摘要：试验旨在探究短乳杆菌R33对苜蓿半干青贮的营养成分、发酵品质和微生物群落的影响,以提高苜蓿半干青贮品质。试验采用单因素完全随机设计,短乳杆菌(活菌数1×10^(9) CFU/mL)添加水平分别为苜蓿鲜重的1%(T1%)和5%(T5%),同时设置不加菌对照组和仅加无菌培养基对照组,室温青贮30 d后取样分析。结果表明:添加短乳杆菌R33可降低苜蓿青贮的pH和总碳量(P0.05);添加短乳杆菌后改变了微生物群落组成(P<0.05),降低了菌群多样性(P<0.05);在门水平上,使厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度升高,变形菌门(Proteobacteria)相对丰度降低;在属水平上,添加短乳杆菌后乳杆菌属(Lactobacillus)占比均超过95%。因此,添加短乳杆菌R33可以改善半干苜蓿青贮发酵品质,促进有益微生物增殖,提高苜蓿青贮品质。

摘要：胸苷磷酸化酶在核苷类物质合成中具有重要作用,本研究以短乳杆菌为胸苷磷酸化酶生产菌种,对短乳杆菌产胸苷磷酸化酶发酵培养基进行优化。首先通过Plackett-Burman设计筛选出影响短乳杆菌产胸苷磷酸化酶的3个较为重要因素:发酵时间(P=0.030)、接种量(P=0.033)和葡萄糖浓度(P=0.019)。在此基础上采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,并利用响应面中心组合设计对影响显著因素进行优化,得到最适培养基组成成分和培养条件为:发酵初始pH 8.0,葡萄糖18 g/L,酵母膏15 g/L,NaCl 7.5 g/L,蛋白胨10 g/L,胸苷15 mmol/L,摇床转速110 r/min,发酵温度38℃,发酵时间10.57 h,接种量1.54%。在此优化条件下,短乳杆菌产胸苷磷酸化酶能力得到了很大提高,短乳杆菌胸苷磷酸化酶活从0.400 U/mg湿菌体提高到1.172 U/mg湿菌体,比优化前提高了2.93倍。蛋白质凝胶电泳分析显示经优化后每克湿菌体胸苷磷酸化酶的含量明显高于优化前。

摘要：采用响应面法对短乳杆菌产尿苷磷酸化酶发酵培养基及发酵条件进行优化。以葡萄糖酵母膏培养基为基础培养基,通过单因素和Plackett-Burman设计法确定促进尿苷磷酸化酶合成的4个较为重要的有效因子:葡萄糖(P=0.002)、酵母粉(P=0.054)、磷酸根(P=0.059)和尿苷(P=0.001);在此基础上采用最陡爬坡试验逼近最大响应区域,并利用Box-Behnken设计对影响显著因素进行优化,得到最适培养基组成和培养条件为:NaCl 5g/L、葡萄糖18.30g/L、酵母粉15.71g/L、蛋白胨15g/L、磷酸根3.99g/L、肌苷20mmol/L、尿苷21.38mmol/L、初始pH8.0、摇床转速110r/min、发酵温度32℃、培养时间14h、接种量1.0%。在此优化条件下,短乳杆菌产尿苷磷酸化酶能力达到1.325U/mg,较优化前(0.883U/mg)提高了50.0%。

摘要：对实验室自制泡菜中分离到的短乳杆菌进行生长特性研究,并采用响应面分析对影响短乳杆菌增殖的发酵培养基进行优化。首先采用PB实验筛选影响短乳杆菌增殖的显著因素,利用最陡爬坡实验逼近最大增殖区域,最后应用中心组和设计和响应面分析确定短乳杆菌高密度培养的最佳优化培养基成分为(%W/V):MRS基础培养基、乳糖0.2、大豆蛋白0.53、番茄汁0.4、胡萝卜汁1.04、醋酸钠0.05、碳酸钙0.125、磷酸氢二钠0.075,乳酸菌高密度培养活菌数可达5.21×109cfu/mL。

