摘要：目的设计具有更高生物学活性的睫状神经营养因子突变体,并对其进行表达、纯化及生物学活性检测。方法以计算机分子模拟系统设计突变体,重叠延伸PCR方法获得突变体的编码区DNA序列,克隆入表达载体pThioHisA,转化***21,以IPTG诱导表达。复性纯化后,用鸡胚背根神经节无血清培养法和小鼠减重法进行生物学活性测定。结果目的蛋白以包涵体形式存在,表达量在35%以上,纯化后的纯度达95%以上,能有效地促进鸡胚背根神经节的生长,并能使正常小鼠的体重降低,脂肪指数下降。结论所设计的突变体经表达及纯化后,具有良好的生物学活性,为进一步研究突变体蛋白的促神经生长和减肥作用奠定了基础。

摘要：为了进一步研究应用计算机分子模拟设计并表达纯化的睫状神经营养因子突变体蛋白的生物学活性,分别采用鸡胚背根神经节无血清培养法、TF-1细胞增殖法、正常小鼠减重法对其活性进行研究。结果表明突变体蛋白能促进鸡胚背根神经节的生长;促进TF-1细胞增殖,MTT测定法表明突变体蛋白与国际参考品相比,比活不低于2.0×106U/mg;使正常小鼠的体重减轻,摄食量减少,脂肪指数下降,并且体重的减轻与突变体蛋白的给药剂量呈现良好的剂量依赖关系,其ED50为:150.986μg/(kg·d)。以上实验表明CNTF突变体蛋白具有促神经生长、促TF-1细胞增殖和减重的生物学活性,为其进一步的应用和开发提供了依据。

摘要：背景:在干细胞异体移植时神经细胞的低存活率成为异体细胞移植失败的主要诱因。核因子κB是细胞信号传导的主要转录因子之一,参与细胞的增殖和分化过程。目的:观察睫状神经营养因子和丹参注射液联合诱导肌源性干细胞向神经元样细胞的分化情况,以及分化过程中核因子κB的表达。设计、时间及地点:细胞学基因水平实验,于2008-03/05在辽宁医学院附属第二医院口腔科学实验室完成。材料:新生7d龄SD乳鼠10只,由辽宁医学院实验动物中心提供。睫状神经营养因子为Sigma公司产品,丹参注射液购自正大青春宝药业有限公司。方法:体外分离培养鼠肌源性干细胞,差速贴壁法和酶消化法纯化后接种于6孔板内,诱导组用含睫状神经营养因子的DMEM预诱导24h,更换培养液,洗涤3次,再加入含丹参注射液的无血清DMEM诱导5h;对照组使用无血清DMEM培养基处理。主要观察指标:RT-PCR及Western　blotting法检测神经丝蛋白、核因子κB抑制蛋白的表达。结果:诱导前肌源性干细胞未见神经丝蛋白表达,诱导后的神经元样细胞神经丝蛋白呈阳性表达。凝胶电泳及Western　blot检测结果显示,与诱导前比较,诱导后对照组核因子κB抑制蛋白的表达无明显变化,诱导组核因子κB抑制蛋白的表达明显下降。结论:睫状神经营养因子和丹参注射液可联合诱导肌源性干细胞分化为神经元样细胞,分化过程中核因子κB的活化被抑制。

摘要：背景:睫状神经营养因子(CNTF)对失神经支配骨骼肌萎缩有防治作用,但是否可以应用CNTF基因转染方法延缓失神经支配骨骼肌萎缩尚不清楚。目的:探索一次性电穿孔介导CNTF转染延缓失神经骨骼肌萎缩的疗效。设计:随机对照研究。地点和对象:在上海交通大学附属第一人民医院动物房完成,雄性SD大鼠36只,年龄两三个月,体质量250～300g,由上海中科院实验动物中心提供。干预:制备36只大鼠右下肢腓肠肌失神经支配模型,随机平均分成失神经对照组,CNTF基因转染组。两组于术后2,4,8周分别取6只大鼠进行实验评价。主要观察指标:两组术后2,4,8周肌湿重维持率、肌细胞截面积、肌肉蛋白含量、胶原纤维与肌细胞面积比和细胞凋亡数。结果:2周和4周CNTF基因转染组的肌湿重维持率、肌细胞截面积和肌肉蛋白含量均明显高于失神经对照组(P0.05)。结论:一次性电穿孔介导CNTF基因转染可延缓失神经骨骼肌萎缩4周。

