摘要：目的 探讨3D虚拟手术规划技术对精准肝切除治疗肝细胞癌的指导价值.方法 回顾性分析16例肝细胞癌患者通过3D虚拟手术规划系统（IQQA-Liver）辅助下进行肝切除的临床资料,术前使用IQQA-Liver对患者薄层CT图像进行三维重建,对病灶定位和分割,评估病灶与肝内管道等信息,并分别计算标准肝脏体积、肿瘤体积、预切除肝脏体积、剩余肝脏体积和残肝体积百分比,从3D影像学角度完成术前评估和手术方案设计,制定个体化手术方案,并与术后实际切除肝脏体积进行比较.结果 使用IQQA-Liver对肝脏进行三维重建的模型结构清晰、直观、形象逼真.所有手术患者术后残肝体积均能得到准确评估,确保代偿,住院天数4～11 d（平均7d）,未出现肝衰及胆漏等并发症,住院期间无死亡病例,16例患者模拟手术预切除体积与实际手术切除的肝脏体积具有明显相关性,平均误差率约6.3％.结论 IQQA-Liver可在术前准确模拟肝脏切除手术情况,对制定精准肝切除手术方案有指导作用.

摘要：为了提高经导管动脉化学栓塞治疗原发性肝癌的疗效，设计、制造和验证了用于栓塞肝癌血管的迦俐生微球。文章简要介绍了该微球的结构、性状和使用方法。

摘要：肝细胞癌是常见的危害人类健康的恶性肿瘤之一，其发生、发展过程受诸多因素的影响。近年研究发现，信号转导和转录激活因子（STAT）具有强烈的抑制细胞凋亡，促进细胞增殖的作用，参与了人类恶性肿瘤的发生、发展和演变，其中以STAT3尤为活跃。本研究利用RNA干扰（RNAi）技术，用短发夹样RNA（shRNA）设计并构建RNAi-DNA质粒，筛选稳定表达小干扰RNA（siRNA）的肝癌HepG2及SMMC-7721细胞株，体外研究siRNA稳定和特异性诱导肝癌STAT3基因转录后沉默并逆转其恶性表型的能力，从而探索肝癌治疗的新方法。

摘要：目的合成和筛选有效抑制细胞内氯离子通道蛋白1（CLIC1）基因的shRNA序列，构建表达质粒，并进一步研究CLIC1基因的表达被抑制后小鼠肝癌细胞株Hca-F细胞增殖及侵袭能力的变化。方法设计并合成3条理论上最佳的siRNA序列，进而将相应的双链DNA插入pGPU6／GFP／Neo质粒中，以脂质体Lipofectamine2000将DNA质粒稳定转染至小鼠Hca-F细胞中，收取细胞进行逆转录多聚酶链反应分析各组的CLIC1 mRNA表达水平，选出最佳干扰序列。应用细胞计数试剂盒检测最佳干扰序列表达质粒稳定转染的Hca-F细胞，对比观察其干扰前后增殖情况的变化；应用transwell小室检测其侵袭能力的变化。对研究数据应用统计学软件SPSS13．0进行方差分析。结果靶向CLIC1 mRNA的3个shRNA重组质粒载体经测序分析，shRNA编码序列与设计的片段完全一致。经酶切凝胶电泳证实载体构建成功。稳定转染pGPU6／GFP／Neo-shRNA-3表达质粒的Hca-F细胞对其CLIC1 mRNA抑制效果明显，抑制率达42．4％。经该表达质粒的干扰后，Hca—F细胞的增殖能力明显增强，侵袭能力显著下降，空白对照组、无关序列处理组、shRNA干扰组的穿膜细胞个数分别为98．93±5．00、96．27±2．60、50．73±3．89，P值均〈0．01。结论pGPU6／GFP／Neo-shRNA-3表达质粒能高效地抑制小鼠Hca-F细胞中CLIC1 mRNA的表达，CLIC1基因具有抑制小鼠肝癌细胞的增殖和促进其侵袭的作用。

