摘要：背景:骨质疏松症易引发病理性骨折且严重影响患者的生活质量,植物源外泌体样纳米囊泡在调节骨质疏松症骨平衡方面发挥着重要作用。目的:综述不同植物源外泌体样纳米囊泡在骨质疏松症治疗中的研究现状与展望。方法:通过计算机在PubMed、Web of Science、中国知网中检索1995年1月至2024年3月发表的相关文献,以“osteoporosis,plant-derived exosome-like nanovesicles,exosomes,osteoblasts,osteoclasts”为英文检索词,以“骨质疏松症,植物源外泌体样纳米囊泡,外泌体,成骨细胞,破骨细胞”为中文检索词,最终纳入53篇文献进行分析。结果与结论:植物源外泌体样纳米囊泡具有生物相容性、低毒性和天然靶向性等优点,这些特性不仅确保了其在体内的稳定存在与有效作用,还避免了不必要的免疫反应,为长期治疗策略的设计奠定了基础。植物源外泌体样纳米囊泡可以通过刺激成骨细胞增殖、抑制破骨细胞分化以及促进成骨-抑制破骨双重作用抗骨质疏松症;此外,部分植物源外泌体样纳米囊泡因具有骨靶向性,未来或将成为新型示踪靶标和治疗方案广泛应用于骨质疏松症治疗过程中。

摘要：基于传统的平行平板流室理论和方法,设计制作一套可用于破骨细胞等细胞经受流体剪应力作用的实验系统。用金属夹具和医用硅橡胶密封圈封闭流室,同时不影响流室高度的准确性。调整载玻片与上储液池液面到同一水平面,降低了液体静压力对细胞的影响。此系统可用于研究破骨细胞等细胞在形态学、生理生化等方面对剪应力的反应。

摘要：目的　破骨细胞分化因子的克隆 ,重组蛋白的表达及纯化。方法　自 1g死胎肝组织中提取总RNA ,反转录cDNA后作为模板 ,设计上下游引物 ,多聚酶链反应 (PCR)扩增出目的片段。将PCR产物克隆至组氨酸标签的融合蛋白表达载体 pProEXTM HTc ,并送测序。在异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导下 ,可以稳定表达出破骨细胞分化因子胞外区蛋白 ,用镍离子交换柱纯化该蛋白。结果　逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR )扩增出特异的目的条带 ,75 0bp大小。测序结果完全正确。诱导后可以表达重组蛋白 ,相对分子质量为 3 2× 10 3 。结论　RT PCR可以简便的扩增目的基因。重组破骨细胞分化因子蛋白可以通过大肠杆菌原核表达载体诱导表达得到。

摘要：背景:建立基质细胞与骨髓细胞共培养模型能诱导破骨样细胞产生,但这种培养体系存在细胞不单纯,不适合基因转染等缺点。目的:建立基质细胞MBA-1细胞与破骨前体细胞RAW264.7共培养形成不混杂基质细胞的成熟多核破骨细胞的新方法。设计、时间及地点:开放性实验,于2006-10/2007-03在南华大学附属第一医院临床研究所实验室完成。材料:小鼠源性破骨前体细胞RAW264.7细胞从ATCC引进,基质细胞MBA-1细胞由周厚德博士惠赠。方法:RAW264.7细胞以1×104/孔接种于Transwell三维培养板下层,将聚碳酸酯膜孔径0.4μm的培养板上层先取出接种MBA-1细胞,待细胞贴壁胞体伸展后,将其重新与下层联合共培养,共培养体系细胞每3d换液1次。主要观察指标:①抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察染色阳性的破骨细胞形态特点。②扫描电镜观察骨吸收陷窝形态,评价共培养形成的破骨样细胞骨吸收活性。结果:共培养体系中的RAW264.7细胞,第9天可见较多TRAP阳性单核细胞,出现TRAP阳性多核破骨样细胞。共培养14d后,已分化成熟的破骨细胞,能形成骨吸收陷窝。结论:MBA-1细胞与破骨前体细胞RAW264.7分层共培养可形成成熟的、有骨吸收功能的多核破骨细胞,且这种破骨细胞中不混杂基质细胞。

