摘要：移植物抗宿主病(GvHD)是异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)后主要的并发症和死亡原因。根据临床特征GvHD主要分为急性GvHD和慢性GvHD,可累及皮肤、肝脏、胃肠道等全身多个器官,是一种严重且异质性高的疾病。糖皮质激素是GvHD一线系统治疗,激素难治GvHD的患者预后较差。近年来,GvHD新药研发成为热点,伊布替尼、芦可替尼、贝舒地尔相继在国际获批用于GvHD二线和/或后线治疗用药,国内也有多个创新药正处于临床研发阶段。在总结近年上市药物临床研发经验以及国外监管考量的基础上,从技术审评角度,结合GvHD临床需求、疾病和药物特点、国内外差异等,对GvHD治疗药物的临床研发和评价中关注的重点内容进行讨论,以期为此类药物的临床研发和评价提供参考,加快创新药物研发。

摘要：目的探讨小牛血去蛋白提取物眼用凝胶对于骨髓移植术后慢性移植物抗宿主病（cGVHDs）引起的干眼的治疗效果。方法采用随机双盲交叉设计研究方法，将2009年9月至2010年12月在厦门大学附属厦门眼科中心眼表疾病专科门诊确诊为骨髓移植术后慢性移植物抗宿主病引起的中重度干眼患者12例（24只眼）随机分为A组（6例12只眼）和B组（6例12只眼）。治疗第一阶段A组接受自家血清治疗，B组接受小牛血去蛋白提取物治疗；待第一阶段治疗洗脱后（停药一个月）第二阶段A组接受小牛血去蛋白提取物治疗，B组接受自家血清治疗。两组均加用0．05％羧甲基纤维素钠滴眼液和0．1％氟甲松龙滴眼液治疗。分别在治疗前，第一阶段治疗后，第二阶段治疗前和第二阶段治疗后的各时间点检测并评定患者干眼主观症状、视力、角膜荧光素染色（FL）、泪膜破裂时间（BUT）及基础泪液分泌试验（SIt），分析不同药物治疗前后症状体征改善情况使用非参数检验，两种药物间和不同给药顺序对症状体征影响的比较采用二阶段交叉设计方差分析。结果眼部症状视疲劳、干涩感、异物、畏光、疼痛、眼红、视力在自家血清（U=22．5，43．2，27．0，17．4，21．5，38．5，23．0，均P〈0．05）和小牛血去蛋白提取物（U=33．0，24．5，29．0，40．5，26．0，36．0，51．0，均P〈0．05）两种药物治疗后均较治疗前有统计学意义，A、13组治疗后FL评分分别为2．00±1．00及3．00±1．50，与治疗前相比差异有统计学意义（U=273．0，135．0；P〈0．01），通过交叉设计方差分析比较视疲劳、干涩感、烧灼感、畏光、疼痛、流泪、眼红、视力、FL、BUT以及SIt在两种药物间（F=1．45，2．43，2．14，1．91，1．63，0．51，1．19，0．68，2．75，0．77，1．23，均P〉0．05）和两种给药顺序间（F=3．17，2．62，0．91，1．42，0．89，2．17，0．95，1．54，3．21，6．72，1．37，均P〉0．05）无统计学意义，两种药物间异物感评分差异有统计学意义（F=11．38，P〈0．05），两种给药顺序间异物感评分差异无统计学意义（F=2．62，P〉0．05）。结论小牛血去蛋白提取物眼用凝胶治疗骨髓移植术后慢性移植物抗宿主病引起的中重度干眼中，在缓解眼部症状、促进角膜上皮修复方面与自家血清的效果相同。

