摘要：百日咳粘附素(PRN)是无细胞百日咳疫苗的重要保护性抗原之一,优化其浸提工艺对提高PRN产量、纯度乃至百日咳疫苗的质量都具有重要意义.通过中心复合表面设计(CCF)响应面模型和ELISA定量分析相结合的方法研究了影响PRN浸提工艺的关键因素.经两轮CCF响应面优化,确定了PRN浸提的最优工艺参数:温度60℃,菌浓度50 mg/mL,时间90 min,p H 8.5,NaCl 0.15 mol/L;通过Monte Carlo模拟和Plackett Burman模型设计预测和验证了工艺稳健性参数范围:温度58-62℃,菌浓度40-60 mg/mL,时间80-100 min,pH 8.45-8.55,NaCl 0.12-0.18 mol/L.响应面优化后,粗提液PRN产量提高了50%.研究表明,温度对PRN浸提影响最大,其次是pH;菌浓度、时间及NaCl含量的影响相对较小,但与温度、pH有交互作用.

摘要：目的融合表达百日咳丝状血凝素(filamentous haemagglutinin,FHA)片段FHA1877-2250与志贺毒素B亚单位(Shiga toxin B subunit,StxB)蛋白,并对融合蛋白StxB-Fha1877-2250的免疫保护效果进行评价。方法设计引物将StxB片段连接至FHA1877-2250N-端,构建重组表达质粒pET-28a-FHA1877-2250和pET-28a-StxB-Fha1877-2250,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍柱亲和层析和复性后,通过皮下免疫小鼠,共3次,间隔2周。末次免疫后10 d,尾静脉采血,间接ELISA法检测血清抗体效价;血清体外杀菌试验检测杀菌效率;末次免疫后第14天,经腹腔接种2倍半数致死剂量(1.21×108CFU)的百日咳Bp148株菌液,评价动物攻毒保护效果。结果重组表达质粒经菌落PCR和测序证实构建正确。表达的重组蛋白FHA1877-2250、StxB-Fha1877-2250经SDS-PAGE和Western blot分析显示,相对分子质量分别约为43000和51000。StxB-Fha1877-2250免疫小鼠血清抗体效价可达1∶3200。StxB-Fha1877-2250组的血清杀菌效率比FHA1877-2250组略好。以百日咳Bp148菌株攻毒,FHA1877-2250、StxB-Fha1877-2250蛋白对免疫小鼠具有保护力,保护率分别为40%和60%。结论重组融合蛋白StxB-Fha1877-2250相比于FHA1877-2250具有更好的免疫原性和保护效果,为百日咳亚单位疫苗的研究提供了新的思路。

摘要：目的分析新型冠状病毒肺炎(以下简称新冠肺炎)疫情防控措施实施前后山东大学附属儿童医院儿童百日咳就诊趋势的变化,以了解新冠肺炎防控措施对儿童百日咳就诊趋势的影响。方法基于2018年1月1日-2021年12月31日山东大学附属儿童医院感染性疾病科每月门诊量和上报山东省疾病预防控制中心的儿童百日咳数据资料,以我国2020年2月后采取隔离、戴口罩等新冠肺炎防控措施为基准,分为新冠肺炎防控措施实施前(2018年1月-2020年1月)、实施后(2020年2月-2021年12月)两个时间点,采用断点回归设计对防控措施实施前后儿童百日咳就诊趋势进行分析。结果2018-2021年山东大学附属儿童医院共报告儿童百日咳737例,总报告率为0.334%。防控措施实施前百日咳报告率为0.463%,防控措施实施后百日咳报告率为0.117%。与防控措施实施前相比,防控政策的实施后4岁及以下年龄组儿童就诊构成比下降14.647%,散居儿童就诊构成比下降4.555%,儿童春季就诊构成比下降14.849%,儿童夏季就诊构成比下降23.941%。与防控措施实施前相比,防控措施实施后1月份和3-11月每月儿童百日咳就诊构成比下降,差异均有统计学意义(P<0.001),而在2月份(χ^(2)=0.158,P=0.691)和12月份(χ^(2)=0.002,P=0.960)无统计学意义。断点回归结果提示,百日咳就诊构成比在防控措施实施节点处出现明显向下的跳跃,瞬时降低0.501%(95%CI:-0.971~-0.144),差异具有统计学意义(P=0.016)。结论新冠肺炎防控措施实施后,儿童百日咳报告人数和报告率下降。

