摘要：1985年Saiki和Mullis等人首创的聚合酶链反应(PCR)是基因扩增技术的一次重大革新。本文介绍了PCR的基本原理和技术程序——设计引物,选择DNA聚合酶,在PCR仪上进行增扩反应;在植物病毒鉴定上的应用,并展望了该技术的应用前景。

摘要：阿卡斑病毒(Akabane virus,AKV)是能引起牛、绵羊、山羊流产、早产、新生胎儿畸形的虫媒性RNA病毒。为了解家畜虫媒病毒在我国西南边境地区的分布和流行情况,本研究对中缅边境西盟县的52份牛抗凝血和140份血清(牛70份、羊70份)中的蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)、鹿流行性出血热病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)、AKV等虫媒病毒进行检测与分离,通过ELISA及qRT-PCR方法检测病毒,通过核酸阳性抗凝血接种BHK细胞传代以分离病毒,通过设计特异性引物,扩增分离毒株S基因721bp片段及M基因816bp片段,通过克隆测序及中和试验以鉴定病毒,最终从38号牛的抗凝血中分离到一株AKV,TCID50为10-3.5/0.1mL,经比对,分离株S片段与日本KS-2/Mo/06毒株亲缘关系最近,核苷酸同源性为97.66%,M片段与中国DHL10M110毒株亲缘关系最近,核苷酸同源性为96.56%。本研究首次报告了从云南边境地区牛群中分离到AKV,证实了西南边境存在AKV的流行,为AKV在我国的流行病学和边境地区疫病风险防控提供了重要参考及有力依据。

摘要：本研究利用Small RNA深度测序对长沙、永州、邵阳等地采集的甘薯种质资源病毒症状样品进行鉴定,发现样品中含有与甘薯曲叶病毒同源的系列。设计引物进行PCR扩增,鉴定出24个SPLCV-AC1基因片段序列,经NCBI-Blast比对,与10个不同株系SPLCV同源性达96%以上。为进一步获得SPLCV全长序列,设计背靠背引物,经PCR扩增、鉴定,获得3个SPLCV全长序列。系列进化分析显示,这3个SPLCV分离物聚为同一分支,其中SPLCV(76)序列大小2 774 bp,与甘薯乔治亚曲叶病毒中国分离物、甘薯金脉病毒具有较高同源性;SPLCV(47)序列大小2 777 bp,与甘薯河南曲叶病毒分离物具有较高同源性;SPLCV(68)序列大小2 832 bp,与甘薯广西曲叶病毒分离物具有96%的同源性。以上同源系列与Small RNA测序显示结果相一致。本研究结果为甘薯病毒病防控提供理论依据。

摘要：从重庆某猪场采集病死猪病料,经RT-PCR初步鉴定其病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒后,利用反转录合成cDNA,设计NSP2和GP5基因片段的特异性引物,并对其扩增,序列测序,分析鉴定。结果表明,该分离株的NSP2基因与经典毒株VR-2332核苷酸同源性仅为66.7%,与高致病变异株SD、JXA1的核苷酸同源性高达98.8%,GP5基因在个别碱基上也存在变异,由此表明该毒株为高致病性蓝耳病变异株。同时将该病料接种于Marc-145细胞,可观察到典型的细胞病变(CPE),经Reed-Muench计算该分离株的病毒滴度为10?5.67 TCID50/0.1mL。该毒株的分离鉴定,为进行猪繁殖与呼吸综合征流行病学的调查研究提供了依据。

摘要：为明确侵染广东省冬种马铃薯的病毒种类及优势病毒,结合小RNA深度测序技术及RTPCR检测方法,对采集于广东省冬种马铃薯7个主产区的189份疑似病样进行检测分析。结果表明,经小RNA深度测序技术检测马铃薯病毒病混合样,发现存在马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)和马铃薯卷叶病毒(Potato leaf-roll virus,PLRV)3种病毒。进一步设计3种病毒的特异性引物并利用国内已报道的其它5种马铃薯病毒的特异性引物进行RT-PCR检测,发现189份马铃薯病毒病疑似病样中仅检测到PVY、PVS和PLRV这3种病毒,检出率依次为75.13%、10.05%和4.76%,且3种病毒在马铃薯上还存在复合侵染,复合侵染率为14.19%,其中PVY在各马铃薯产区均可检测到。表明侵染广东省冬种马铃薯的病毒为PVY、PVS和PLRV,其中PVY是优势病毒。