摘要：目的利用计算机辅助药物设计技术从中药天然产物库中挖掘极光激酶A(Aurora A kinase,AURKA)抑制剂。方法搭建类药性筛选、药动学预测、分子对接、分子动力学(molecular dynamics,MD)模拟于一体的药物筛选平台,从中药化合物数据库中挖掘AURKA抑制剂并通过MD模拟进行验证。结果采用计算机辅助药物设计方法从Bai-TCM数据库6220种中草药的47696种中药天然化合物中筛选出5种能与AURKA结合的化合物。经MD模拟验证发现Compound X能够在AURKA抑制活性口袋中形成稳定的受体-配体二元复合物,在Compound X存在的情况下,AURKA-MYCN复合物的稳定性明显降低。结论结合多种虚拟筛选技术从中药天然产物数据库发现神经母细胞瘤治疗靶点MYCN的AURKA抑制剂Compound X。

摘要：微小残留病的长期存在是神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)易复发的主要原因。NKT细胞是一类有效的抗NB的免疫效应细胞,但是数量少,活性低。目的:探讨NB脂类提取物对患者外周血NKT细胞是否有激活作用。设计:以诊断为依据的自身对照研究。地点和对象:实验地点为解放军总医院儿内科,对象为5例神经母细胞瘤患者,男3例,女2例;年龄1.5～7.5岁。干预:实验组用NB脂类提取物作为刺激物刺激患者的外周血NKT细胞,对照组选择生理盐水。主要观察指标:两组NKT细胞的增殖程度(T细胞增殖程度和NKT/T比例)和NKT细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。结果:实验组和对照组增殖A值分别为0.213±0.033和0.171±0.023,NKT/T比例分别为7.39±1.48和2.18±1.50,NKT细胞毒作用为(64.3±15.2)%和(44.4±11.6)%。实验组增殖程度是对照组的1.3倍(t=2.33,P=0.048),NKT/T比例是对照组的3.3倍(t=5.53,P=0.001),NKT细胞毒作用高于对照组19.84%(t=2.36,P=0.046)。结论:NB脂类提取物可以有效激活NKT细胞。利用肿瘤自身脂类抗原诱导出有效的抗自身肿瘤免疫的研究有望找到一条有效的清除微小残留病变,减少复发的免疫治疗途径。

摘要：目的探讨反义肽核酸(PNA)的细胞转染方法及其对体外培养的神经母细胞瘤多药耐药(MDR)相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法以人MDR-1基因mRNA为靶点设计合成两反义PNA序列,利用PNA-DNA杂交,阳离子脂质体介导转染神经母细胞瘤耐药细胞株SK-N-SH。采用流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和高效液相色谱等方法分别检测反义PNA的转染效率,转染前后细胞P-gp、MDR-1基因mRNA的表达及细胞内阿霉素(ADM)浓度。结果荧光标记的反义PNA转染肿瘤细胞后,细胞平均荧光强度显著增强,呈浓度依赖性。两反义PNA均使SK-N-SH细胞P-gp表达明显降低,MDR-1mRNA表达轻度降低,细胞内ADM聚集浓度明显增加。结论PNA-DNA杂交阳离子脂质体转染法可有效增加细胞对PNA的摄取,特异序列的反义PNA可在一定程度上阻断神经母细胞瘤MDR相关蛋白P-gp的表达。

摘要：目的 基于专利引文网络识别神经母细胞瘤治疗领域技术前沿。方法 本研究通过神经母细胞瘤治疗领域的专利分析,以引文网络中的高被引专利及高被引论文作为研究对象,采用文本聚类的方法对其施引专利的标题、摘要进行分析,以识别技术前沿;采用社会网络分析的方法,从度中心性、中介中心性、接近中心性及特征向量中心性等指标对高被引专利引文网络进行分析以识别核心专利。结果 神经母细胞瘤治疗领域共有专利申请6 240项,含有专利引文71 304件,期刊论文引文88 698件。基于专利引文网络共识别出4个技术前沿,分别是药物靶点、药物设计、肿瘤适应证扩展和基因表达调控。基于期刊论文引文网络识别出3个技术前沿:药物靶点、药物设计和肿瘤适应证扩展。结论 神经母细胞瘤治疗领域技术开发持续活跃。药物靶点和药物设计是神经母细胞瘤治疗领域最受关注的技术前沿。本研究可以从情报学角度为神经母细胞瘤治疗技术研究提供一定的借鉴和参考。