摘要：目的研究人肝癌组织及肝癌细胞株中父系表达基因10（PEG10）的遗传印记状态。方法从40例肝癌及其癌旁组织、15例正常肝组织、5株肝癌细胞（PLC／PRF／5、SMMC7721、HepG2、Hep3B、SK—HEP—1）、2株正常肝细胞（changliver、HL7702）中提取基因组DNA，针对PEG10基因单核苷酸多态性位点设计引物进行PCR，扩增片段经测序分析基因型，从杂合样本中提取总RNA进行RT—PCR，对扩增产物测序以检测等位基因表达状态，同时进行实时荧光定量RT—PCR检测PEGl0表达水平。计量资料以均数±标准差（x-±s）表示，组间比较用t检验与方差分析；两组率的比较用x2检验。结果40例肝癌及其癌旁组织中16例呈杂合状态，15例正常肝组织中3例呈杂合状态，肝癌细胞HepG2扩增片段测序检测到一杂合突变位点，其余组织及细胞株均为纯合状态。杂合样本中，82．4％（14／17）肝癌样本（包括组织及肝癌细胞株）中PEG10基因呈双等位基因表达，发生印记丢失；17．6％（3／17）肝癌样本呈单等位基因表达，提示印记存在。PEG10在癌旁及正常肝组织中几乎不表达。发生印记丢失的肝癌组织与印记存在的肝癌组织相比，PEG10表达水平的差异无统计学意义（t=1．311，P〉0．05）。结论大多数肝癌组织中存在PEG10印记丢失现象，PEG10印记状态与其在肝癌组织中的表达水平无明确关系。

摘要：目的:设计、合成Foxp3 siRNA序列,并体外干扰肝癌患者调节性T细胞(regulatory T cells,Treg),评价Foxp3 siRNA干扰后对Treg表型及抑制功能的影响以及是否能上调肝癌患者抗肿瘤免疫应答的能力。方法:设计并化学合成Foxp3 siRNA,将Foxp3 siRNA通过脂质体转染的方式体外转染Treg。通过实时定量PCR以及流式细胞术分析Foxp3 siRNA对Treg中Foxp3表达的抑制效能,并通过流式细胞术评价Foxp3 siRNA干扰后对Treg表面分子CD127、CTLA-4、GITR的表达以及对CD4+CD25-T细胞的抑制作用。通过酶联免疫斑点法(enzyme-linked im-munospot assay,Elispot)以及五聚体(pentamer)分析法评价Foxp3 siRNA干扰肝癌患者Treg后对经肿瘤特异性抗原NY-ESO-1b诱导的肿瘤特异性免疫应答的影响。结果:通过Foxp3 siRNA的转染可实现对Treg Foxp3表达的部分沉默,并且上调Treg表面CD127分子的表达,下调CTLA-4和GITR的表达。肝癌患者Treg Foxp3表达的沉默可下调Foxp3+Treg对CD4+CD25-T效应性细胞增殖抑制的能力。通过五聚体法及Elispot法检测发现,Foxp3 siRNA以及siRNA-control转染组NY-ESO-1157-165特异性的细胞毒T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)的数量分别为0.21%±0.17%和0.57%±0.39%(P<0.05),与siRNA-control进行干扰的肝癌患者组相比,Foxp3 siRNA干扰后的Treg与特异性CTL共培养后,肿瘤特异性CTL数量及分泌的干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的数量显著上调(132±55vs27±11,P<0.05)。结论:通过Foxp3 siRNA对于肝癌患者Treg中Foxp3表达的沉默,可在体外干扰肝癌患者Treg免疫抑制功能,继而增强肝癌患者经肿瘤抗原诱导的CTL抗肿瘤免疫应答。

摘要：目的 探讨小干扰RNA（siRNA）抑制高迁移率族蛋白1（HMGB1）基因对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和凋亡的影响. 方法设计并化学合成针对HMGB1的3对siRNA分子序列（siRNAH1、siRNH2、siRNAH3）,同时设未转染对照组（Lipo组）及转染阴性siRNA组（阴性siRNA对照组）.脂质体法瞬时转染HepG2细胞,通过PCR法和Western blot检测细胞中HMGB1基因在mRNA水平和蛋白质水平的变化,利用四甲基偶氮唑盐法检测转染HMGB1-siRNA的HepG2细胞增殖情况,TdT酶介导的缺口末端标记法检测细胞凋亡情况.两组数据间比较用t检验,组内数据比较用方差分析,细胞增殖数据采用可重复双因素方差分析.结果 3对特异性HMGB1-siRNA转染后,HMGB1 mRNA相对表达量分别为1.147±0.024、1.014±0.042和0.435±0.055,较Lipo组的1.411±0.065明显减少（t值分别为7.187、9.018和20.689,P值均＜0.01）;HMGB1蛋白相对表达量分别为0.369±0.035、0.340±0.028和0.097±0.020,较Lipo组的0.553±0.051明显减少（t值分别为6.678、7.919和17.287,P值均＜0.01）,其中以siRNAH3抑制效果最好,抑制率可达到80%.转染siRNAH3后HepG2细胞的增殖能力受到明显抑制,与Lipo组相比,72、96、120h时F值分别为34.651、540.550、3778.197,P值均＜0.01,HepG2细胞凋亡指数明显增高（F=130.696,P＜0.01）.结论 靶向HMGB1基因的siRNA分子片段可以有效地抑制HepG2细胞生长,促进HepG2细胞凋亡,其作用与下调HMGB1的表达有关,HMGB1可能是肝癌治疗的一个潜在靶点.