摘要：目的建立快速、准确、特异的定量检测百日咳杆菌的方法，并进行临床应用研究。方法根据百日咳杆菌IS481基因序列，设计并合成引物和荧光探针，建立百日咳杆菌荧光定量PCR检测方法，并对方法的特异度、重复性和灵敏度进行评价，检测百日咳疑似患者咽拭子225份和健康者咽拭子30份。结果该方法的标准曲线显示模板浓度在10^2-10^8拷贝／μl线性范围与其循环阈值（Ct）具有较好的线性关系，相关系数（r）为0．998，最小检出量为10^2拷贝。特异度较好，灵敏度较高，重复性实验结果显示在同一时间检测高低浓度阳性克隆质粒（2×10^7与3×10^3拷贝／μ1）10次，连续检测5次，变异系数（CV）为5．78％-16．7％。在不同时间检测高低浓度阳性克隆质粒（2×10^7与3×10^3拷贝／μl），连续7次，CV为8．25％～14．9％。经检测，疑似患者的咽拭子有41份样本为阳性，30份健康人咽拭子均为阴性。结论由于本实验建立的荧光定量PCR方法快速、灵敏度高、特异度好，适合临床实验室进行临床标本的百日咳杆菌的定量检测，有较大的应用前景。

摘要：目的建立一种具有高敏感性、高特异性的百日咳鲍特菌聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法以百日咳鲍特菌插入序列IS481为目的基因,通过Primer5.0软件设计巢式PCR(Nested PCR,nPCR)外引物,并优化扩增条件和程序,结合IS481目的基因的检测方法,建立nPCR结合Real-time PCR(rPCR)检测百日咳鲍特菌的方法,应用于354份流感样病例标本核酸检测和34份临床疑似百日咳病例标本核酸检测。结果该结合检测方法的最低检出限为0.225 copies/μL,能同时检测百日咳鲍特菌和霍氏鲍特菌,其他参考菌株均呈阴性,具有较好的特异性,进一步通过rPCR区分霍氏鲍特菌。采用该结合检测技术,354份流感样病例核酸标本中17份百日咳鲍特菌阳性,34份临床疑似百日咳病例核酸标本中12份百日咳鲍特菌阳性,而单独针对百日咳鲍特菌的rPCR方法分别仅检测出1份和6份阳性,rPCR检出的阳性标本,本方法均可检出。结论基于IS481基因的nPCR结合rPCR方法可用于百日咳鲍特菌的检测,具有较高的敏感性和特异性特点。

摘要：本文综述了毒素产生的基因修饰和选择性位点特异性类似物分析以及它们用于制备高限性、非反应原性重组全类毒素菌苗的可能性。 许多研究工作者认为,PTX是百日咳菌苗的一种重要成分。也已公认化学或热处理的脱毒方法能消除PTX的反应原物质并导致保护性免疫原性的丧失。我们相信能够消除这种变性的蛋白结构基因工程,在合理设计新百日咳类毒素方面能具有极有意义的影响。

摘要：疫苗是预防百日咳(pertussis)的最有效措施,但无细胞百日咳疫苗接种后免疫力的迅速衰退是近年来百日咳发病率上升的原因之一。百日咳毒素(pertussis toxin,PT)是由百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)分泌的主要毒力因子,具有多种生物学活性。在无细胞百日咳疫苗设计初期,为确保疫苗的有效性,抗PT的单克隆抗体(单抗)常被用来检测PT表面重要的抗原表位。研究表明,与天然PT特异性结合的部分单抗无法识别经化学方法脱毒后的PT,提示化学脱毒会改变疫苗中PT的一些抗原表位,进而影响疫苗保护效果。现结合单抗可用来研究抗体干扰PT功能的分子机制,对机体在感染百日咳后的保护性免疫机制进行综述,以期为无细胞百日咳疫苗的进一步改进及开发人源化抗PT单抗治疗百日咳提供科学依据。

