摘要：针对单抗电荷异质体分离,采用离子交换层析机理模型,预测洗脱分离行为,辅助工艺条件优化。设计了校准实验,拟合得到模型参数,模型计算与实验吻合良好,具有良好的预测能力。利用模型分析比较了不同洗脱方式,得到最优的两步阶跃洗脱方案,具有较高的收率,但发现该分离过程对盐浓度极为敏感。进一步针对第一步洗脱盐浓度进行过程稳健性约束的过程优化,发现盐浓度为108.5 mmol/L时过程稳健性增强。经实验验证,两步阶跃洗脱收率最高可达到85.3%,稳健约束优化后第一步等度洗脱盐浓度操作区间增大为98.9~117.5 mmol/L。结果表明,模型辅助的工艺优化可以进行复杂条件分析,促进难分离体系的分离过程优化,并能够针对过程稳健性给出合理解决方案。

摘要：针对蛋白质离子交换层析分离过程预测的困难,选择zeta电位作为中间参数,建立zeta电位与层析容量因子之间的关联。选择牛血清白蛋白(BSA)作为模型蛋白质,考察了pH、离子浓度、离子种类等对蛋白质zeta电位的影响,证实了zeta电位作为蛋白质表面电荷特性表征参数的可行性。以阴离子交换Sepharose FF DEAE为模型层析介质,测定了BSA在不同pH和盐浓度下的容量因子。综合考虑蛋白质和介质两方面因素,选择两者zeta电位乘积(-ζ_1×ζ_2)作为中间参数,对于不同pH和盐浓度的流动相,(-ζ_1×ζ_2)与容量因子的对数呈现良好的线性关系,实现了由简便的zeta电位分析预估宏观离子交换层析分离行为的目的,该关联关系的建立将有助于层析分离过程的优化设计。

摘要：目的以辛酸沉淀结合离子交换层析纯化破伤风抗毒素马免疫血浆,获得高质量的马IgG,为抗毒素F(ab')2的制备奠定基础。方法通过对辛酸沉淀马血浆过程中的pH、辛酸浓度以及血浆稀释倍数的实验设计(DoE),研究不同条件对IgG纯度、效价、比活性、浊度以及过滤速度的影响,确定各工艺参数的可操作区间,并结合Capto DEAE阴离子交换层析以流穿模式进一步纯化IgG。结果马血浆经一步辛酸沉淀获得的IgG纯度(SDSPAGE)大于92%、分子排阻色谱(SEC)纯度大于95%,比活性较血浆提高2.14±0.29倍;辛酸沉淀后的IgG样品经阴离子交换层析,可有效去除聚合体以及小分子杂质,将纯度提高至95%(SDS-PAGE)和98%(SEC)。结论马血浆经辛酸沉淀和阴离子交换层析可获得高纯度、高比活的IgG。

摘要：对Pleurotus eryngii Co60-7菌株发酵液中木质素降解酶的分离纯化过程进行了研究,设计了一条主要由加盐沉淀和离子交换组成的分离纯化路线。通过35%硫酸铵饱和度的初沉和75%硫酸铵饱和度二沉可最大程度去除发酵液中的杂蛋白并获得目标蛋白,蛋白回收率为90.8%,纯化因子为3.81。用DEAE-SepharoseTMFast Flow进行三步洗脱层析,可较好地实现发酵液中目标蛋白的捕获。经过该纯化路线,木质素降解酶蛋白回收率达75.42%,纯化因子为10.55。经SDS-PAGE和Native-PAGE电泳分析,洗脱液DEⅡ中含有3种木质素降解酶组分。用该酶液进行溴酚蓝、亚甲基蓝和刚果红降解实验,结果表明该木质素降解酶液对3种染料都有不同程度的降解,染料间结构的差异会影响其降解效率。

摘要：多接收器等离子体质谱仪(MC-ICP-MS)高精度同位素组成的准确测定,依赖于对样品中待测元素的分离纯化。改进了Rb-Sr和Sm-Nd化学分离方法,检测AG50W-X12树脂及P507萃淋树脂对Rb-Sr和Sm-Nd的分离效果,并通过测定标准物质中Sr和Nd的同位素组成进行验证。结果表明,AG50W-X12树脂经2次分离能有效去除Rb,满足MC-ICP-MS高精度测定Sr同位素比值的要求;P507萃淋树脂能很好实现Sm-Nd分离,同时去除大部分Ce,满足仪器高精度测定Nd同位素比值的需要。

摘要：以人工蛹虫草固体培养基为原料,首先热水浸提虫草素,然后设计单因素试验和正交试验,通过离子交换层析进行分离。结果表明:洗脱流速、料水比为主要影响因子。最优条件为:料水比1∶16,洗脱流速为30滴/min,离子柱pH 3.5,此时虫草素的得率为0.014 2%。

摘要：设计"KTAprime plus蛋白质层析系统纯化绿色荧光蛋白(GFP)"的综合实验,以GFP蛋白为研究对象,在大肠杆菌中大量表达重组GFP蛋白,经镍柱亲和层析、离子交换层析以及凝胶过滤层析3种常用层析技术逐步纯化,各步纯化样品经SDS-PAGE鉴定分析,最终获得高纯度的GFP蛋白。通过该实验使学生深入、全面、系统地掌握生命科学研究中最新的蛋白质分离纯化技术,提高学生的科研水平和综合能力。

摘要：探讨不同pH值和盐条件下混合模式层析介质(MMA Focurose 6FF)与离子交换层析介质(DEAE Fo‐curose 6FF)的牛血清白蛋白(BSA)吸附性能.结果显示:1)未加盐时,两种介质均在BSA等电点附近有最大饱和吸附容量Q_(m),当pH值偏离等电点,Q_(m)下降,表观解离常数Kd升高;2)添加NaCl后,MMA介质的BSA吸附受盐浓度影响较小,中低盐条件下有较高Q_(m),DEAE介质在低盐时可吸附BSA,但随NaCl浓度升高,Q_(m)急剧下降,高盐下几乎不吸附;3)添加(NH_(4))_(2)SO_(4)后,MMA介质出现“U”型吸附规律,0.50~0.75 mol/L时Q_(m)最低,高盐时Q_(m)可恢复60%以上,且pH值越高,恢复比例越大,DEAE介质基本不吸附BSA.结果表明,混合模式介质具更佳的耐盐吸附性能,本结果可为蛋白分离设计提供参考.