摘要：前期研究的结果表明,磨损颗粒可通过假体-界面膜进入假体周围间隙与成骨细胞(OBs)直接相互作用,影响OBs功能、促进OBs分泌活性因子。为进一步探讨磨损颗粒与OBs作用后是否会影响破骨细胞(OCs)的骨吸收功能,本研究通过结合形态学特征(TRAP染色、OCs扫描电镜观察、F-actin荧光标记、骨吸收陷窝染色和扫描电镜观察、钙离子荧光追踪)和生化学评价(ABC-ELISA法测定I型胶原交联羧基末端肽浓度),综合分析了3种直径(6.9、2.7和0.9μm)钛颗粒与OBs共孵育后的的条件培养基(CM)对OCs形态和功能的影响。结果表明,较小的0.9μm组CM可促进OCs分化、发育、成熟,部分活化OCs,影响OCs的存活;2.7μm和6.9μm组的CM,尤其是6.9μm组可明显促进OCs分化、发育、成熟、活化,维持OCs的存活;这与OCs细胞内钙离子浓度升高有关。以上结果提示OCs的活化、存活以及分化在假体松动中起着重要的作用;本研究为假体无菌性松动的防治、人工关节设计的材料优化选择提供了新的实验依据。

摘要：目的建立3D水凝胶细胞模型,同时采用不同强度、频率、时间压应力作用于破骨细胞,观察压应力对破骨细胞分化的影响,探讨抑制破骨细胞分化的适宜压应力方案。方法 M-CSF和RANKL诱导骨髓单核细胞成破骨细胞,3D细胞水凝胶种板后,次日进行压应力干预,设计不同强度、频率压应力梯度方案对细胞水凝胶进行干预,对照组细胞不进行干预。分组如下：G0（对照组）、G1（1%,0.5 Hz,4 h）、G2（2%,0.5 Hz,4 h）、G3（3%,0.5 Hz,4 h）、G4（1%,1.0 Hz,4 h）、G5（2%,1.0 Hz,4 h）、G6（3%,1.0 Hz,4 h）。在此基础上,通过统计学计算出有效的强度和频率压应力方案后,按照不同干预时间施加压应力,分组如下：D1（4 h）、D2（8 h）、D3（12 h）、D4（16 h）,每组两个孔。加压干预结束后即刻收集细胞,将RNA反转录为c DNA,再对样本中的Ctsk mRNA、NFATc1 mRNA、TRACP mRNA、M-CSF mRNA和RANK mRNA进行定量检测。结果RANK表达水平显著依赖于压应力的强度和频率（P〈0.01）;TRACP的表达水平显著依赖于压应力的强度（P〈0.01）,且强度和频率两者对TRACP的表达量出现交互作用（P〈0.01）;Ctsk的表达量水平显著依赖于压应力的强度（P〈0.05）和频率（P〈0.01）,且两者之间出现交互作用（P〈0.01）。加压8 h M-CSF的表达量比加压12 h（P〈0.01）和16 h（P〈0.05）的低。加压8 h RANK的表达量比加压12 h（P〈0.05）和16 h（P〈0.01）的低。加压16 h Ctsk和NFATc1的表达量比加压4 h和8 h的高（P〈0.05）。结论在3D水凝胶模型中,以1%强度、0.5 Hz频率、8 h的压应力干预方案能够抑制破骨细胞的分化。研究结果为通过适宜的运动预防骨质疏松、提高峰值骨量奠定理论基础。

摘要：目的探究晚期糖基化终末产物(AGEs)对破骨细胞分化不同阶段的影响。方法利用核因子κB受体活化因子配体(RANKL)于体外诱导小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞进行破骨细胞向分化,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色确定破骨细胞分化的不同阶段,并将细胞随机分为对照组、分化早期阶段干预组、分化晚期阶段干预组;用CCK-8法检测AGEs作用下的细胞活性;破骨细胞向诱导完成后进行TRAP染色,以RT-PCR检测RANK、NFATC-1、TRAF-6、TRAP、CTSK的mRNA表达,以Western blot检测CTSK及RANK的蛋白表达。结果将Raw264.7细胞破骨细胞向分化的前3 d划分为细胞分化早期阶段,之后为细胞分化晚期阶段;100 mg/L的AGEs对Raw264.7细胞的生长无明显影响;早期阶段干预组及晚期阶段干预组的TRAP染色阳性细胞数量均多于对照组,早期阶段干预组与对照组的差异具有统计学意义(P<0.05);早期阶段干预组及晚期阶段干预组的RANK、NFATC-1、TRAF-6、TRAP、CTSK的mRNA表达均多于对照组,早期阶段干预组与对照组的差异具有统计学意义(P<0.05);CTSK及RANK的蛋白表达趋势与相关mRNA表达变化趋势一致。结论 AGEs可能对破骨细胞分化的不同阶段产生不同影响,AGEs于破骨细胞分化早期阶段加入对其分化的促进作用比在晚期阶段加入更明显。