摘要：以磷酸吡哆醛为辅酶的谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD),能专一、不可逆地催化L-谷氨酸脱去α-羧基生成γ-氨基丁酸。为了提高GAD热稳定性为目标,本研究通过与嗜热古细菌Thermococcus kodakarensis中GAD氨基酸序列的比对及引入脯氨酸策略,最终在短乳杆菌Lactobacillus brevis CGMCC No.1306的GAD突变体中筛选得到热稳定性提高的突变酶G364P。结果显示,突变酶G364P在55℃的半衰期以及半失活温度分别比野生酶提高19.4 min和5.3℃,并且突变酶G364P的催化效率与野生酶相比没有明显变化。此外,利用分子动力学模拟来验证突变对蛋白质热稳定性的影响,突变酶G364P的均方根偏差(Rootmeansquare deviation,RMSD)以及含G364的loop区域均方根涨落(Root mean square fluctuation,RMSF)均比野生酶低,引入脯氨酸增加了364位氨基酸与相邻氨基酸的疏水相互作用。文中通过引入脯氨酸成功提高了L. brevis中GAD的热稳定性,同时也为其他酶热稳定性的理性设计提供了方法学指导。

摘要：【目的】制备短乳杆菌微胶囊,并对其特性进行检测,以期在一定时间范围内延长短乳杆菌微生态制备的保存期,减少短乳杆菌通过胃肠道的损失。【方法】采用微包囊技术,以短乳杆菌为模型菌株,设计L9(34)正交试验,筛选制备短乳杆菌微胶囊的最佳配方,并检测短乳杆菌微胶囊的特性。【结果】制备短乳杆菌微胶囊的最佳配方为:海藻酸钠20 g/L,氯化钙30 g/L,m(菌液)∶m(海藻酸钠)=1∶3,壳聚糖20 g/L。制备的短乳杆菌微胶囊呈球形,粒径为227μm,包囊效率为89.7%,能够耐受85℃高温、人工胃液和肠液,恒温保存3个月活菌数量仍达1×108cfu/g以上。【结论】制备的短乳杆菌微胶囊保存期延长,在胃、肠道内的损失降低。

摘要：为实现啤酒及啤酒生产中短乳杆菌的快速筛查,建立实时荧光环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法特异性检测短乳杆菌。通过多序列分析比对,选择短乳杆菌特异性基因序列设计3套引物。经引物筛选和反应温度优化,建立快速检测短乳杆菌的实时荧光LAMP方法,并以车间关键控制位点验证方法的适用性。结果显示,1号引物组能够在等温65 ℃、30 min内完成实时荧光LAMP检测。反应特异性强、灵敏度高。对4株目标菌株和18株非目标菌株进行检测,未出现假阳性和假阴性结果;纯菌液灵敏度可达10^(2) cfu/mL,优于同期实时荧光PCR灵敏度10倍。车间关键控制污染点检测结果与传统培养法及测序结果相符。建立的实时荧光LAMP方法将为啤酒及啤酒生产中短乳杆菌快速筛查提供有力支持。

摘要：γ-氨基丁酸(GABA)也称氨酪酸,是一种重要的抑制性神经递质,它参与多种代谢活动,具有很高的生理活性。本实验采用单因素、正交设计和SAS响应面分析的方法对以MRS为基础的GABA发酵培养基进行了优化,确定了葡萄糖为最适碳源,黄豆粉和玉米浆为混合氮源,并确定了葡萄糖、黄豆粉和玉米浆的最佳发酵培养基添加量,使GABA产量达到了27.12g/L,比原始培养基的14.03g/L提高了93.30%。

摘要：目的:为检测短乳杆菌gyrB基因序列。方法:设计两对简并引物对3种啤酒污染乳酸杆菌进行PCR扩增,获得短乳杆菌部分目的基因片断。并将该片断克隆至pGEM-T Easy载体,经限制性内切酶分析和测序获得短乳杆菌gyrB基因部分序列。结果:通过对序列进行进化树分析,发现该序列与啤酒典型污染菌植物乳酸杆菌gyrB序列相似性较高。结论:短乳杆菌gyrB序列对于建立啤酒中短乳杆菌快速检测具有十分重要的意义。

摘要：目的:建立鉴定短乳杆菌的实时荧光定量PCR法。方法:根据GanBank登录的乳酸杆菌序列,以gyrB基因为靶目标设计引物和探针,对啤酒中分离到的6株乳酸杆菌进行实验,并对其中一个短乳杆菌样本作定量检测。结果:实时荧光定量PCR对短乳杆菌可产生特异扩增信号,对其他乳酸杆菌无响应。标准曲线的相关系数为0.97739,测得短乳杆菌样本浓度为15635拷贝/m l。结论:实时荧光定量PCR是一种快速、特异、灵敏检测短乳杆菌的方法。