摘要：目的分析2010年1月1日～2012年12月31日天津市宁河县百日咳流行病学特征及病例直接花费情况,为下一步预防和控制百日咳提供参考依据。方法利用描述流行病学方法,采用Excel 2003对2010年1月1日～2012年12月31日天津市法定传染病报告系统百日咳个案调查资料进行统计学分析,利用天津市疾病预防控制中心设计的＂百日咳病例疾病负担调查表＂中数据分析病例花费情况。结果 2010～2012年天津市宁河县共报告16例百日咳,平均发病率为1.28/10万;夏秋季高发,6～10月的病例占81.2%;87.5%的病例发生在农村地区;发病年龄最小的为1月龄,最大的为28岁,〈1岁的病例占62.5%,发病率明显高于大龄儿童及成人;16例百日咳中,5例有免疫史,7例未到接种月龄,4例无免疫史;发病至初次就诊时间间隔中位数为13 d;11例为实验室诊断病例,5例为临床诊断病例,临床表现以痉挛性咳嗽、呕吐、口唇青紫等为主,有5例合并支气管肺炎;共有12例住院病例,二、三级医疗机构各6例,住院病例平均花费8 846元。结论农村地区百日咳发病率较高,应提高免疫服务质量并加强百日咳预防知识的宣传。婴幼儿监护人如有咳嗽等相关症状应积极就诊,降低病原传播风险。应加强百日咳的预防和控制,以减轻家庭的经济负担。

摘要：目的探讨孟鲁司特治疗小儿百日咳的疗效。方法选取我院感染科2017年1月~2018年1月收治的132例>3月龄百日咳患儿,根据随机配对设计,分为治疗组和对照组,治疗组在常规治疗基础上加用孟鲁司特口服。比较两组患儿的临床表现、住院时间、住院费用及两组的总有效率。结果治疗组患儿治疗后痉挛性咳嗽持续时间、鸡鸣样回声持续时间、咳嗽后呕吐持续时间、发作性青紫持续时间、肺部啰音消失的时间、住院时间均较对照组短(P<0.05)。治疗组显效率及有效率高于对照组(P<0.05)。结论在常规治疗的基础上,加用孟鲁司特口服,治疗百日咳,可减轻患儿的痉挛性咳嗽,从而减轻患儿痛苦。该药口感好,口服方便、安全,易于接受,方便推广。

摘要：目的了解贵州省百日咳监测点医务人员对百日咳防治知识的知晓情况。方法采用自行设计的调查问卷,在百日咳监测点专题项目培训前开展调查,调查结果使用Excel 2003进行统计分析。结果现场调查49人,发放问卷49份,收回有效问卷48份,对百日咳主要传染源、主要传播模式、接种疫苗免疫持久性和潜伏期的知晓率分别是95.83%、70.83%、79.17%和58.33%。对4种百日咳的主要临床表现(持续咳嗽2周及以上,阵发性、痉挛性咳嗽,咳嗽伴高调吸气尾音,没有其他明显诱因的咳嗽后呕吐)知晓3项及以下的占47.92%,知晓4项的占52.08%。对5项百日咳诊断依据(流行病学、临床表现、细菌培养、血常规检测和核酸检测)知晓4项及以下的占60.42%,知晓5项的占39.58%。未正确选择治疗百日咳的抗生素的占18.75%,不知晓预防药物的占47.92%。百日咳相关知识主要来源于教科书和行业标准的分别占79.17%和25.00%。95.83%的医务人员认为有必要规范开展百日咳监测。结论贵州省百日咳监测点医务人员对百日咳防治知识的知晓率不高,贵州省亟需制定百日咳监测方案并规范实施。