摘要：背景与目的:利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制哺乳动物基因表达已成为研究基因功能的一种有效方法。本研究探讨人胰岛素样生长因子1类受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)的短发夹环RNA对人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤的抑制作用。方法:设计并合成特异性靶向IGF1R的siRNA片段,构建SMMC7721-IGF1R-siRNA表达质粒,将其转入SMMC7721细胞。通过G418筛选出稳定株,移植裸鼠成瘤。同时设立对照组。根据体积的均数值绘制肿瘤生长曲线,以HE染色法观察质粒处理后瘤组织的病理改变,Westernblot检测肿瘤组织中IGF1R的表达变化,免疫组化SP法检测检测瘤组织内微血管密度,原位末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果:SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤体积与SMMC7721-IGF1R-mutation组、SMMC7721组相比差异有统计学意义(P<0.05)。病理学检查及TUNEL检测发现,SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞凋亡指数[(50.2±6.4)%]明显高于SMMC7721-IGF1R-mutation组[(5.4±1.0)%]和SMMC7721组[(6.0±2.1)%](P<0.05)。SMMC7721-IGF1R-siRNA组与SMMC7721-IGF1R-mutation组、SMMC7721相比,瘤内IGFIR蛋白表达明显下调。SMMC7721-IGF1R-siRNA组微血管密度(11.3±4.4)与SMMC7721-IGF1R-mutation组(36.7±7.6)、SMMC7721组(28.4±6.5)相比明显下降(P<0.05)。结论:构建的SMMC7721-IGF1R-siRNA具有RNA干扰作用,能抑制SMMC7721细胞裸鼠移植瘤的生长。

摘要：目的研究靶向敲除CDK2对人黑素瘤移植瘤中miRNA表达谱的影响。方法设计CDK2的sgRNA靶向序列,构建含有sgCDK2-108的重组CRISP/Cas9慢病毒质粒并转染至HEK293T细胞进行重组慢病毒的包装和纯化。在SPF级的BALB/c-nude小鼠右前肢腋下皮下注射1×10^7个人黑素瘤细胞A375进行体外移植瘤小鼠模型构建。移植瘤成瘤第35天时,瘤内注射1×10^7 TU的重组sgCDK2-108和sgCDK2-NC慢病毒并继续培养30 d后收集样本。miRNA高通量测序检测靶向敲除CDK2后移植瘤内miRNA表达谱的改变、进行miRNA靶基因、GO富集分析、KEGG通路分析、新型miRNA鉴定及二级结构预测。结果sgCDK2-108慢病毒感染组与sgCDK2-NC阴性慢病毒感染组相比,共鉴定出762个miRNA,其中上调表达35个miRNA、下调表达13个miRNA;与移植瘤组相比,共鉴定出754个miRNA,其中上调表达28个miRNA、下调表达4个miRNA。miR-1a-3p、miR-133a-3p、miR-133b-3p和miR-375-3p为共同差异表达miRNA且具有多个潜在靶分子。GO分析显示miRNA靶基因功能主要为细胞代谢调控等,KEGG通路分析显示主要涉及RNA降解和自噬等。共鉴定出290个新型miRNA且具有“V”型或“直线”型两种结构。结论靶向敲除CDK2能够改变人黑素瘤移植瘤内的miRNA表达谱。

摘要：目的观察3,6-二羟黄酮对HER-2/neu高表达人乳腺癌细胞株MDA-MB-453移植瘤生长和miRNA表达谱的影响。方法以18只雌性BALB/c裸鼠建立乳腺癌MDA-MB-453细胞移植瘤模型,按照完全随机设计原则平均分入对照组和高、低剂量作用组,移植后72 h开始给予各处理因素,低、高剂量组分别以10、20 mg/(kg.d)的3,6-二羟黄酮灌胃,对照组以等量的生理盐水灌胃。每4天测量1次肿瘤体积和裸鼠体质量,处理28 d后取材,提取肿瘤组织总RNA并分离miRNA,样品采用PolyA Polymerase加尾后利用T4RNA连接酶将带有生物素标记的信号分子与之连接,进而与微阵列杂交,通过芯片扫描和数据分析获得miRNAs表达谱。结果高、低剂量组移植瘤生长速度低于对照组,肿瘤体积分别在处理12 d和16 d后显著低于对照组(P<0.05);处理24 d后高、低剂量组移植瘤质量均显著低于对照组(P<0.01)。miRNAs表达谱分析显示,高剂量组瘤组织miRNAs表达与对照组相比显著上调的有12个,显著下降的有15个。结论3,6-二羟黄酮可显著抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-453移植瘤的生长并影响其miRNAs表达谱。