摘要：背景:移植物抗宿主病是导致异基因外周血造血干细胞移植失败的主要原因,口服耐受是研究治疗移植物抗宿主病的新模式。目的:探讨骨髓移植前供鼠经口服受鼠脾淋巴细胞诱导耐受是否能增加异基因骨髓移植后受鼠对供者移植物的免疫耐受,从而减轻移植物抗宿主病,并与目前常用于预防移植物抗宿主病的免疫抑制药物比较作用效果。设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2008-12在东南大学医学院中心实验室完成。材料:供鼠为雄性纯种近交系小鼠C57BL/6J(H-2b),受鼠为雌性纯种近交系小鼠BALB/c(H-2d)。方法:用主要组织相容性抗原完全不合的纯种近交系小鼠建立异基因骨髓移植/移植物抗宿主病动物模型,小鼠共分5组,分别给予不同的急性移植物抗宿主病预防方案:①口服耐受组:移植前口服受鼠脾淋巴细胞相当于10μg蛋白,隔天1次,共3次。②雷帕霉素组:1.5mg/(kg?d)灌胃,从移植后第1天(+1d)开始用药。③环孢素A+甲氨蝶呤组:环孢素A1.5mg/(kg?d)腹腔注射,从移植后+1d开始用药,当小鼠的胃肠功能逐渐恢复后,改为环孢素A5mg/(kg?d)灌胃,甲氨蝶呤0.4mg/(kg?d)腹腔注射,移植后+1,+3,+6,+11d用药。④空白对照组:移植后未用药。⑤辐照不移植组:照射后未予骨髓移植。主要观察指标:各组小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病的出现情况及免疫耐受指标差异。结果:移植后小鼠出现典型的移植物抗宿主病症状,空白对照组小鼠死亡高峰在移植后第14～18天,死亡率接近100%。口服耐受组、雷帕霉素组和环孢素A+甲氨蝶呤组小鼠急性移植物抗宿主病症状明显减轻,平均生存时间较空白对照组显著延长(P<0.05);小鼠急性移植物抗宿主病病理表现减轻,口服耐受组病理变化少于其他各组;流式细胞仪监测CD4+/CD8+比值增加,CD4+CD25+细胞增加,口服耐受组增加明显;ELISA检测移植物抗宿主病产生相应细胞因子减低,且口服耐受组明显减轻。MTT结果显示,口服耐受组免疫耐受显著增强,淋巴细胞增殖明显降低。结论:口服耐受可以显著抑制体外T淋巴细胞增殖效应,增强小鼠对骨髓移植的免疫耐受,减轻移植物抗宿主病症状和病理损害程度,延长平均生存时间;与目前常用于预防移植物抗宿主病的免疫抑制药物比较,减轻移植物抗宿主病的作用更强。

摘要：背景:甲氧基聚乙二醇是一种无免疫原性的兼性聚合分子,可以共价结合方式修饰各种蛋白质,减少其免疫原性。因此,在进行半相合造血干细胞移植时,若能用甲氧基聚乙二醇对移植物的T细胞进行化学修饰,阻断其激活的途径,就可能减轻移植物抗宿主病反应,提高移植成功率。目的:构建小鼠半相合骨髓移植模型,观察甲氧基聚乙二醇修饰移植物对小鼠H2半相合骨髓移植后移植物抗宿主病的影响。设计、时间及地点:随机化配对设计实验,于2003-03/11在解放军总医院医学动物实验中心和小儿内科实验室完成。材料:纳入20只8～10周龄雄性近交系BALB/cH-2d小鼠作为供鼠,60只8～10周龄杂交获得的雌性CB6F1代H-2d/b小鼠作为受鼠。甲氧基聚乙二醇为美国Sigma公司产品。方法:常规制备供鼠骨髓及脾细胞混合悬液。受鼠行总剂量8.0Gy60Coγ射线全身均匀照射,照射后随机分为3组,每组20只。照射对照组每只受鼠经尾静脉输入RPMI-1640培养基0.5mL,单纯移植组照射后12h内经尾静脉输入未处理的半相合供鼠骨髓及脾细胞混合悬液0.5mL,修饰移植组照射后12h内经尾静脉输入甲氧基聚乙二醇修饰的半相合供鼠骨髓及脾细胞混合悬液0.5mL。主要观察指标:移植后观察动物存活率、急性移植物抗宿主病理表现及存活小鼠的染色体核型。结果:照射对照组小鼠均在2周内死亡;修饰移植组小鼠30d存活率显著高于单纯移植组(75%,40%,χ2=5.01,P=0.025)。取死亡小鼠的爪垫皮肤、肝及小肠肠管作病理组织学检查,修饰移植组急性移植物抗宿主病病理表现减轻,Thomas病理分级轻于单纯移植组。移植后75d应用染色体C带显色法检测存活受鼠的嵌合体,证实为完全供者型植入。结论:甲氧基聚乙二醇修饰移植物可明显减轻急性移植物抗宿主病,提高半相合骨髓移植存活率。

