摘要：目的:制备神经生长因子(NGF)温度敏感型原位凝胶,以大鼠坐骨神经损伤为模型,探讨NGF温敏凝胶对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。方法:制备NGF温敏凝胶,利用星点设计-效应面法优化其处方。将50只大鼠随机分为正常组,模型组,NGF注射剂组(10 mg·L^-1),NGF低剂量温敏凝胶组(10 mg·L^-1)和NGF高剂量温敏凝胶组(20 mg·L^-1),建立大鼠坐骨神经损伤模型;以大鼠行为学,坐骨神经功能指数(SFI),撤回反射时间的测定实验,腓肠肌湿重比的测定以及组织形态学变化为指标,综合考察NGF温敏凝胶对损伤坐骨神经的影响。结果:处方优化后NGF温敏凝胶的胶凝温度35. 2℃,符合注射用标准。术后48周,各时间点测得NGF高剂量温敏凝胶组大鼠的SFI和腓肠肌湿重比都显著高于模型组和NGF注射剂组,但其撤回反射时间显著低于模型组和NGF注射剂组,且作用呈剂量依赖性。由苏木精-伊红(HE)染色试验可知,NGF高剂量温敏凝胶组的大鼠坐骨神经损伤区再生神经纤维排列较模型组整齐、密集,而且连续性也较好。结论:NGF温敏凝胶能促进大鼠坐骨神经损伤的修复。

摘要：目的：探讨神经生长因子（ NGF）对兔骨折愈合过程中骨形态发生蛋白（ BMP）表达的影响。方法健康新西兰大耳白兔108只。随机分为A组（ NGF组）、B组（拮抗NGF组）、C组（对照组），每组36只。制备标准的兔右侧桡骨骨折模型。 A组采用肌肉注射NGF；B组采用腹腔注射NGF抗体；C组注射生理盐水。各组动物分别于术后24、48 h和1、3、6、8周时处死，测定浓度后进行BMP蛋白免疫印迹分析和图像分析，方差分析及析因设计方差分析检验。结果骨组织中BMP与内参β肌动蛋白灰度值的比值在各个时相点，NGF组比抗NGF抗体组、对照组诱导骨组织内BMP表达量多，且NGF组骨组织中BMP表达时间延长，高峰浓度提前、下降缓慢[NGF组（1.73±0.05），抗NGF组（0.72±0.06），对照组（1.19±0.05），P＜0．05]。结论神经生长因子促进骨折愈合的机制可能是通过促进上调BMP的表达促进骨折愈合。

摘要：背景:正常骨组织和骨痂中有神经生长因子及其受体的表达,同时局部给予外源性神经生长因子对骨折愈合有促进作用,周围神经损伤后的骨折,骨痂质量受明显影响。目的:验证周围神经损伤后局部应用神经生长因子对骨折早期愈合的影响。设计、时间及地点:随机分组设计,对照动物实验,于2007-05/11在解放军济南军区总医院动物实验中心完成。材料:选用健康雄性Wistar大白鼠48只,体质量(220±20)g;神经生长因子注射液,厦门北大之路生物工程有限公司生产,批号20070502。方法:Wistar大白鼠48只分成4组,每组24肢体。①盐水组:胫骨骨折+盐水注射。②神经损伤盐水组:神经损伤+胫骨骨折+盐水注射。③神经生长因子组:胫骨骨折+神经生长因子注射。④神经损伤神经生长因子组:神经损伤+胫骨骨折+神经生长因子注射。先行测量胫骨中点处周径,然后在胫骨上段前侧楔形开槽,再于腹股沟韧带水平切除股神经约10mm。对侧作胫骨开槽,暴露但不切除神经。股神经切除侧同时行坐骨神经切除约10mm,对侧作切口暴露。术后盐水组和神经损伤盐水组肌注生理盐水,每侧肢体0.1mL/d;神经生长因子组和神经损伤神经生长因子组肌注神经生长因子,每侧肢体0.1mL(0.2U)/d。主要观察指标:术后2周、4周测量小腿周径、X射线线摄片、标本湿质量、骨痂计量学观察。结果:①神经损伤侧小腿萎缩明显,神经生长因子促进肌肉恢复。②神经损伤侧标本湿质量及骨痂量较对侧多。③2周及4周时,神经损伤盐水组、神经损伤神经生长因子组骨痂均较对侧多,但类骨质多,缺乏正常骨小梁结构。神经生长因子组、神经损伤神经生长因子组骨痂相对少而质密,骨小梁排列规则。结论:伴有或不伴有神经损伤的骨折,局部注射神经生长因子都可抑制破骨细胞活动,使成骨能力增强,促进骨折愈合。