摘要：目的建立裸鼠玻璃体腔视网膜母细胞瘤移植瘤模型,观察移植瘤的生长特性,探索适用于视网膜母细胞瘤体内实验的建模方法。设计实验研究。研究对象六周龄雄性BALB/c裸鼠30只。方法30只BALB/c裸鼠随机分为三组,每组10只;体外培养Y79、WERI-RB1和SO-Rb50三株视网膜母细胞瘤细胞,调整细胞浓度为1.0×108个/ml;A组取Y79细胞悬液3μl注射于裸鼠右眼玻璃体腔,B组和C组分别注射WERI-RB1和SO-Rb50细胞,方法同A组。观察肿瘤生长侵袭情况。主要指标成瘤率、成瘤时间及肿瘤侵犯情况。结果三组BALB/c裸鼠右眼玻璃体腔注射肿瘤细胞后,A组成瘤率100%,成瘤时间3天~11周,平均成瘤时间(32.6±5.77)天;B组成瘤率88.9%,成瘤时间16天~14周,平均成瘤时间(57.4±8.42)天;C组成瘤率88.9%,成瘤时间19天~10周,平均成瘤时间(43.7±7.16)天;实验眼肿物经病理证实均为视网膜母细胞瘤。A组发生视神经侵犯7例,B组2例,C组6例;A组发生前房侵犯5例,B组无,C组4例;A组发生虹膜/睫状体侵犯5例,B组无,C组4例;三组均未见脉络膜侵犯;A组发生角膜新生血管3例,B组无,C组3例。结论通过BALB/c裸鼠玻璃体腔注射肿瘤细胞可建立视网膜母细胞瘤移植瘤模型,成瘤率高,Y79和SO-Rb50细胞株移植瘤的侵袭性高于WERI-RB1细胞株。

摘要：目的观察黑米花青素对HER-2/neu高表达人乳腺癌细胞株MDA-MB-453移植瘤血管生成的影响。方法以24只雌性BALB/c裸鼠建立MDA-MB-453细胞移植瘤模型,按照完全随机设计原则平均分入对照组、VEGF组、黑米花青素组和联合组4个处理组,分别以VEGF和黑米花青素提取物进行单独和联合干预;免疫组织化学法检测瘤组织核抗原Ki-67和Ⅷ因子相关抗原表达,评价移植瘤肿瘤细胞生长能力和瘤组织微血管密度(MVD)的变化;Western blot检测瘤组织促血管生成因子MMP-2、MMP-9和uPA表达水平的变化。结果相对于对照组,黑米花青素组瘤体积、MVD值和促血管生成因子的表达水平均显著降低(P<0.05),VEGF组上述指标则均有明显升高(P<0.05),联合组上述指标同对照组之间均无显著差异。相对于VEGF组,黑米花青素组和联合组的上述指标均有显著降低(P<0.05),其中黑米花青素组瘤体积有非常显著的降低(P<0.01)。与对照组相比,黑米花青素组核抗原Ki-67表达强阳性的细胞数显著减少,VEGF组核抗原Ki-67表达强阳性的细胞数显著增多。结论黑米花青素可能通过抑制移植瘤内血管生成而抑制肿瘤生长。

摘要：设计针对端粒酶RNA组分的特异性核酶,研究该核酶对肝癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响。构建含针对端粒酶RNA组分锤头状核酶基因的重组真核表达质粒pBBS212-RZ,以及建立人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤模型。将不同剂量的pBBS212-RZ用脂质体包裹后进行瘤体内多点注射,对照组注射生理盐水或空质粒载体pBBS212。连续注射21天后,测量移植瘤体积和重量,检测瘤组织端粒酶活性。抗端粒酶特异性核酶使瘤组织端粒酶活性下降(抑制率为72％),明显地抑制了肝癌细胞裸鼠移植瘤生长(抑制率为68％),且存在剂量依赖性。抗端粒酶特异性核酶作为一种有效的端粒酶抑制剂,可抑制肝癌细胞的生长,有望在肝癌基因治疗中发挥作用。