摘要：背景:研究表明,番茄红素能够促进成骨细胞的增殖和生长,增加其矿化能力。目的:实验拟验证抗氧化剂番茄红素影响活性氧族介导破骨细胞骨吸收功能的作用途径。设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,实验于2005-01/2006-12在山东省骨科研究所完成。材料:24h内出生的清洁级Wistar大鼠幼鼠30只,用于破骨细胞的培养;番茄红素由Sigma公司提供。方法:将24孔细胞培养板内细胞分为5组。空白对照组:所用培养液不含番茄红素;10-7mol/L番茄红素组、10-6mol/L番茄红素组、10-5mol/L番茄红素组和10-5mol/L维生素C组培养孔内预先置入盖玻片或薄骨片,对种植其上的破骨细胞分别用含有不同浓度番茄红素或维生素C的α-MEM培养基进行培养。主要观察指标:在分离培养的细胞玻璃爬片或骨片进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色、四唑氮蓝染色,最后对骨片进行扫描电镜照像并用image-proplus5.0图像分析软件分析骨吸收陷窝的数目和面积。结果:①抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性多核细胞镜下胞浆酸性磷酸酶活性部位呈紫红色,细胞核染色阴性或淡染,伪足清晰。②四唑氮蓝染色结果提示,10-5mol/L的番茄红素明显抑制了破骨细胞产生活性氧族的能力。③扫描电镜结果显示,破骨细胞在骨片上形成形态不一的骨陷凹,10-7mol/L的番茄红素部分抑制了骨吸收陷凹面积的增加,而10-5mol/L的番茄红素则几乎完全抑制了骨吸收陷凹的形成。结论:番茄红素在体外可以通过抑制破骨细胞产生活性氧族来抑制其骨吸收功能。

摘要：目的　探讨血小板衍生生长因子 (PDGF) BB在成骨细胞 破骨细胞培养体系中对破骨细胞骨吸收功能的影响。方法　体外分离、培养成人成骨细胞和破骨细胞 ,利用复合培养系统使二者生活在同一环境中 ;在复合培养体系中施加不同浓度的PDGF BB或者PDGF BB +L 单甲基精氨酸 (L NMMA) ;酶动力学法测定培养上清中抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)的活性 ;利用甲苯胺蓝对骨吸收陷窝染色并在图像分析仪下测定骨吸收陷窝的面积和数目。结果　在PDGF BB单独作用下 ,复合培养体系中TRAP的活性不随POGF BB的浓度发生明显变化 (P >0 .0 5 ) ,骨吸收陷窝的面积和数目PDGF BB均与对照组比较 ,无明显变化 (P >0 0 5 ) ;在加入L 单甲基精氨酸后 ,随着PDGF BB的浓度递增 ,培养上清中TRAP活性从 1.46U/L± 0 .10U/L升高至最高为 2 .47U/L± 0 .38U/L(P <0 .0 1) ;骨吸收陷窝的面积和数目分别从 436 μm2 ± 147μm2 和 (14.1± 1.2 )个 /片增加到最多为 5 92 μm2 ± 171μm2 和(2 2 .5± 1.7)个 /片 (P <0 .0 1)。在同一PDGF BB浓度下 ,加入L 单甲基精氨酸后 ,TRAP和骨吸收陷窝面积、数量比加入L 单甲基精氨酸前均显著升高。所有数据进行拉丁方设计的方差分析。结论　在成骨细胞 破骨细胞复合培养体系中 ,由于PDGF

摘要：背景：交感神经系统在骨量的调控中发挥关键的作用，假设体外交感神经分泌的神经递质能够促进破骨细胞形成，无疑为破骨细胞诱导培养增加了新方法。目的：实验拟观察异丙肾上腺素对大鼠骨髓单核细胞向破骨细胞转化的影响。设计、时间及地点：横断面设计实验，于2007—03／06在沈阳医学院实验中心完成。材料：新生24h Wistar大鼠，体质量5．0～6．0g，雌雄不拘，用于分离培养大鼠成熟破骨细胞。异丙肾上腺素由武汉福鑫化工有限公司提供。方法：分离培养大鼠成熟破骨细胞为原代组，以异丙肾上腺索作用于骨髓单核细胞为肾上腺素组，无异丙肾上腺素为对照组，用苏木精-伊红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色加以鉴定。主要观察指标：倒置显微镜观察第3，6，9天3组细胞的计数，扫描电镜观察破骨细胞在骨片上的嗜骨能力。结果：肾上腺素组破骨细胞数目为原代组数目的3倍，其形态与原代组消化获得的细胞形态相同，抗酒石酸酸性磷酸酶染色均阳性。扫描电镜显示肾上腺素组破骨样细胞在骨片上培养时产生骨陷凹。结论：在体外异丙肾上腺素对破骨样细胞形成有促进作用，形成的破骨样细胞在形态、特异酶及噬骨能力方面与经典分离培养的破骨细胞无差异。