摘要：根据副溶血弧菌种特异性基因(tox R)、耐热直接溶血素基因(tdh)和相对耐热直接溶血素基因(trh)为靶基因分别设计引物,进行PCR扩增及反应条件的优化,建立了检测含有溶血素毒力基因的致病性副溶血弧菌的多重PCR方法。3对引物能分别特异性地扩增出368、269、486 bp的目的片段。副溶血弧菌均能扩增出tox R基因,不含溶血素基因的菌株(tdh-/trh-)仅扩增出1条目的片段,而含不同溶血素基因的致病性副溶血弧菌则分别扩增出2条(tdh+/trh-或tdh-/trh+)和3条(tdh+/trh+)特异性条带。检测其他非副溶血弧菌的供试菌,则不出现任何扩增条带。人工模拟样品检测结果显示对致病性副溶血弧菌的最低检测浓度为103CFU/m L。结果表明该多重PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏性,对检测致病性副溶血弧菌有重要意义。

摘要：为建立一种快速、准确同时检测5种致病性弧菌的高通量液相芯片技术,本研究针对霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌和拟态弧菌的10个目的基因,包括5个种特异性基因和5个毒力基因,分别设计特异性引物和探针,多重PCR扩增后的产物与偶联有不同核酸探针的微球混合物进行杂交反应,利用液相芯片检测仪分析结果。结果显示,本方法同时检测这5种致病性弧菌时,检出限最高达到1.8×10^(2)CFU/mL;检测包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、河流弧菌、沙门菌、李斯特杆菌和铜绿杆菌等常见细菌时,均无交叉反应,表明特异性好;检测不同批次的样品时,变异系数均小于8%,表明重复性良好。本研究建立的液相芯片检测方法能够快速同时检测这5种致病性弧菌,具有高通量、灵敏性高、重复性好、可控性强、节省样本和时间等优点,对水产品中多种重要致病性弧菌的检测和流行病学调查提供了技术支持。

摘要：化脓链球菌是一种常见的食源性致病菌,从19世纪80年代起,化脓链球菌引起的感染在全球范围内呈逐步上升之势并发展成为人类重要致病菌之一。通过已公布的13株化脓链球菌的基因组序列找出具有种特异性的基因序列。运用BLAST(Basic Local Alignment Search Tool,基本局部比对工具)在GenBank中进行序列对库的比对结果表明:化脓链球菌的某些基因(SmeZ,emm,spyM51755)具有种特异性。以这些基因为目的基因,共设计七对引物。经PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应)检测发现spyM引物对(spyM51755F,spyM51755R)具有很高的特异性。利用该引物对,建立可快速且灵敏地检测食品中化脓链球菌的PCR方法,其灵敏度达到10 cfu/g样品。