摘要：磷酸二酯酶4(phosphodiesterase 4,PDE4)是磷酸二酯酶家族中重要成员之一,可特异性水解环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP),通过改变cAMP浓度引发下游磷酸化级联反应,与多种疾病密切相关。靶向PDE4的抑制剂临床研究包括呼吸系统疾病、自身免疫性疾病、中枢神经系统疾病及皮肤病等多种疾病领域。但是在已上市的PDE4抑制剂临床研究中发现,大多数药物的恶心、呕吐等胃肠道不良反应发生率较高,限制了其临床应用。因此本综述总结了已上市PDE4抑制剂的临床进展及安全性问题,结合PDE4蛋白结构分析、PDE4抑制剂的作用机制及相关不良反应机制研究,阐述了PDE4抑制剂产生不良反应的主要原因,旨在为开发安全有效的PDE4抑制剂提供参考。

摘要：磷酸二酯酶(PDE)通过催化水解细胞内第二信使(环磷酸腺苷cAMP,或环磷酸鸟苷cGMP),以降低细胞内cAMP或cGMP的浓度,从而中止这两个第二信使所传导的生理作用。PDEs作为新型的药物作用靶点,参与多种疾病的治疗,已成为新药研发的重要靶点。截至目前,已有多个PDE抑制剂药物上市(PDE5:5个,治疗性功能障碍和肺动脉高压;PDE4:3个,治疗慢性阻塞性肺病等),其中最出名的案例是用于治疗男性勃起功能障碍和肺动脉高压的PDE5抑制剂西地那非。然而,低选择性是这些PDE抑制剂的主要缺陷。近期我们针对PDE4,5,8,9和10等亚型,通过基于结构的药物分子设计,合成并发现多类高选择性的抑制剂。如,1)合成近150个PDE9抑制剂,从中发现抑制效应最强的高选择性先导结构3r。3r(IC_(50)=0.6 nmol·L^(-1),对PDE1选择性为788倍),活性和选择性均明显优于临床Ⅱ期的辉瑞抑制剂PF-04447943。通过晶体结构分析,发现3r与PDE9特有残基Y424形成氢键,是其具有高倍选择性的结构基础,这为PDE9高选择性抑制剂提供了新的设计策略。此外共晶结构还揭示3r和A452形成一个氢键,而PF-04447943未显示这种结合模式。通过设计与A452形成氢键,可提高化合物的抑制效应。2)合成近100个多个PDE5抑制剂,从中发现抑制剂从中发现抑制效应最强的高选择性先导结构1610。1610(IC_(50)=5.0 nmol·L^(-1),对PDE6选择性为100倍)的抑制活性与辉瑞药物西地那非相当,但选择性均明显优于西地那非(对PDE6选择性为2~3倍),动物实验也显示该类药物的抗动脉高压效果明显优于对照药物西地那非。通过分子模拟分析,发现1610进入靶标结构的Q2口袋,是1610具有100倍选择性的结构基础,这为PDE5高选择性抑制剂提供了新的设计策略。

摘要：用正交设计观察了6种中草药有效成分和三氟啦嗪（TFP）对钙调素依赖环核苷酸磷酸二酯酶（CaM-PDE）激活活性的影响，结果表明：a）两面针碱（Nit）、槲皮素（Que）和TFP对CaM－PDE激活活性具有明显抑制作用（P＜0．01），其抑制强度：Qne＞TFP＞Nit；小檗碱（Ber）、麻黄碱（Eph）和鱼腥草素（Hou）对CaM－PDE无明显作用（P＞0．05），青藤碱（Sin）对酶的作用可疑；c）Qne与TFP、Nit与TFP之间有协同作用。结果提示Nit和Que可能是CaM拮抗剂，两者的作用位点似乎不同于TFP。

摘要：目的:分段克隆昆明种小鼠磷酸二酯酶(PDE)β亚单位编码基因pde6bCDS序列全长,分析比较昆明种小鼠与C57BL/6J小鼠PDEβ亚单位编码基因pde6b序列的差异。方法:设计覆盖pde6bCDS区的引物序列,通过逆转录-聚合酶链式反应扩增并克隆入载体pMD18-T中,转化大肠杆菌,酶切鉴定后测序。通过生物信息检索、序列拼接并应用生物信息学相关软件进行序列分析。结果:克隆了野生型昆明种小鼠的pde6bCDS全长。昆明种小鼠与C57BL/6J小鼠pde6bCDS区(NM_008806)相比较存在如下不同:昆明种小鼠第706位碱基为A,而数据库中序列NM_008806为G;第1149位碱基前者为T,后者为C。昆明种小鼠与C57BL/6J小鼠pde6b编码的蛋白序列差异并不明显,仅有第236位氨基酸残基为甘氨酸(G)突变成丝氨酸(S),为相对保守性替换关系。结论:克隆了昆明种小鼠pde6bCDS区全长序列;pde6b基因在不同种属小鼠之间编码序列存在差异,表现出多样性特点,但蛋白序列保守性较高。

