摘要：目的筛选有效沉默胎盘特异基因1(Plac1)的小分子干扰RNA(siRNA)序列,并研究其对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法实时定量PCR(qPCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测不同肝癌细胞及正常肝细胞Plac1mRNA及蛋白的表达;设计针对Plac1基因的3条干扰序列(Plac1-siRNA1,Plac1-siRNA2及Plac1-siRNA3)及1条阴性对照(NC-siRNA),转染肝癌细胞HepG2,同时进一步采用qPCR和Western blot分别检测转染后细胞Plac1mRNA及蛋白的表达,采用CCK-8法检测肝癌细胞的增殖能力,Transwell实验检测细胞的迁移能力。结果与正常肝细胞相比,Plac1在肝癌细胞中高表达,其中HepG2的Plac1表达水平最高(P<0.05),以此细胞作为实验模型。3条Plac1-siRNA转染HepG2细胞后,结果显示Plac1-siRNA1的沉默效果最好,能有效下调HepG2细胞Plac1mRNA及蛋白的表达(P<0.05);并且转染后与NC-siRNA组比较,Plac1-siRNA1组的HepG2细胞增殖及迁移能力均明显降低。结论成功设计及筛选能有效沉默肝癌细胞Plac1表达的siRNA序列,并且此序列有效抑制了Plac1的功能。

摘要：目的:探讨如何建立规范化网络信息系统支持的肝癌标本库。方法:选择广东省人民医院肝胆外科2004年1月至2006年10月120例肝癌病例及40例非肝癌病例,通过标准标本收集过程,建立功能完善的肝癌标本数据库。结果:120例肝癌及40例非肝癌病例的血液及组织标本均能按预定设计方案进行相关研究与标本的长期保存;所建立的肝癌标本库做进一步的生物信息学分析和数据挖掘,指导肝癌个体化治疗预测疗效。结论:肝癌标本库的技术路线已经基本成熟和规范,进一步完善肝癌标本的信息化管理将推动肝癌研究的进一步深入。

摘要：目的构建和筛选能高效、特异性抑制人GSK-3β基因表达的siRNA表达载体,探讨其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法提取人L02细胞总RNA,RT-PCR扩增GSK-3β基因序列,克隆至pSEB-HUS真核表达载体,构建pSEB-G重组质粒。将设计、合成的3条靶向GSK-3β基因编码区的siRNA及阴性对照分别克隆至pSEB-G,构建siRNA表达载体pSEB-si1-G、pSEB-si2-G、pSEB-si3-G及pSEB-siN-G。将siRNA表达载体瞬时转染HepG2细胞,通过绿色荧光信号、RT-PCR和Western blot观察和检测其对GSK-3β基因的抑制效果,MTT实验和caspase-3活性分析检测其对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。结果经双酶切及测序证实,所构建si RNA表达载体目的基因大小、序列与预期相符。瞬时转染HepG2细胞后,其中的pSEB-si1-G能使细胞中绿色荧光信号明显减少,可显著抑制GSK-3βmRNA的表达及蛋白的合成,并使HepG2细胞增殖明显降低,caspase-3活性显著升高。结论成功构建了靶向GSK-3β基因的siRNA表达载体,沉默GSK-3β能显著抑制HepG2细胞的生长并诱导其发生凋亡。

摘要：目的探讨三维可视化技术在精准肝切除术前规划中的应用价值。方法回顾性分析2013年1月至2013年12月在南方医科大学珠江医院肝胆一科行精准肝切除的19例肝细胞癌(肝癌)患者临床资料。所有患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。其中男15例,女4例;平均年龄(45±4)岁。患者术前经64排CT扫描,获取亚毫米扫描数据,导入三维可视化软件MI-3DVS中,分别进行图像分割、三维重建、肝脏个体化分段、体积计算、设计虚拟切除平面、制定手术规划。结果全部患者进行了肝脏三维重建、肝脏分段、体积计算,重建肝内血管分支均达到三级以上,能清晰显示肝内各血管系统立体解剖形态、肝脏个体化分段及肿瘤部位、大小、数量。术中所见与术前三维重建符合率100%(19/19)。根据个体化三维重建结果制定术前规划,实际手术过程与术前手术规划符合率100%(19/19)。手术顺利,围手术期无发生死亡,6例术后胸腔积液,经引流治愈。结论三维可视化技术可实现肝脏肿瘤的术前精确诊断,手术规划帮助术中精确操作。

摘要：目的研究特异性下调LKB1的表达对肝癌细胞系SK-hep-1迁移侵袭能力的影响。方法 Real-time PCR和Western Blot检测人肝癌细胞株和人正常肝细胞HL7702中LKB1表达情况。设计并合成LKB1特异性双链小干扰RNA(LKB1-siRNA),转染到高表达LKB1的人肝癌细胞株SK-hep-1中靶向沉默LKB1基因表达,并设置阴性对照组(NC组)。Real-time PCR和Western Blot检测LKB1基因的mRNA水平与蛋白表达水平的变化。利用CCK-8法检测肝癌细胞增殖能力。通过体外Transwell小室基质侵袭和迁移实验,观察LKB1表达沉默后对人肝癌细胞株SK-hep-1侵袭迁移能力的影响。计量资料两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与正常人肝细胞HL7702相比,LKB1基因和蛋白在人肝癌细胞SK-hep-1中高表达(P值均<0.05)。与NC组相比,siLKB1-1处理组SK-hep-1细胞中的LKB1基因和蛋白表达均明显降低(P值均<0.05)。与NC组相比,siLKB1-1转染的SK-hep-1细胞增殖速度明显加快、侵袭和迁移能力明显增强(1.393±0.022 vs 1.128±0.032、147±19 vs 83±21、113±13 vs 75±17;t值分别为15.313、14.879、8.791;P值均<0.001)。结论 LKB1有可能参与抑制肝癌增殖、侵袭迁移的过程并影响肝癌的预后。

摘要：目的：探讨双能量 CT 血管成像（ DECTA）与 DSA 在原发性肝癌经导管化疗栓塞（TACE）术中协同应用的价值。方法前瞻性分析2013年8月—2014年8月复旦大学附属华东医院放射科采用 TACE 术治疗的98例原发性肝癌患者的临床资料，其中男70例，女28例，年龄47-84岁。按照完全随机化分组设计将患者随机分为2组：对照组48例，在 TACE 术前不行 DECTA 检查；观察组50例，在 TACE 术前行 DECTA 检查，并行 VR、最大密度投影（MIP）和多平面重建（MPR）。对2组患者术中查找肿瘤供血动脉数量、术中选用导管数量、对比剂用量、减影采集序列次数、透视时间、手术时间、剂量辐射乘积和超选程度进行对比分析。结果98例均完成检查和 TACE 术。2组TACE 术的超选程度差异无统计学意义（P 〉0.05），但在查找肿瘤供血动脉数量上，观察组（2.72±0.89）条多于对照组（1.88±0.74）条，差异有统计学意义（P 〈0.01）；在选用导管数量、对比剂用量、减影采集序列次数、透视时间、手术时间和剂量辐射乘积方面，观察组均少于对照组，差异均有统计学意义（P 值均〈0.05）。对腹腔动脉变异及肝外寄生血管为肿瘤提供血供的显示，观察组也优于对照组。观察组未出现手术并发症，而对照组中有4例术中出现上腹部急性疼痛。结论 DECTA 与 DSA在原发性肝癌介入治疗中的协同应用是合理、可行的操作方案。