摘要：根据已发表的禽腺联病毒(AAAV)基因组序列设计了1对引物,经PCR扩增出VP3基因,将其克隆入原核表达载体pET-30a,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下VP3蛋白获得了正确表达,SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白的分子质量正确。将目的蛋白切胶免疫ICR小鼠,制备了针对重组蛋白VP3的多抗血清,Western-blot结果显示,制备的抗血清能够与AAAV VP抗原发生特异反应。结果表明,VP3基因在大肠杆菌中获得了成功表达,且制备的多抗血清可以用于VP基因的表达检测。

摘要：根据禽腺联病毒Rep基因序列设计2对引物,分别扩增出Rep78和Rep52基因,将其克隆至杆状病毒双表达载体pFastBacDual,获得重组穿梭质粒pFastBacDual-Rep,将其转化到*** DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组病毒表达质粒rBacmid-Rep。在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-Rep。SDS-PAGE结果分析表明,Rep78、Rep52均获得了表达,Western blot结果显示表达的重组蛋白能够与Rep52多抗反应,具有良好的反应原性。结论:禽腺联病毒的非结构蛋白Rep78、Rep52基因在昆虫细胞中获得了成功表达。

摘要：根据禽腺联病毒VP基因序列设计引物,扩增出VP基因,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1,经酶切鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBac-VP,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBac-VP转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异性转座作用,经抗性和蓝白斑筛选,获得含VP基因的重组穿梭载体rBacmid-VP。研究结果为进一步在昆虫细胞中表达VP基因,开发研制重组禽腺联病毒载体奠定了基础。

摘要：为同时在昆虫细胞中按照合适比例表达禽腺联病毒的3个结构蛋白质,首先根据禽腺联病毒VP基因序列设计引物,扩增VP基因,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1,获得重组转移载体pFastBac-VP,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-VP,在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-VP。SDS-PAGE结果分析表明,3个结构蛋白质VP1、VP2和VP3均获得了表达,分子量正确,且比例为1∶1∶10。Western blot结果显示,表达的重组蛋白质能够与VP3多抗反应。以上结果说明禽腺联病毒的3个结构蛋白质均在昆虫细胞中获得了成功表达。

摘要：为制备禽腺联病毒Rep蛋白多抗血清,根据已发表的禽腺联病毒基因组序列设计2对引物,扩增出Rep78、Rep52基因,分别将其克隆入原核表达载体pET-30a,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下,2种蛋白均获得了高效表达,SDS-PAGE显示2种重组蛋白分子量均正确。将重组蛋白切胶免疫ICR小鼠,分别制备了针对2种蛋白的多抗血清,Western blot实验显示制备的抗血清能够与Rep78和Rep52抗原发生特异反应。以上结果说明,Rep78和Rep52蛋白在大肠杆菌中获得成功表达,且制备的多抗血清可用于Rep基因的表达检测。