摘要：背景:转录因子FOXP3是调节性T细胞的特异性标志,对于造血干细胞移植后移植物抗宿主病的发生与FOXP3表达水平的关系目前仍存在争议。目的:观察异基因造血干细胞移植后患者外周血FOXP3mRNA的表达,初步探讨利用FOXP3mRNA表达水平的变化进行临床早期诊断移植物抗宿主病的可能性。设计:回顾性病例分析。对象:选取2001-03/2007-06在广东省人民医院血液科行异基因造血干细胞移植的白血病患者31例,男18例,女13例,平均年龄32岁。方法:所有患者均采用改良BU/CY联合FLU方案进行预处理,经深静脉输入单个核细胞数5.48(3.7～8.4)×108/kg,CD34+细胞数10.45(3.6～28.0)×106/kg。移植后出现移植物抗宿主病的患者在治疗前、治疗好转或缓解时留取外周血标本,尚无移植物抗宿主病的患者复查时采集外周血标本。主要观察指标:采用实时定量PCR技术监测外周血样本FOXP3mRNA表达及其与患者移植物抗宿主病的发生情况。结果:31例患者行异基因造血干细胞移植后,9例未出现移植物抗宿主病,9例发生急性移植物抗宿主病,13例出现慢性移植物抗宿主病。FOXP3表达水平的变化与急性移植物抗宿主病的临床演变相关,急性移植物抗宿主病发生时FOXP3水平较临床无移植物抗宿主病时明显降低(P=0.009),好转后FOXP3水平又逐步升高或恢复到基础水平;慢性移植物抗宿主病患者FOXP3的表达水平与无移植物抗宿主病患者相比无明显差异(P=0.107)。结论:急性移植物抗宿主病的发生与FOXP3表达降低有关,动态检测FOXP3mRNA表达水平的变化有可能为临床早期诊断急性移植物抗宿主病或预测其发生提供参考。实验数据未发现慢性移植物抗宿主病的发生与FOXP3表达有关。

摘要：自然杀伤（naturalkiller，NK）细胞是一类重要的免疫细胞，在机体免疫应答中起着抗病毒感染、抗肿瘤和免疫调节的作用。NK细胞活化后通过释放穿孔素启动靶细胞的凋亡，特异性地杀伤靶细胞^[1]。同时，NK细胞还能分泌细胞因子和趋化因子如1干扰素（IFN-1）、肿瘤坏死因子（TNF）一仅以及GM-CSF等，是机体天然免疫的主要承担者，

摘要：目的 探讨无关供者和单倍型亲缘供者异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）前输注第三方脐血预防移植物抗宿主病（GVHD）的效果.方法 2007年至2011年接受无关供者及单倍型亲缘供者allo-HSCT的受者共41例.脐血预防组（25例）,于移植前1d予以HLA配型为4/6～6/6的第三方脐血细胞输注,平均输入有核细胞数为（1.64±0.49）×107/kg,次日再输入供者造血干细胞.其余患者作为对照组（16例）.两组均采用抗胸腺细胞球蛋白＋环孢素A＋甲氨蝶呤＋吗替麦考酚酯预防急性GVHD.比较两组间急性GVHD的发生率、严重程度以及移植相关死亡率.结果 脐血预防组和对照组aGVHD累积发生率分别为44.0％（11/25）和68.8％（11/16）,两组比较,差异无统计学意义（x2=2.403,P＞0.05）；Ⅲ～Ⅳ度aGVHD累积发生率分别为16.0％（4/25）和37.5％（6/16）,两组比较,差异无统计学意义（x2=2.445,P＞0.05）,100 d治疗相关病死率分别为12.0％（3/25）和12.5％（2/16）,两组比较,差异无统计学意义（x2=0.002,P＞0.05）.结论 在无关供者及单倍型亲缘供者allo-HSCT前应用第三方脐血细胞,可能有效预防GVHD的发生或减轻GVHD的严重度,但尚需要进一步设计扩大规模的随机对照临床试验验证其有效性.

