摘要：以砂梨‘若光’的成熟果实为材料,根据脂氧合酶氨基酸保守区设计1对简并引物,采用RT-PCR克隆到1段长827 bp的序列,经Blast比对和DNAstar软件聚类分析,结果表明由该序列推导出的氨基酸序列含有脂氧合酶氨基酸保守结构域,与马铃薯脂氧合酶基因的氨基酸序列相似性达到77.5%,判断其为砂梨脂氧合酶基因片段,命名为LOX1,并将序列登录到GenBank,登录号为EF215448。根据RNAi载体的构建原则,选择LOX1一开放阅读框设计携带酶切位点的特异引物,通过PCR扩增正、反向基因片段,再与YYT间隔区串连,插入植物表达载体pYF7713中的相应位置,成功地构建了干扰LOX基因表达的RNAi的植物双元表达载体pYL028,为深入研究该基因在砂梨果实成熟过程中的功能及耐贮藏基因工程育种奠定了基础。

摘要：利用GenBank和GDR数据库中的995条梨EST序列开发砂梨SSR引物,并根据开发的EST-SSR引物对砂梨西子绿×喜水F1群体的遗传变异进行分析.结果发现：（1）60个SSR位点分布于54条EST序列中,占整个EST数据库的5.4%,其中二核苷酸重复基元出现频率最高,达51.7%,其次为三核苷酸重复基元占25%.23类重复基序中AT重复基序出现的频率最高,为32.3%.（2）利用开发的25对EST-SSR引物对西子绿×喜水F1群体的遗传变异分析结果表明,其中9对引物呈现多态性,多态性引物占设计引物的36%;多态性引物扩增产物在F1群体中的等位基因数（No）平均为2,有效等位基因数（Ne）平均为1.932 4,平均杂合度观测值（Ho）和期望杂合度（He）分别为1和0.480 9.

摘要：设计植物EXP扩展蛋白简并引物,以砂梨果实cDNA为模板,克隆得到EXP基因cDNA片段,该片段长465 bp。根据该片段序列,分别设计2条5’和3’末端扩增的特异引物,利用RACE技术,获得了该片段的5’端和3’端序列。用DNAMAN5.22软件对3个序列进行拼接和分析,获得了该基因的cDNA全长,命名为Pyp-EXP。该cDNA全长为1 395 bp,5’端起始密码子ATG始于72 bp,3’端终止子TAG止于830 bp,Ploy+(A)从1 363～1 395 bp。该基因已在GenBank基因数据库注册,注册号为EF602031。Pyp-EXP核苷酸序列有一个759 bp完整的开放阅读框,编码区与西洋梨、苹果、湖北海棠、桃的同源性分别为96%,96%,94%和86%;该cDNA推导编码252个氨基酸,含有1个组氨酸(His_Phe_Asp,HFD)功能域,与西洋梨、苹果、湖北海棠、桃中相应序列同源性分别为98%,97%,95%和93%。该基因的克隆为研究扩展蛋白的时空表达及其在果实发育和成熟过程中的作用奠定了基础。

摘要：为了鉴定砂梨变异类型在DNA水平上是否发生遗传变异,以砂梨的两个变异单株及25个梨代表品种为试材,通过正交试验设计优化了SRAP扩增体系,并从88对SRAP引物中筛选出22对适宜的引物进行了PCR扩增,找出差异性片段,并应用系统聚类法,分析其与其它梨品种的亲缘关系。结果表明,砂梨适宜的SRAP体系为25μL反应体积中Mg2+2.4 mmol·L-1、dNTPs 0.1 mmol·L-1、Taq酶1.5 U、模板DNA 80 ng、引物0.18μmol·L-1;与对照品种‘清香’相比,‘02-1’有7条差异性片段,‘02-2’有13条差异性片段,说明其均在DNA水平上存在差异;聚类分析表明,‘02-1’首先与‘清香’聚为一类,‘02-2’先与‘新世纪’和‘黄花’聚类,再与‘清香’聚类,因此,推断‘02-1’可能为‘清香’的营养系变异,‘02-2’可能为‘清香’的姊妹系。

摘要：为从分子水平上揭示EG基因在早熟砂梨软化过程中的作用机制,该研究以早熟砂梨品种翠冠果肉cDNA为模板,根据NCBI上登录的其他植物内切-β-1,4-葡聚糖酶(Endo-1,4-β-glucanas,EGases)基因编码区设计引物,利用RT-PCR技术,克隆内切-β-1,4-葡聚糖酶基因家族中的2个成员PpEG1和PpEG2的编码区序列,并在此基础上,利用半定量RT-PCR技术,探讨两基因在夏季货架期1-MCP处理条件下翠冠果肉软化过程中的表达情况。结果表明:PpEG1编码区包含1 869个核苷酸,编码1个由622位氨基酸组成的多肽,PpEG2编码区包含1 863个核苷酸,编码1个由620位氨基酸组成的多肽;PpEG1和PpEG2都含有糖基水解酶家族-9(Glycosyl-hydrolases-family-9)活性位点,但PpEG2比PpEG1的C端多1个碳水化合物结合组件(Carbohydrate-binding module,CBM);PpEG1与PpEG2分别位于分子进化树的2个不同发育分枝上;在室温货架期间,翠冠果肉中PpEG1的表达量先上升,贮藏4 d时其表达量最高,后缓慢下降,而PpEG2的表达量开始缓慢上升,在贮藏12 d时出现mRNA的积累高峰;1-MCP对PpEG1和PpEG2的表达不起延缓或促进作用。PpEG1与PpEG2在翠冠果实软化过程中的不同表达规律显示,PpEG1与PpEG2作用于不同的β-1,4-葡聚糖多聚分子底物,且PpEG1和PpEG2的表达均不受乙烯调控。

