摘要：旨在建立快速、简便的兔斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫直接pcr检测方法。首先克隆斯氏艾美耳球虫线粒体基因组mtDNA和3种兔球虫顶质体基因rpoB,结合GenBank中收录的其它兔球虫的相关序列进行比对分析,然后以种间差异明显的序列为靶基因在其超变区设计多对特异性引物,同时对引物浓度等条件进行优化,并评价pcr方法的敏感性和特异性。本研究首次测定了斯氏艾美耳球虫线粒体基因组全序列和3种兔球虫顶质体基因rpoB的序列,斯氏艾美耳球虫mtDNA全长6277 bp,包括3个蛋白质基因,与其它6种兔球虫mtDNA序列相似率为93.90%~97.45%;斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫顶质体基因rpoB大小在500 bp左右,三者相似性达93.93%~95.30%。靶基因筛选结果表明3种兔球虫ITS与其它基因(rpoB和mtDNA)相比较具有种内保守和种间差异大的特点,更适合用于分子诊断;基于3种兔球虫ITS序列的引物中,Ps1、Pi2、Pm2在单一或多重检测时均具有良好的特异性和敏感性。本试验通过对艾美耳球虫pcr检测候选基因靶标(ITS、mtDNA和rpoB)进行序列分析,筛选ITS为兔球虫种间差异明显的检测靶标基因,在此基础上建立的单一直接pcr方法和多重直接pcr方法具有特异、敏感、操作简便的优点,可用于3种兔球虫的流行病学调查或兔球虫病临床诊断。

摘要：为建立伊氏锥虫动基体DNA(KinetoplastDNA,kDNA)的pcr扩增技术,血液直接pcr法检测伊氏锥虫的感染,本文以伊氏锥虫kDNA片段为靶扩增DNA设计引物,确定最适pcr反应条件,建立kDNA片段的pcr扩增技术,应用直接扩增缓冲液(Ampdirect)从感染小鼠的滤纸血标本直接pcr检测伊氏锥虫。结果发现,pcr扩增伊氏锥虫kDNA片段分子量为364bp,能检测的最小DNA量是0·06pg,与布氏锥虫、活动锥虫没有交叉反应。应用直接扩增缓冲液不需进行样本的DNA抽提,直接pcr能检测感染小鼠的早期滤纸血样本,敏感性高于镜检法。本实验建立的直接pcr法检测伊氏锥虫具有较高的敏感性和特异性,方法快捷,可进一步应用于伊氏锥虫病的早期诊断以及现场调查。

摘要：目的建立一种基于直接TaqMan-pcr的无创多重单核苷酸多态性分型技术用于高通量检测与脂质代谢相关的rs688和rs964184位点,以满足风险人群快速筛查的需求。方法采用提取的DNA对设计的TaqMan探针进行pcr退火延伸温度和扩增程序的优化;将口腔拭子放入样品处理液后进行短暂震荡和离心,取少量上清进行直接qpcr扩增分析;探索探针冻融稳定性和样品保存时间对分型结果的影响。结果本方法仅需对口腔拭子样本简单处理后即可进行qpcr分析,并且可在室温情况下保存4 d。优化后的方法能够较好地区分rs688和rs964184位点的野生纯合子、突变纯合子及杂合子。结论建立了一种快速便捷、高通量、低成本的SNP分型新技术,为大规模筛查携带易感基因的风险人群提供了高效且准确的新方法。

摘要：为了解河南省猪圆环病毒2型(PCV2)的流行病学情况,参考Gen Bank的PCV2 ORF2的序列,设计1对引物,建立PCV2的快速直接pcr检测方法,并进行特异性和敏感性试验。运用该方法对2016年5月至2017年5月采集到的河南省共125份疑似猪圆环病毒2型的病料进行PCV2检测,阳性样品测序,分析河南省PCV2的遗传变异情况。结果显示,建立的pcr检测方法快速、特异、敏感,适用于临床检测或流行病学调查;所检测的125份样品中,55份样品为PCV2阳性,阳性率高达44%。阳性结果序列分析显示,核苷酸序列同源性在88.7%~99.8%,42份在PCV2b基因群。结果表明,河南省PCV2感染率较高,PCV2b为流行血清亚型,病毒变异严重。

摘要：目的:建立一种快速、简便且无需核酸提取的泰国型α缺失地中海贫血的快速基因诊断方法及其在产前诊断中应用。方法:设计可以扩增α-珠蛋白基因簇中--THAI等位基因的特征序列引物组,直接以待测样本为模板,不需要核酸提取,进行聚合酶链反应(pcr)直接扩增,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳即可分析结果。结果:成功建立泰国缺失型地中海贫血的快速基因诊断方法,并且直接以全血、羊水、干血斑、脐带血为模板进行扩增的结果与常规跨越断裂点聚合酶链反应(gap-pcr)技术确定基因型完全一致。结论:该法不需要提取核酸,减少操作步骤与实验室污染、节约成本、快速、准确,可作为常规方法用于临床样品的地中海贫血分子基因检测及巴氏水肿胎和缺失型HbH病的产前诊断及泰国型α-地中海贫血的产前诊断新方法。