摘要：背景:据作者检索脐血移植中有关T细胞表达CD94与移植后发生急/慢性移植物抗宿主病的关系尚无报道。目的:初步探讨T细胞表达CD94在脐血移植免疫耐受中的作用。设计:病例-对照分析。对象:1999-01/2007-06中山大学附属第二医院造血干细胞移植中心行脐血移植的14例患儿,年龄2~9岁,中位年龄6.8岁;接受HLA全相合血缘相关脐血移植患儿9例,接受无关供者脐血移植5例。同时选取体检正常的34例儿童外周血标本作为对照,由中山大学附属二院儿科提供,男18例,女15例,平均年龄4.5岁。方法:抽取正常儿童外周静脉血2mL,14例患儿均在脐血移植后造血恢复至中性粒细胞绝对数≥0.5×109L-1时开始采集外周静脉血2mL,血液样本均置于EDTA-2Na抗凝管,待测细胞表面抗原。每1~3个月检测1次,至随访结束。所有样本在6h内完成标定,均采用双色和三色直接免疫荧光标记法,流式细胞仪检测外周血T细胞表面CD94的表达。主要观察指标:脐血移植后移植物抗宿主病的发生。移植物抗宿主病与外周血T细胞表面CD94表达的关系。结果:9例接受同胞脐血移植的患儿中,有6例未发生急性移植物抗宿主病,其余3例及接受非血缘相关脐血移植的5例患儿均于移植后6d^50d发生急性移植物抗宿主病,5例患儿发生慢性移植物抗宿主病。与正常对照比较,全部脐血移植患儿CD3+CD4+CD94+T细胞、CD3+CD8+CD94+T细胞的表达均明显升高(P<0.05)。与未发生急性移植物抗宿主病患儿比较,急/慢性移植物抗宿主病患儿CD3+CD4+CD94+T细胞、CD3+CD8+CD94+T细胞的表达均明显升高(P<0.05)。结论:脐血移植后发生急/慢性移植物抗宿主病时T细胞高表达CD94,提示T细胞CD94分子的活化参与了移植物抗宿主病的发生。

摘要：背景:预防原位肝移植术后并发症已成为目前研究热点,已有文献报道了有关细胞因子方面的研究,但是对移植物抗宿主病细胞因子检测的报道少见。目的:探索原位肝移植患者发生移植物抗宿主病后血浆细胞因子的表达及意义。设计、时间及地点:观察性实验,于2002-05/2006-09在武警总医院进行。对象:原位肝移植后确诊为移植物抗宿主病患者4例。方法:应用生物芯片技术和EVIDENCE180全自动芯片分析仪检测了4例患者在原位肝移植术后、发生移植物抗宿主病初期、中期、后期、恢复期或死亡时血清白细胞介素1α、白细胞介素1β、白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素6、白细胞介素8、白细胞介素10、血管内皮生长因子、γ-干扰素、单核细胞趋化蛋白、肿瘤坏死因子α、表皮生长因子水平。主要观察指标:12种细胞因子的表达。结果:12种血浆细胞因子在移植物抗宿主病病程中表达明显不同,白细胞介素1α、白细胞介素1β、白细胞介素2、白细胞介素4在移植物抗宿主病病程中低表达或零表达,白细胞介素10除例4在移植物抗宿主病发病前高表达外,其他患者均减低,单核细胞趋化蛋白、血管内皮生长因子、白细胞介素6、表皮生长因子、白细胞介素8逐渐增高或持续高表达,γ-干扰素仅在移植物抗宿主病发病初期轻微增高,肿瘤坏死因子α随病程轻微增高。结论:原位肝移植后发生移植物抗宿主病病程中,单核细胞趋化蛋白、血管内皮生长因子、白细胞介素6、表皮生长因子、白细胞介素8、白细胞介素10细胞因子在免疫相关损伤中起了重要作用,白细胞介素1、白细胞介素2、白细胞介素4低表达也是重要特征。

摘要：移植物抗宿主病(GVHD)是导致同种异基因造血干细胞移植患者死亡的一个主要原因,同种异基因GVHD是供者T细胞介导的、针对同种异型抗原的免疫应答。设计有选择性地清除移植物中同种反应T细胞的移植方案,做到既能预防GVHD的发生,又能保留移植物抗白血病作用是移植成败的关键。本文从单克隆抗体治疗、基因治疗和疫苗应用等三个方面综述了当前GVHD生物学防治研究的主要策略。