摘要：选取苹果液泡质子泵焦磷酸水解酶基因、液泡质子泵三磷酸腺苷酶A亚基基因、生长素受体基因、脱落酸受体基因、乙烯受体基因、果重基因、抗病相关基因等共8个基因,根据其基因组序列分别在起始密码子上游区、终止密码子下游区、外显子区和内含子区设计引物,用这些引物同时对苹果和砂梨的基因组DNA进行PCR扩增。结果显示:除了抗病相关基因,其余7个基因均有引物在砂梨基因组DNA中扩增出特异条带。与基因其他区域扩增产物相比,起始密码子上游区扩增产物在不同砂梨材料间多态性较丰富,外显子和内含子区扩增产物在不同砂梨材料间的保守性更高。

摘要：根据已报道的砂梨ACO3(GenBank Accession ***042107)序列设计并合成一对特异引物,以砂梨品种若光(Wakahikari)叶片总DNA为模板,利用染色体步移技术扩增基因的上游调控序列,回收该片段并克隆到pMD19-T载体,测序后去除接头和基因编码序列。得到1段长715bp的上游序列,登陆PLACE数据库在线进行植物DNA顺式作用元件预测并分析,起始位点的上游89bp处有1个TATA-Box核心启动子元件。另外序列还存在多个特异调控基因表达的元件,初步判断为砂梨果实中ACC氧化酶基因的诱导型启动子。

摘要：果树雌蕊自交不亲和基因(S基因)产物能降解具有相同S基因型的花粉管核糖核酸,导致自然授粉结实率低,果实品质差。确定不同梨品种S基因型,为配置授粉树和杂交育种提供重要科学依据,并为遗传改良梨品种奠定基础。实验以5个砂梨Pyrus pyrifolia品种基因组脱氧核糖核酸为实验材料,根据S基因一级结构特征,设计合成特异引物,采用PCR-RFLP系统检测和TA克隆测序等方法,分离鉴定了这些品种扩增片段大小差异很小的2条S基因,确定了它们的S基因型,分别为晶玉Pyrus pyrifolia‘Jingyu’S4S24,金水2号***‘Jinshui No.2’S3S21,新雅***‘Xinya’S4S24,西子绿***‘Xizilv’S4S13,青魁***‘Qingkui’S1S13,并且对各品种测序结果进行了初步的生物信息学分析。

摘要：为研究早熟砂梨品种翠冠和西子绿果实黑皮病抗性差异与采后果皮生理变化的关系。在低温(2℃)贮藏条件下比较黑皮病发病情况、α-法尼烯、共轭三烯、超氧阴离子(O.2-)、过氧化氢(H2O2)以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、过氧化氢酶(CAT)等果皮生理指标的变化。结果表明:贮藏于低温条件下的翠冠果实,14 d出现明显的黑皮病症状,42 d病情指数达到了66.3;而西子绿果实无黑皮病症状出现。低温贮藏期间,翠冠果皮中α-法尼烯和共轭三烯含量、共轭三烯的增加速度、O.2-生成速率和H2O2含量均明显高于西子绿。翠冠和西子绿果皮抗氧化酶SOD、POD、APX和CAT的活性变化规律相同,但变化幅度存在差异。2品种SOD、POD和APX活性都在贮藏14 d时达到峰值,随后开始下降;在此过程中,2品种SOD活性相近,POD和APX活性差异逐渐减少。同时2品种CAT活性贮藏14 d后持续下降,翠冠CAT活性低于西子绿,且下降速度远远快于后者。早熟砂梨不同黑皮病敏感性品种果皮中O2.-的生成速率和H2O2含量、POD和CAT活性存在显著差异,而α-法尼烯和共轭三烯含量、共轭三烯的氧化速度是决定果实黑皮病发生与否的关键因素。

摘要：为加快中国砂梨种质资源的收集、整理、鉴定评价和创新利用,加强种质资源规范化管理,促进资源信息交流,提高资源数据库管理水平,应用流行ASP技术为开发平台,SQL 2000为后台数据库,采用web流行的Brower/Server模式,建立了中国砂梨种质资源数据库管理系统,提供砂梨种质资源信息的浏览、查询、添加、修改、删除、统计等管理功能。