摘要：目的评价神经生长因子(NGF)对SD大鼠背部跨区穿支皮瓣成活的影响。方法成年SD大鼠60只,平均分为实验组和对照组。切取面积约3cm×10cm的背部跨区皮瓣。实验组皮下注射NGF溶液(10 nmol·ml^(-1)·kg^(-1));对照组同法注射0.1 mol/l磷酸盐缓冲溶液(1 ml/kg)。术后第3、7天局部取材运用Western Blot技术半定量检测VEGF及CD34蛋白含量;显微CT微血管三维重建,析因设计分析血管容积及总长度的形态学变化。后术第7天统计皮瓣存活面积,免疫组化染色观测血管生长因子受体(KDR)及NGF受体(Trk A)的表达。结果第3天,VEGF表达实验组与对照组无显著统计学差异(P=0.088);实验组CD34表达明显高于对照组(P=0.004);第7天,两种蛋白分子表达,实验组显著均优于对照组(P<0.05)。血管形态学分析示NGF和时间因相互作用增加血管容积(F=33.304,P<0.05)及总长度(F=8.493,P=0.01);实验组皮瓣成活面积明显大于对照组(P<0.05)。免疫组化染色示实验组KDR阳性表达较为明显。结论 NGF可促进跨区供血穿支皮瓣的成活。

摘要：背景：将大量的神经干细胞定向诱导分化后的神经细胞能否与其他神经细胞建立功能联系是目前解决神经干细胞应用于临床的重要问题之一。目的；观察神经生长因子对体外培养的神经干细胞生长和分化的影响，以及神经生长因子对神经轴突形成和生长的作用。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007—06／2008—12在中国医科大学设备处完成。材料：清洁级二三天龄新生SD雄性大鼠3只，神经生长因子为peprotech公司产品。方法：酶消化和机械分离法相结合体外分离培养新生鼠神经干细胞，传至第4代的细胞克隆团行巢蛋白免疫细胞化学染色观察，剩余细胞团用机械法分散，采用有限稀释法进行单克隆神经干细胞培养，加入完全培养基制成10^8L^-1的单细胞悬液，分为2组滴入培养板，对照组加入10％FBS，诱导组加入10％FBS＋50μg／L神经生长因子，培养5～7d。连续观察5个神经元特异烯醇化酶染色阳性且未与其他神经元发生连接的孤立神经元，求助于以神经元为圆心的同心圆，分别计数内径为37．5μm和75μm圆环内的突触数量，将两者均值视为神经元轴突数量，通过此同心圆测量最长轴突的长度。主要观察指标：通过巢蛋白、神经元特异烯醇化酶、胶质原纤维酸性蛋白免疫组化染色对培养细胞进行鉴定。检测神经元数量及轴突数量、长度。结果：所培养出的细胞团均为巢蛋白阳性，诱导分化后均可产生神经元特异烯醇化酶、胶质原纤维酸性蛋白阳性细胞。诱导分化第6天，诱导组神经元数量、单个神经元轴突数量、最长轴突长度均明显高于对照组（t=3．301，2．982，4．012，P均〈0．01）。结论：神经生长因子可促进神经干细胞向神经元的分化，还可以增加由神经干细胞分化而来的神经元突起数量及长度。

