摘要：设计并合成一对特异性引物,从ConA激活的卢氏鸡淋巴细胞中扩增IL-21全基因并进行序列测定,应用多种生物学软件对卢氏鸡IL-21基因及其编码蛋白进行分析和三维结构预测。从具有中国地方特色的卢氏鸡中克隆了IL-21全基因。该基因全长438bp,编码145个氨基酸,包括19个氨基酸长度的信号肽,基因位于鸡的4号染色体55218k～55224k之间;编码的蛋白质分子量约16.67kD,为碱性蛋白,具有亲水性,无二硫键。三维结构预测表明:卢氏鸡IL-21蛋白主要由四个α螺旋和不规则卷曲构成,与人IL-21蛋白三维结构相似。同源性分析表明:该序列与其他哺乳动物IL-21的氨基酸相似性低于35%。

摘要：目的利用PCR技术从人扁桃体细胞cDNA中克隆出IL-21编码基因,并将其在原核细胞大肠杆菌中进行表达,并进行了初步纯化。方法以人扁桃体细胞经PHA刺激的cDNA文库为模板,经PCR获得IL-21全基因片段。测序确认后,分别设计含BamHⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,经PCR获得IL-21成熟肽的编码基因。将此IL-21基因插入表达载体pGEX-4T-2,重组克隆经酶切与测序确认后转化大肠杆菌DH5α进行IPTG诱导表达。用琼脂糖珠结合的方法纯化。结果琼脂糖凝胶电泳显示重组质粒的PCR和双酶切产物与理论大小相等。SDS-PAGE显示经IPTG诱导后的大肠杆菌DH5α亦表达一与理论相符的条带。目的蛋白约占总菌体蛋白的10%。并获得了与理论值相符的纯化条带。结论成功地构建了IL-21编码基因克隆载体并获得在原核细胞大肠杆菌中的成功表达,同时建立了该蛋白的琼脂糖珠纯化的方法。

摘要：①目的　利用基因工程技术从人扁桃体细胞cDNA中克隆出白细胞介素 2 1(IL 2 1)的编码基因 ,并在大肠杆菌中进行表达。②方法　以人扁桃体细胞经PHA刺激的cDNA文库为模板 ,经PCR获得IL 2 1的全基因片段。测序确认后 ,分别设计含BamHⅠ和SalⅠ酶切位点的引物 ,经PCR获得IL 2 1成熟肽的编码基因。将此IL 2 1基因插入表达载体 pGEX4T 2 ,重组克隆经酶切与测序确认后转化大肠杆菌DH5α进行IPTG诱导表达。 ③结果　琼脂糖凝胶电泳显示重组质粒的PCR和双酶切产物与理论值的大小相等。SDS PAGE显示经IPTG诱导后的大肠杆菌DH5α亦表达一与理论相符的条带。目的蛋白约占总菌体蛋白的 10 %。④结论　成功地构建了IL 2

摘要：目的在大肠杆菌中表达人IL-21编码基因,并进行蛋白纯化和抗原性分析。方法以经PHA刺激的人扁桃体细胞cDNA文库为模板,经PCR获得IL-21全基因片段。测序确认后,分别设计含BamHⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,经PCR获得IL-21成熟肽的编码基因。将此IL-21基因插入表达载体pGEX-4T-2,重组克隆经酶切与测序确认后转化大肠杆菌DH5α,进行IPTG诱导表达。经琼脂糖珠结合的纯化方法所得产物用WesternBlotting作抗原性分析。结果SDS-PAGE显示经IPTG诱导后的大肠杆菌DH5α表达与理论相符的条带,并获得了与理论值相符的纯化条带,在进一步的Western Blotting分析中发现表达的蛋白能与IL-2的单抗产生结合反应。结论人IL-21编码基因克隆载体在大肠杆菌中成功表达,同时建立了该蛋白的琼脂糖珠纯化方法,通过免疫印迹实验揭示了原核表达的IL-21蛋白与IL-2之间结构的相似性。