摘要：目的观察七氟烷麻醉后对大鼠不同脑区、不同时期腺苷酸环化酶及磷酸二酯酶活性的影响,探讨3’,5’-环腺苷酸(cAMP)在七氟烷麻醉中的作用。方法SD大鼠40只,分层随机区组设计分成5组,每组8只,吸入1.5%的七氟烷,分别在未吸入七氟烷时(对照组)、翻正反射即将消失时(诱导期组)、翻正反射消失后2min(麻醉期组)、翻正反射恢复即刻(恢复期组)和翻正反射恢复后1h(清醒期组)断头取脑。放射免疫法测定大脑皮质、海马和脑干的腺苷酸环化酶(AC)活性及磷酸二酯酶(PDE)活性。结果(1)在对AC活性影响上,与对照组比较,诱导期组、麻醉期组的皮质、海马、脑干及恢复期组皮质、海马AC活性升高;与麻醉期组比较,清醒期组皮质、海马、脑干AC活性降低。上述差异均有统计学意义(均P<0.05)。(2)在对PDE活性的影响上,与对照组比较,诱导期组、麻醉期组皮质、海马、脑干PDE活性下降;与麻醉期组比较,恢复期组、清醒期组皮质、海马、脑干PDE活性升高。上述差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论cAMP在七氟烷的全麻机制中可能发挥重要作用。

摘要：目的 探讨磷酸二酯酶 4D （ PDE4D ）基因单核苷酸多态性 （ SNP ）与 COPD 相关性。方法 选取8个SNP位点 SNP1=rs11740402,SNP2=rs17528473,NP3=rs17780213 , SNP4=rs1529843 , SNP5=rs11743928 , SNP6=rs26956 , SNP7=rs35387 , SNP8=rs35386 ,以北京某社区40～80 岁人群为研究对象,共入选 136 例受试者, COPD组71例和对照组 65例,均为汉族。设计目标SNP位点上下游引物, PCR扩增目标片段, Sanger测序法检测目标片段碱基,χ^2 检验比较2组在等位基因和基因型分布频率上的差异,非条件 Logistic 回归评价SNP位点与COPD之间的相关性。结果 8个SNP位点其基因型分布在 COPD 组和对照组均符合Hardy-Weinberg平衡,在对照组受试者连锁不平衡（Linkage Disequilibrium , LD ）分 析时发现SNP1、SNP2处于连锁不平衡,形 成LDBlock1, SNP6、SNP7和SNP8处于连锁不平衡,形成 LDBlock2 , SNP5 基因型均为 A / A 型,不能与其他 SNP 位点形成 LDBlock。单倍体型分析发现在COPD组和对照组中差异无统计学意义（ P 〉0.05）。基于等位基因的关联分析中发现2组病例之间差异无统计学意义（P〉0.05 ）,在基因型的关联分析中发现位点 SNP8基因型频率在COPD组和对照组差异有统计学意义（P 〈0.05）,在进一步非条件 Logistic 回归分析中发现 SNP8在 Ressessive 遗传模型时与COPD存在相关性,G/G基因型在COPD 组和对照组分别为 20.3% 和 6.3%（P〈0.05,OR=4.07, 95%CI为1.26～13.18）,提示SNP8的G/G基因型与COPD易感性增加有关。结论研究结果提示 PDE4D基因SNP可能与 COPD的发生发展相关,SNP8的G/G基因型可能是COPD易感性的一个预测因子。

摘要：目的 :观察异氟醚麻醉后大鼠不同脑区、不同时期腺苷酸环化酶 (AC)及磷酸二酯酶 (PDE)活性的动态变化 ,间接观察 3’,5’-环腺苷酸 (c AMP)含量变化 ,从而探讨 c AMP在其麻醉中的作用。方法 :SD大鼠 4 0只 ,按分层随机设计均分成 5组 ,每组 8只 ,吸入 1.5 %的异氟醚 ,分别在未吸入异氟醚时 (对照组 )、翻正反射即将消失时 (诱导期组 )、翻正反射消失后 1m in(麻醉期组 )、翻正反射恢复即刻 (恢复期组 )和翻正反射恢复后 1h(清醒期组 )断头取脑。放射性同位素法测定大脑皮层、海马和脑干的腺苷酸环化酶及磷酸二酯酶活性。结果 :在皮层 ,与对照组相比 ,AC活性在诱导期组开始升高 ,麻醉期组及恢复期组均明显高于对照组 (P均 <0 .0 5 ) ,清醒期组恢复至对照组水平 ;PDE活性在麻醉期组明显低于对照组 (P<0 .0 1)。在海马 ,与对照组相比 ,AC活性只有麻醉期组升高 (P<0 .0 5 ) ;PDE活性在诱导期组 (P<0 .0 5 )和麻醉期组下降 (P<0 .0 1)。在脑干 ,与对照组比 ,AC活性在诱导期组、麻醉期组和恢复期组均高于对照组 (P均 <0 .0 5 ) ;PDE活性只有麻醉期组时下降显著 (P<0 .0 5 ) ,其它组与对照组相比差异无显著性。结论 :异氟醚升高大脑皮层、海马及脑干的腺苷酸环化酶活性 ,降低了磷酸二酯酶活性 ,从而增加了 c