摘要：背景:对于神经生长因子的促血管生成作用的研究,目前还处于探索阶段。目的:探讨神经生长因子对再生坐骨神经中血管形成的剂量效应及其机制。设计:随机对照动物实验。单位:解放军第三二四医院神经内科,解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所三室。材料:健康成年Wistar大鼠32只,雌雄不拘,体质量200～250g。硅胶管(上海新亚医用橡胶厂出产);神经生长因子(美国Sigma公司)。方法:实验于2003-08/2005-02在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所三室完成。实验分组:采用随机数字法将大鼠分成4组:生理盐水组、50,100,500ng神经生长因子组,每组8只。实验干预:切除大鼠后肢坐骨神经,造成10mm缺损,用单通道的硅胶管桥接大鼠坐骨神经缺损,在桥接管内给药。生理盐水组注入5μL生理盐水。50,100,500ng神经生长因子组注入20mg/L的神经生长因子2.5,5,25μL。实验评估:在第30天时,用免疫组织化学的方法检测大鼠再生坐骨神经新生血管内皮细胞中CD34、vWf、血管内皮生长因子、trkA的表达,并作形态计量分析。主要观察指标:各组大鼠神经再生普通病理及组织化学染色观察。结果:32只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠神经再生病理切片结果:术后30d的坐骨神经近远端完全连接,硅胶管内坐骨神经粗壮程度为:500ng神经生长因子组>50ng、100ng组>生理盐水组。各神经生长因子组再生的坐骨神经的纤维数目和排列规则程度要好于生理盐水组,术后30d可见明显的血管生成。②免疫组织化学染色观察:3种不同剂量的神经生长因子组与生理盐水组比较,4种抗原的表达皆有显著性差异(P<0.05);500ng神经生长因子组4种抗原的表达与100ng和50ng神经生长因子组比较增加(CD34:94.2±6.4,74.2±10.9,77.0±11.0;vWf:116.2±20.0,72.0±13.1,68.0±9.7;TrkA:105.4±10.6,57.8±11.5,58.8±6.5;血管内皮生长因子:89.0±3.0,48.6±7.4,35.2±2.9;P<0.05或P<0.01)。结论:神经生长因子能促进再生周围神经的血管生成,且具有剂量效应;其机制可能与神经生长因子促进trkA、血管内皮细胞生长因子的表达密切相关。

摘要：背景:有实验已证实多种神经营养因子具有促进损伤神经元存活、分化和轴突再生的作用,使损伤后的脊髓组织结构完整性能得到最大的保存。目的:观察神经生长因子对大鼠脊髓损伤后神经再生和运动功能的影响。设计:随机对照观察。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科。材料:选用30只成年健康雄性Wistar大鼠(同济医学院动物实验中心)。方法:实验于2004-01/2005-01在华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科完成。采用随机抽签法将大鼠分为治疗组和对照组,每组15只。①造模:应用改良Allen’s打击法致伤脊髓。②干预措施:造模后,治疗组大鼠给予蛛网膜下腔注射含1μg神经生长因子的生理盐水0.05mL,1次/d,共3周;对照组大鼠注射等体积的生理盐水,1次/d,共3W。③斜板试验:在造模前和治疗后3d和1,2,3周分别应用改良Rivlin法(斜板试验)测定大鼠运动功能值。④形态学观察:造模后2天和3周,分别取7只治疗组大鼠和8只对照组大鼠进行NF200免疫组织化学检测与轴突计数。主要观察指标:大鼠造模前、治疗后3d及1,2,3周斜板试验结果以及大鼠造模后2d和3周白质区轴突计数。结果:①治疗组大鼠脊髓损伤后斜板试验结果在术后1,2,3周时分别为(45.2±3.2),(51.2±3.8),(53.4±4.6)°,明显高于对照组(37.2±2.8),(42.6±3.5),(44.5±5.6)°,差异有显著性(P<0.05)。②治疗后3周,对照组白质内可见少量、散在不均匀的NF200着色点。治疗组白质内可见大量均匀的NF200着色点。治疗组大鼠脊髓损伤后3W白质内轴突计数明显高于对照组(363.6±34.2,187.5±32.1,P<0.05)。结论:神经生长因子对脊髓损伤后的神经再生有一定的促进作用,并有助于功能恢复。