摘要：目的探讨重组慢病毒介导siRNA（小干扰RNA）靶向阻断NF-κB信号通路对人神经母细胞瘤QDDQ-NM1细胞侵袭转移的影响。方法根据人p65基因序列，设计针对基因不同靶点的siRNA1、siRNA2、siRNA3、siRNA44条siRNA序列及其对照序列NC，慢病毒介导转染QDDQ-NM1，采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）和Westernblot法从设计的4条干扰序列中筛选出siRNAl序列在转染72h干扰效果最好；在转染72h后，采用RTPCR和Westernblot法检测NF-κB下游基因CXCR4、VEGnrFmRNA转录和蛋白表达情况；Transwell小室检测各组间瘤细胞的转移侵袭能力。结果转染72h后，PT-PCR显示，siRNAl-NF-κBCXCR4、VEGFmRNA表达分别为空白对照组0．66倍、0．76倍，差异有统计学意义（P〈0．05）；Westernblot显示，siRNA1-NF-κBCXCR4、VEGF蛋白表达分别为空白对照组0．67倍、0．76倍，差异有统计学意义（P〈0．05）；Transwell小室显示，Ⅰ（实验组）、Ⅱ（空载对照组）、Ⅲ（空白对照组）穿过Matrigel胶的细胞数分别为34．6000±3．9749；45．6000±2．3021；54．8000±2．3874，各组间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论慢病毒介导的siRNA通过下调NF-κB下游基因CXCR4、VEGF的表达抑制神经母细胞瘤的侵袭转移，可为下一步肿瘤治疗提供理论基础。

摘要：目前关于PET/CT图像分割的方法缺少对图像全局上下文信息提取的考虑并且对提取到的特征信息进行融合的方式有待优化.针对上述问题,本文提出了并行提取和特征综合网络(Parallel Extraction and Feature Synthesis Network,PFNet).该网络首先利用卷积神经网络(convolutional neural network,CNN)和Transformer分别设计了两个支路分别从PET/CT图像中提取局部特征和全局上下文信息.其次,为了融合不同的特征信息,本文设计了一个特征综合模块,将两个分支提取的不同信息送入特征综合模块进行融合.在该模块中,设计了多策略融合单元,与此同时该模块利用通道注意力单元和依赖关系学习单元进一步学习通道特征信息和特征图自身依赖关系,以便进一步进行特征融合.此外本文引入了LogCoshDiceLoss作为损失函数,其利用函数Log-Cosh的平滑性可以提高分割性能.最后,在神经母细胞瘤数据集和HECKTOR 2021数据集上的实验结果表明本文提出的网络相比其它方法具有更好的分割性能,获得了较好的分割效果.

摘要：目的 构建靶向人神经母细胞瘤MYCN基因慢病毒表达载体并检测其对目的基因MYCN的沉默效应.方法 根据MYCN基因信息设计并构建4个靶向MYCN基因的干扰质粒,鉴定后与pLenti6.3/V5 Dest载体重组,并包装成为慢病毒表达载体Lenti-EGFP-MYCN-1/2/3/4-miR,感染人神经母细胞瘤SK-N-BE（2）细胞株,并应用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和Western blot检测4个慢病毒表达载体对MYCN mRNA和蛋白表达的沉默效应,筛选出最佳干扰靶序列慢病毒表达载体.结果 酶切和测序结果证实4个靶向MYCN基因的慢病毒载体构建成功,感染SK-N-BE（2）细胞后,应用FQ-PCR和Western blot检测MYCN mRNA和蛋白的表达水平分别为0.577±0.015、0.333 ±0.016、0.090±0.010、0.197 ±0.015和0.833±0.049、0.563±0.040、0.300±0.020、0.387±0.015,其中Lenti-EGFP-MYCN-3-miR对MYCN基因抑制作用最为显著,为最佳干扰靶序列慢病毒表达载体.结论 成功构建慢病毒表达载体可高效感染体外培养的人神经母细胞瘤SK-N-BE（2）细胞株,并可显著抑制靶基因MYCN mRNA和蛋白的表达.