摘要：目的 :探讨尿 5 '-核苷酸磷酸二酯酶 (5 '- NPD)能否反映顺铂导致的早期肾损害。方法 :采用完全随机设计方法 ,建立顺铂致大鼠肾损害动物模型 ,通过检测顺铂致大鼠肾损害过程中尿 5 '- NPD的活性变化 ,同时用光镜和电镜观察大鼠肾脏的病理改变 ,以验证尿 5 '- NPD能否反映早期肾损害。结果 :实验中空白对照组 (IV组 )和小剂量顺铂组 ( 组 )大鼠的尿5 '- NPD活性以及肾脏病理组织学均无明显改变 ;大剂量顺铂组大鼠 ( 组和 组 )在投药后第 2天 ,尿 5 '- NPD活性开始升高 ,第 4天到达高峰 ,活性明显高于 组和 组 ,而肾脏的病理改变则出现得相对迟缓 ,投药后第 8天可见肾小管中度扩张 ,部分区域有炎性细胞浸润 ;第 15天有较多肾实质细胞坏死。结论 :尿 5 '- NPD指标对顺铂导致的肾损害反映较灵敏 。

摘要：内皮功能障碍是动脉粥样硬化形成过程中早期关键因素，也是心血管病的一个危险因素。西地那非作为有效治疗勃起功能障碍的口服药，通过抑制特异性Ⅴ型磷酸二酯酶来抑制cGMP的降解。西地那非已经被证实可改善血管功能，但PDE5抑制对吸烟引起的急性内皮功能障碍的作用尚不清楚。因此，Charalambos Ⅴ等人按照随机、安慰剂对照、交叉设计的原则，研究了14名男性吸烟患者接受西地那非（50mg）治疗后对吸烟引起的急性内皮功能障碍的影响。通过高分辨率的超声仪测量肱动脉的血流介导的舒张功能（FMD）来评估内皮细胞功能。结果显示，西地那非可消除吸烟所致的肱动脉FMD的减低（安慰剂组从4．56％±0．60％降至2．80％±0．43％，西地那非组3．83％±0．64％升至4．33％＋-0．47％，升高了51％，P〈0．05）。然而西地那非对吸烟所致的肱动脉直径减小，在静息期时是不可逆转的，但在充血期，仍可以部分逆转。本研究表明，西地那非通过抑制5型磷酸二酯酶，可消除吸烟所致的肱动脉FMD降低。由于吸烟的有害后果以及正常的内皮细胞功能的重要作用，本研究有潜在的临床应用价值。

摘要：养殖场污水田间处理会引起土壤表面径流和渗出液中的磷组分流失.磷组分中有机磷比无机磷酸盐迁移能力强,构成地表水体富营养化重要的磷源.本文通过一组实验来探讨养殖场污水灌溉条件下土壤渗出液有机磷成分和数量特征.实验设计9个地块,其中一组4个地块加入45kg·(hm2·a)-1的过磷酸钙(以P计,下同),然后4次分别加入100、200、300、400t·(hm2·a)-1猪场污水,相应地施磷量分别为6.2、12.4、19.2、24.8kg·(hm2·a)-1;另一组4个地块只加入同样猪场污水.渗出液物化分析表明渗出液中颗粒态难反应磷居多,占TP的77%～90%.31P的核磁共振波谱分析表明难反应P主要以有机磷的单酯和二酯形式存在.在磷酸酶活性实验中,渗出液自身含有的磷酸单酯酶和磷酸二酯酶可以水解9%～29%有机磷,这表明P在迁移过程中,部分磷酸单酯和二酯可以水解成无机磷.对于施肥处理P45+F200而言,有机磷组分酶水解显示难反应磷主要含有33%的易反应单酯磷、17%的肌醇磷和9%磷酸二酯(磷脂和核酸).易反应单酯磷、肌醇磷和磷酸二酯是渗滤液有机磷流失过程能矿化的重要成分.