率和病毒含量检测调查。研究设计和方法 对苏格兰22个月里捐献的血液用PCR筛查了肠道病毒RNA。

摘要：【目的】建立一种快速、灵敏、特异的检测甘蔗条点病毒(sugarcane striate virus,SStrV)的SYBR Green I荧光定量PCR方法。【方法】从SStrV基因组保守区域序列设计特异性扩增引物,构建含有SStrV基因组序列的重组质粒pMD19-T-SStrV-qN作为阳性质粒标准品,以其为模板建立SStrV荧光定量PCR检测方法,并对该方法的灵敏性、特异性、稳定性进行了测试,随后用该方法对甘蔗不同组织部位中SStrV载量进行检测。【结果】将含有SStrV基因组序列的重组质粒按10倍比稀释成标准品,将其作为模板进行荧光定量PCR,获得标准曲线y=-3.337 x+38.197,相关系数r2=0.999,说明Cq值与标准品浓度拷贝数的对数呈线性关系;建立的荧光定量PCR最低可以检测到13拷贝重组质粒/μL,是普通PCR灵敏度的100倍。该方法能特异的检测SStrV,特异性高,组内和组间的变异系数在0.13%-0.94%之间,表明该方法重复性良好。SStrV的载量在甘蔗的不同组织部位中差异较大,+4叶中SStrV的载量最高,与其他组织部位达到了显著差异。【结论】建立了能灵敏特异检测SStrV的SYBR Green I荧光定量PCR方法,明确了+4叶是甘蔗中SStrV检测的最佳采样部位。

摘要：本研究的目的为建立一种灵敏、快速、定量检测埃博拉病毒莱斯顿亚型核酸的实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒。首先选择埃博拉病毒莱斯顿亚型的保守基因NP基因作为检测靶目标,筛选出保守序列并设计合成一对特异性引物。然后将连有NP全长基因的重组质粒作为定量标准品,将10倍系列稀释的重组质粒进行荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线,并进行重复性、灵敏度及特异性检测。结果显示建立的埃博拉病毒莱斯顿亚型荧光定量PCR检测方法,其灵敏度可达102拷贝/μL,不同梯度标准品间线性关系(R2)达0.997,斜率为-0.3101,扩增效率为110.145%,所有标准品均在79.94℃出现尖且窄的特异性熔解峰。利用该检测系统可以快速定量检测埃博拉病毒莱斯顿亚型核酸,灵敏度高、重复性好,可用于基础及临床实验室对埃博拉病毒莱斯顿亚型感染的快速诊断和临床效果的监测,具有实际的应用价值。