摘要：小儿神经母细胞瘤（Neuroblastomas，NB）有自然消退、成熟以及侵袭性强、恶性度高的特点，在治疗前CT和MRI能显示出病变对手术所具有的危险因素，因此，CT与MRI对小儿NB的诊断、治疗方案的设计及随访中起到重要作用。

摘要：目的构建趋化因子受体4（Q（cR4）小分子干扰RNA（siRNA）表达载体，研究其对体外神经母细胞瘤侵袭能力的影响。方法选择CXCR4高表达的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系，设计合成人CXCR4基因不同靶点的能编码siRNA的3条双链DNA序列，克隆到真核表达载体pSilencer^TMneo中构建siRNA表达载体，体外脂质体介导转染SH-SY5Y细胞，用半定量RT-TCR分析CXCR4基因mRNA的变化，用免疫组织化学和Westernblot分析CXCR4蛋白表达，Transwell小室检测细胞的侵袭能力。结果成功构建了CXCR4-siRNA表达载体，转染后半定量RT-PCR检测神经母细胞瘤细胞CXCR4mRNA丰度分别为siR1转染组0．32±0．09、siR2转染组0．35±0．13和siR3转染组0．33±0．11，相对于对照组0．58±0．13表达下降（P〈0．05）；转染后免疫组化检测神经母细胞瘤细胞CXCR4的蛋白表达分别为siR1转染组75．98±4．81、siR2转染组75．52±3．95和siR3转染组76．35±6．51，相对于对照组92．196±3．89表达下降（P〈0．01）；转染后Western blot检测神经母细胞瘤细胞CXCR4的蛋白表达分别为siRl转染组0．1103±0．0023、siR2转染组0．1203±0．0015和siR3转染组0．1308±0．0018，相对于对照组0．4832±0．0012表达下降（P〈0．01）；且转染后神经母细胞瘤细胞侵袭能力较对照组53．11±3．72降低（P〈0．05），siR1转染组为25．48±2．81、siR2转染组为30．89±2．77、siR3转染组为18．83±1．79。结论CXCR4-siRNA表达载体通过降低CXCR4基因的蛋白表达能显著抑制神经母细胞瘤细胞的体外侵袭能力，有望为神经母细胞瘤的基因治疗开辟新途径。

摘要：　目的　探讨反义肽核酸(PNA)的细胞转染方法及对体外培养的神经母细胞瘤多药耐药性(MDR)的逆转作用。方法　以人MDR 1基因mRNA为靶点设计合成两反义PNA序列,利用PNA DNA杂交,阳离子脂质体介导转染神经母细胞瘤耐药细胞株SK N SH。应用流式细胞术、RT-PCR、MTT等方法分别检测反义PNA的转染效率、转染前后细胞P 糖蛋白(P gp)、MDR 1基因mRNA的表达以及对化疗药物的敏感性。结果　荧光标记的反义PNA转染肿瘤细胞后,细胞平均荧光强度显著增强,且呈浓度依赖性。两反义PNA均使SK N SH细胞P gp表达明显降低,阿霉素和长春新碱对细胞的半数抑制浓度值明显下降,MDR 1mRNA表达轻度降低。而PNA1转染对照组C6 /adr细胞后,上述变化不明显。结论　PNA DNA杂交阳离子脂质体转染法可有效增加细胞对PNA的摄取,特异序列的反义PNA可有效逆转神经母细胞瘤的MDR特性。