摘要：本试验旨在探究白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)对二硝基氯苯(DNCB)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)氧化损伤的保护作用,并确定抑制白细胞介素-1(IL-1)活性的最佳IL-1Ra浓度。采用完全随机试验设计,将第3代BMEC随机分为12个组,每组6个重复。1组为对照组,利用不含DNCB及IL-1Ra的培养液培养6 h;2~6组是不同剂量的IL-1Ra处理组,分别利用含有1、5、10、20、50μg/L的IL-1Ra培养液培养6 h;7组为DNCB损伤组,利用含有300μmol/L的DNCB培养液培养6 h;8~12组是不同剂量的IL-1Ra保护组,分别利用含有1、5、10、20、50μg/L的IL-1Ra与300μmol/L DNCB培养液培养6 h。结果表明:与对照组相比,经300μmol/L的DNCB作用6 h后,BMEC的相对增殖率(RGR)以及含硒蛋白[硫氧还蛋白还原酶(TrxR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)]、抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]活性与总抗氧化能力(T-AOC)均显著降低(P0.05)。综上所述,IL-1Ra竞争性与IL-1R结合,抑制了IL-1的活性,进而抑制了DNCB引起的BMEC氧化损伤及炎症反应,本试验条件下以10μg/L为适宜浓度。

摘要：本试验以脂多糖(LPS)为刺激源,利用白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)阻断白细胞介素-1β(IL-1β)的生物学活性,探讨壳寡糖(COS)对LPS诱导的奶牛外周血单个核细胞(PBMC)氧化应激损伤的减缓作用。采用单因素完全随机试验设计,将PBMC随机分为8个组,分别为对照组(在不含COS、LPS和IL-1ra的基础培养基中培养72 h)、COS组(在仅含COS的培养基中培养72 h)、LPS组(在基础培养基中先培养48 h,再加入LPS培养24 h)、IL-1ra组(在基础培养基中先培养42 h,再加入IL-1ra培养30 h)、COS+IL-1ra组(在含有COS的培养基中先培养42 h,再加入IL-1ra培养30 h)、COS+LPS组(在含有COS的培养基中先培养48 h,再加入LPS培养24 h)、IL-1ra+LPS组(在基础培养基中先培养42 h,然后加入IL-1ra再培养6 h,最后加入LPS再培养24 h)和COS+IL-1ra+LPS组(在含有COS的培养基中先培养42 h,然后加入IL-1ra再培养6 h,最后加入LPS再培养24 h),每组6个重复。结果显示:与对照组相比,LPS组抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)和硫氧化蛋白还原酶(TrxR)的活性与总抗氧化能力(T-AOC)以及GPx1和TrxR的mRNA相对表达量显著下降(P≤0.05),而诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性,炎症因子IL-1β、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量及其mRNA相对表达量,核因子-κB(NF-κB)p 65的mRNA相对表达量、一氧化氮(NO)与丙二醛(MDA)含量、活性氧簇(ROS)活性均显著升高(P≤0.05),说明LPS诱导的奶牛PBMC氧化应激损伤是由于其激活了NF-κB信号通路,导致炎症因子IL-1β的释放以及iNOS活性和NO含量的增加造成的。与LPS组相比,LPS+IL-1ra组和LPS+COS组的上述抗氧化酶活性及GPx1和TrxR的mRNA相对表达量显著升高(P≤0.05),而上述炎症因子的含量及其mRNA相对表达量以及NF-κB p 65的mRNA相对表达量显著降低(P≤0.05),说明IL-1ra和COS对LPS诱导的奶牛PBMC氧化应激损伤具有相似的预防作用。综上可知,COS通过抑制IL-1β的生物学活性减缓LPS诱导的奶牛PBMC氧化应激损伤,这可能与COS抑制NF-κB信号通路的活性,进而降低IL-1β的释放及NO的生成有关。