摘要：背景:闪光视觉诱发电位(flash-visualevokedpotential,F-VEP)是目前儿科临床评估中枢神经系统功能状态的一项新的易行方法。目的:探讨闪光视觉诱发电位(F-VEP),反映新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemicbraindamage,HIBD)的敏感性,研究神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用,为新生儿HIBD的早期诊断与干预提供理论依据。设计:完全随机设计,对照实验研究。地点与材料:研究地点为南京医科大学第二附属医院儿科,生后7dSD大鼠来源于南京医科大学实验动物中心,共60只,体质量约14～18g,雌雄不拘,饲养于屏障环境的SPF级实验动物。干预:40只大鼠制成HIBD动物模型后随机分成两组:HIBD模型未治疗组20只,HIBD模型NGF治疗组20只,另20只为正常对照组。主要观察指标:观察正常对照组及HIBD后F-VEP改变;NGF对HIBD模型的新生大鼠体质量增长情况、死亡率、左右脑质量及F-VEP波形影响。结果:HIBD模型NGF治疗组体质量增长(11.9±3.5)g,实验过程中死亡率为5%,患侧(左侧)脑质量(0.59±0.02)与未治疗组相比差异有显著意义(P均<0.01);治疗组左右脑重量差异无显著意义,而未治疗组左右脑质量犤(0.39±0.10)g,(0.57±0.05)g犦差异的显著性意义(P<0.01);HIBD后NGF治疗组与未治疗组即刻F-VEP?

摘要：背景:细胞凋亡是脑缺氧缺血神经细胞死亡的一种方式,体外试验表明神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)缺乏可诱导神经细胞凋亡。目的:探讨新生儿缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemicbraindamageHIBD)与细胞凋亡之间的关系,研究NGF对HIBD的保护作用,为用NGF治疗新生儿HIBD提供理论依据。设计:完全随机设计,对照实验研究。地点与材料:7dSD大鼠40只来源于南京医科大学实验动物中心,体质量约14～18g,雌雄不拘,饲养于屏障环境的SPF级实验动物。干预:40只大鼠制成HIBD动物模型,随机分成两组:HIBD模型对照组20只,NGF治疗组在大鼠缺氧缺血后即刻腹腔注射NGF。主要观察指标:观察NGF对HIBD模型的新生大鼠体质量增长情况、死亡率、左右脑质量影响,并用原位缺口末梢标记(insitunickendlabeling,TUNEL)法检测NGF对缺氧缺血后脑细胞凋亡的影响。结果:HIBD模型NGF治疗组体质量增长明显高于对照组(P<0.01);治疗组实验过程中死亡率明显低于对照组;HIBD模型NGF治疗组与对照组健侧(右侧)脑质量相近,但治疗组患侧(左侧)脑质量犤(0.57±0.02)g犦明显重与对照组犤(0.42±0.1)g,P<0.01犦;治疗组左右脑质量无显著差异,而对照组左右脑质量差异有显著性意义(P<0.01);TUNEL染色所见阳性凋亡细胞,其凋亡特征为胞体缩小、核固缩。

摘要：背景:临床中发现失神经可导致骨折断端骨痂过度生长甚至在肌肉中出现异位骨化,这一现象提示神经因素对骨折愈合有影响。目的:探讨神经生长因子对大鼠胫骨骨折愈合的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-06/2006-03在解放军第二军大学动物实验中心完成。材料:健康雄性3个月龄SD大鼠120只,体质量250～300g,随机分为单纯左胫骨骨折组和神经生长因子治疗组,每组60只。注射用神经生长因子由厦门北大之路生物工程有限公司提供。方法:两组大鼠制备单纯胫骨骨折,神经生长因子治疗组肌注2000AU(1.4g),1次/d,分别注射两侧腓肠肌,连续肌注2周。伤后第4周对2组大鼠骨折断端行断层CT,测量骨折断端最大横截面及计算骨痂灰度值,行生物力学3点折弯试验。主要观察指标:①骨组织形态计量学、骨密度测定。②骨痂组织形态学的观察。③免疫组化法测定骨痂组织骨钙素的表达。④观察2组大鼠骨痂中成骨细胞的超微结构变化。⑤Western印迹检测Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达。结果:神经生长因子治疗组3点折弯试验各项生物力学参数均优于单纯左胫骨骨折组(P<0.05)。形态学及超微结构观察见神经生长因子治疗组骨折愈合优于单纯左胫骨骨折组。神经生长因子治疗组Ⅰ型胶原蛋白表达明显高于单纯左胫骨骨折组(P<0.05);而单纯左胫骨骨折组骨痂Ⅱ型胶原蛋白的表达明显高于神经生长因子治疗组(P<0.05)。结论:生物力学测试及Ⅰ型胶原蛋白表达和成骨细胞微观结构均说明神经生长因子对骨折断端的骨化有促进作用,其途径有可能在骨痂生长的不同时期通过调节Ⅰ、Ⅱ型胶原的量来调控骨折的愈合。