摘要：目的:研究肿瘤热休克蛋白70联合应用IL-2对小鼠肝癌的治疗作用,为两种免疫制剂联合应用治疗人类恶性肿瘤提供参考依据。方法:应用细胞培养、蛋白提纯、电泳、Western-blot、毛细管电泳、动物实验等方法。小鼠分别用HSP70 10μg、5μg和IL-2 50kU、100kU、2kU(维持量)按设计的方案进行治疗试验。结果:单纯应用或联合应用HSP70和IL-2均能明显地延缓小鼠移植肝癌的生长并能不同程度地延长生存期,与对照组相比(除IL-250kU组外)差异显著(P90d)者仅见于接受HSP70 10μg治疗组,40％(2/5)的HSP70 10μg组及HSP70 10μg联合应用IL-2 50kU组小鼠,和60％(3/5)的HSP70 10μg联合应用IL-2 100kU组小鼠,获长期生存的小鼠其肿瘤最终全部消退。与无长期生存小鼠的其他组相比差异十分显著(P<0.025-0.05)。IL-2 100kU与HSP70 5μg的作用相当。结论:肿瘤来源的HSP70较IL-2具有更强的治疗作用,在联合应用实验的治疗组中HSP70对延缓和消除肿瘤起主要作用。更重要的是,合适剂量的HSP70与IL-2联合应用(本研究中HSP70 10μg与IL-2 100kU)能明显地提高对荷瘤小鼠的治疗作用。

摘要：[目的]观察豆蔻提取物对人胃癌细胞裸鼠移植瘤的生长和对肿瘤血管生成的影响。[方法]建立人胃癌SGC-7901细胞裸鼠皮下移植瘤模型(n=24),随机分成4组(n=6),对照组、豆蔻组、5-Fu组、联合组,各组按设计剂量给药。测定移植瘤体积、瘤重及抑瘤率;用免疫组化法检测各组移植瘤瘤体中血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的表达情况。[结果]豆蔻组、5-Fu组、联合组的瘤重和瘤体积明显低于对照组(P<0.05),3组抑瘤率分别为45.83%、66.96%和77.28%。联合组中VEGF表达率和MVD计数明显低于对照组(P<0.05)。[结论]豆蔻提取物可抑制胃癌移植瘤的生长,与5-Fu联合应用具有协同作用,其作用机制可能与下调VEGF的表达、减少MVD有关。

摘要：目的观察豆蔻提取物对人胃癌细胞裸鼠移植瘤的影响及可能的机制。方法建立24只裸小鼠胃癌原位移植瘤模型,随机分成4组(每组6只):对照组、5-FU组、豆蔻提取物组、联合组,各组按设计剂量给药,实验期间,每3 d测量移植瘤瘤径及体积,4周后,颈椎脱臼法处死,计算抑瘤率,用免疫组化法检测各组移植瘤瘤体中COX-2和VEGF的表达情况。结果成功建立胃癌裸鼠原位移植瘤模型,各组实验裸鼠体重下降明显低于对照组,各组抑瘤率分别为:5-FU组55.99%,豆蔻提取物组42.81%,联合用药组67.36%,联合用药组瘤体中COX-2和VEGF的表达明显下调。结论豆蔻提取物可抑制胃癌原位移植瘤的生长,豆蔻提取物联合5-FU可显著抑制胃癌原位移植瘤的生长,2组具有协同作用,其抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤生长和转移的作用机制可能与下调COX-2和VEGF的表达有关。

摘要：目的观察豆蔻提取物对人胃癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用和对环氧合酶-2(Cycloozygenase-2,COX-2)表达的影响。方法建立人胃癌SGC-7901细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组、豆蔻组、5-FU组、联合组,各组按设计剂量给药。测定移植瘤体积、质量及抑瘤率;用免疫组化法检测各组移植瘤瘤体中COX-2的表达情况。结果豆蔻组、5-FU组、联合组的平均瘤质量和瘤体积明显低于对照组(P<0.05),3组抑瘤率分别为45.83%、63.67%、79.25%。联合组瘤体中COX-2表达的程度明显低于对照组(P<0.05)。结论豆蔻提取物可抑制胃癌移植瘤的生长,与5-FU联合应用具有协同作用,其作用机制可能与下调瘤灶中COX-2的表达有关。