摘要：目的:构建针对衔接蛋白2的μ2亚单位(AP2-μ2)的短链干涉rna(si rna)及其表达载体,转染细胞后观察其对AP2-μ2基因的干涉作用。方法:设计AP2-μ2靶向的发夹状si rna,据此设计合成3条互补的寡核苷酸链,退火后分别连接到pSilencer3.1neo H1载体,转化扩增后进行序列测定。待转染细胞分为对照组、Scramble plasmid、AP2plasmid-1、AP2plasmid-2和AP2plasmid-3组。用脂质体转染法将3组si rna重组质粒与阴性对照质粒(Scramble plasmid)转染大鼠心肌细胞株H9C2,通过RT-PCR法检测AP2-μ2基因表达水平的变化。结果:合成的6条寡核苷酸单链凝胶电泳显示多个电泳条带,分别退火后,产物经凝胶电泳显示形成单一条带。双链DNA模板与载体质粒连接后,用BamHⅠ和HindⅢ双酶切,凝胶电泳可见4300和66bp的酶切片段。DNA测序连接的核酸序列与设计序列一致,表明AP2-μ2基因的3条si rna载体构建成功。RT-PCR检测,在AP2plasmid-1组,转染的H9C2细胞中AP2-μ2的基因表达水平较阴性对照组降低约96%。结论:成功地构建了针对AP2-μ2基因的3条si rna载体,其中AP2plasmid-1转染细胞后可显著抑制AP2-μ2基因表达。

摘要：目的构建针对细胞内氯通道4(CLIC4)的短链干涉rna(sirna)及其表达载体,转染细胞后观察其对CLIC4基因的干涉作用。方法设计CLIC4靶向的发夹状sirna,据此设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接到pSilencer3.1-H1载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体转染法转染大鼠神经胶质瘤细胞C6,通过RT-PCR检测CLIC4基因表达水平的变化。结果酶切鉴定与DNA测序分析证明CLIC4基因的sirna载体构建正确,RT-PCR结果表明CLIC4基因的表达水平明显降低。结论成功地构建了针对CLIC4基因的sirna载体,转染细胞后可显著抑制CLIC4基因表达。