摘要：背景:与体能素质有关的基因研究表明:辅肌动蛋白3基因(ACTN3)、α2A肾上腺素能受体基因(ADRA2A)和睫状神经营养因子(CNTF)基因3种基因分别与个体的速度素质、耐力素质和力量素质可能相关。目的:检测中国汉族男性新入伍军人ACTN3、ADRA2A和CNTF基因的遗传多态性,分析ACTN3、ADRA2A、CNTF基因多态性分别与速度、耐力和力量素质的相关性。设计:调查分析。时间及地点:实验于2007-10在解放军第四军医大学基因实验室完成。对象:分别从某两战区3个步兵师随机选取的2007年度中国汉族男性新入伍军人326名,平均年龄(18.82±0.88)岁。方法:入选326名士兵均无训练史,113名进行18周短跑训练,测试训练后的百米成绩。108名进行18周的有氧耐力训练,测试训练后5000m跑的成绩。105名进行18周常规新兵入伍力量性训练,测试训练后的握力体质量指数。主要观察指标:①用荧光定量聚合酶链反应法分析ACTN3基因的多态性。②DNA测序分析ADRA2A基因的G6412C、T6623A、C6645C3个位点的多态性。③用荧光定量聚合酶链反应法分析CNTF基因的多态性,分析握力体质量指数与基因多态性的关系。④3种基因分别与速度素质、耐力素质和力量素质的相关分析。结果:①3种基因的多态位点分布频率均符合Hardy-Weinberg平衡。ACTN3基因C/T、C/C基因型显著性多于T/T基因型(P0.05)。未发现G6412C、C6645C单点多态性与耐力素质有明显的相关性。③CNTF基因G/G基因型群体显著性多于A/G、A/A。CNTF多态性与力量素质未见显著性相关性(P=0.16)。结论:①ACTN3基因多态性可作为预测个体速度素质的基因标记。②ADRA2A基因位点T6623A多态性可作为耐力素质的基因标记,而位点G6412C和C6645C多态性不是预测个体耐力素质的基因标记。③CNTF基因可以作为CNTF基因A/G多态频率分布的代表,其多态性不能作为中国汉族男性新入伍军人预测个体力量素质的基因标记。

摘要：背景:多项研究已证实嗅鞘细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚。目的:观察嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠大脑运动皮质神经营养因子胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子mRNA表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-12在昆明医学院神经科学研究所完成。材料:清洁级健康成年雌性SD大鼠88只,随机分成3组:假手术组8只、模型组40只、细胞移植组40只。另取新生一两天的GFP转基因小鼠5只用于分离培养嗅鞘细胞。方法:模型组、细胞移植组大鼠建立T9脊髓全横断损伤模型,假手术组仅行T8椎板切除。造模后,细胞移植组吸取嗅鞘细胞悬液15μL(约3×105个细胞)滴加到约2mm3的明胶海绵上,将含有嗅鞘细胞的明胶海绵植入大鼠脊髓两横断面之间的间隙处。分别于移植后3,7,14,21,28d取大脑运动皮质行RT-PCR检测。主要观察指标:采用免疫细胞化学法对培养的嗅鞘细胞进行鉴定,RT-PCR法检测大脑运动皮质胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子mRNA的表达变化。结果:培养的嗅鞘细胞p75-NGFR阳性率>90%,主要为双极细胞,突起较长。与假手术组比较,模型组术后3d睫状神经营养因子表达明显升高,7,14,21d降至无明显差异,至28d明显降低(P0.05)。与模型组比较,移植后14d细胞移植组胰岛素样生长因子1表达明显增多(P<0.05);移植后3d睫状神经营养因子的表达明显减少(P<0.05),但移植后7,14,21d表达逐渐回升,至28d明显高于模型组水平(P<0.05)。结论:嗅鞘细胞移植能够促进脊髓损伤修复,其机制可能与促进大脑运动皮质胰岛素样生长因子1mRNA的表达上调,并在初期抑制睫状神经营养因子mRNA的表达有关。

摘要：采用PCR定点突变技术对睫状神经营养因子(CNTF)基因进行改造,获得了CNTF衍生物(CNTF-D)基因序列分析证明其核苷酸序列符合设计要求,并在大肠杆菌中获得高效表达,CNTF-D表达量超过40%,复性后,经Q-Sepharose HP纯化,其纯度超过95%,体内法测定发现能明显降低实验小鼠的体重。表明CNTF-D在体内具有良好的生物学活性,为下游开发奠定了基础。

摘要：目的:探讨TAT-tCNTF、TAT48-58、rhCNTF对Aβ损伤/非损伤SH-SY5Y细胞模型的GSH水平和SOD酶活性的影响,以分别评价其抗氧化应激效应。方法:采用析因设计研究经TAT-tCNTF、TAT48-58和rhCNTF处理后,Aβ损伤/不损伤的SH-SY5Y细胞模型的GSH水平和SOD酶活性;采用单因素多水平设计五个浓度水平的TAT48-58对SH-SY5Y细胞的GSH水平和SOD酶活性。结果:不同蛋白类型对GSH水平和SOD活性影响的结果分别为F=11.13,P<0.000 1和F=10.18,P<0.000 1。TAT-tCNTF与SH-SY5Y共孵育后损伤和非损伤模型的SOD活性和GSH水平分别为(0.57±0.01)%,(0.61±0.02)%和(5283±578)U.L-1,(6394±173)U.L-1。加入不同TAT48-58浓度对SH-SY5Y细胞的SOD活性和GSH含量影响方差分析FSOD=1.86,P=0.156 6,FGSH=1.55,P=0.261 7。结论:TAT-tCNTF能提高Aβ损伤的SH-SY5Y细胞模型的GSH水平和SOD活性的效应,TAT48-58不能引起细胞内氧化应激作用。