摘要：目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响及其对化疗药物敏感性的作用。方法:设计合成特异性survivin的ASODN,脂质体转染肝细胞癌SMMC-7721细胞,透射电镜观察细胞超微结构变化;RT-PCR法检测survivin mRNA的表达变化;FCM法检测对细胞周期、凋亡及survivin蛋白表达的影响;MTT法测定survivin表达抑制前后细胞对吡柔比星、氟苷、顺铂敏感性的影响。结果:ASODN转染后细胞呈现凋亡的形态学改变,survivin mRNA和蛋白表达减弱(P<0.05),诱导SMMC-7721细胞凋亡(P<0.01),细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.05)。ASODN转染组可增加SMMC-7721细胞对吡柔比星、氟苷、顺铂的敏感性(P<0.01)。结论:Survivin ASODN转染能下调survivin表达,诱导SMMC-7721细胞凋亡,提高对吡柔比星、氟苷、顺铂的敏感性。

摘要：目的探讨HBsAg阳性肝细胞肝癌（HCC）细胞基因组中HBVX基因（HBx）所参与整合的位点。方法取6例HBsAg阳性HCC患者癌组织，提取基因组DNA；行酶切、连接操作，针对HBx设计引物，行反向PCR扩增；将产物电泳后切胶回收特异性电泳条带，从中回收DNA并克隆至pMD18-T载体，转化、培养后取菌液行基因测序；用Blast工具进行序列比对。结果反向PCR扩增后，电泳检测可见7条特异性条带；克隆后得到测序结果22个；经序列比对发现3个整合位点，分别定位于19q12、2q32．2、22q12，其中，定位于19q12的基因为CCNE1。结论在HBsAg阳性HCC细胞基因组中存在HBx的整合；19q12、2q32．2、22q12是HBx参与整合的位点，提示HBV整合的CCNE1基因参与了HBsAg阳性HCC的发生和发展。

摘要：目的 探讨p38MAPK磷酸化对HepG2细胞耐药的影响及其意义.方法 采用浓度递增法,建立动态HepG2/顺铂（CDDP）耐药模型,Western blot检测磷酸化p38的表达;予以p38MAPK特异性抑制剂SB203580分别处理24、48、72 h后,流式细胞仪动态分析HepG2/CDDP耐药细胞周期、四甲基偶氮唑盐法检测顺铂对HepG2/CDDP耐药细胞的半数药物抑制浓度（IC50）、Western blot检测HepG2/CDDP耐药细胞凋亡分子Bcl-2、Bax及P-gp蛋白的表达.动态耐药模型磷酸化P38的检测行单因素方差分析; SB203580处理后计量资料行3×3析因设计方差分析,率的比较采用x2检验.结果 成功建立HepG2/CDDP耐药细胞株,其对CDDP的IG50值与对照HepG2细胞差异具有统计学意义（t=99.30,P〈0.01）;随着HepG2/CDDP耐药细胞株耐药表型的增强,P38MAPK活化水平逐渐增强（F=69.39,P〈0.01）.P38MAPK特异性抑制剂SB203580可逐渐降低HepG2/CDDP对顺铂的IC50值（F=2350,P〈0.01）、G0/Gl期细胞比例（x2=520,P〈0.01）、Bcl-2/Bax表达比值（F=83.8,P〈0.01）及细胞膜药物转运相关蛋白P-gP的表达（F=107,P〈0.01）.结论 P38活化水平随着肝癌耐药细胞株耐药表型的增强而逐渐升高;抑制P38的活化可有效逆转肝癌HepG2/CDDP耐药细胞株的耐药性.