摘要：为提高空肠弯曲菌的检测效率和检出率,应用免疫磁珠技术自行制备弯曲菌免疫磁珠,用以直接捕获受检样品中的空肠弯曲菌,不需要增菌培养;设计了检测空肠弯曲菌鞭毛蛋白A(flaA)基因的引物与荧光标记探针,首次建立了空肠弯曲菌的磁捕获-荧光聚合酶链式反应快速检测及鉴定方法.应用于实物检测的结果表明,该方法具有灵敏度高、选择性好、简便等特点,可在24h内完成检测,提高了环境样品及食品中空肠弯曲菌的检出率.

摘要：本研究使用恒温环介导技术,以空肠弯曲菌的促旋酶基因A(gyrA)设计引物,建立空肠弯曲菌的LAMP快速检测方法。不同来源的4株空肠弯曲菌LAMP检测均显示阳性,其他14种细菌LAMP检测显示阴性。实验结果表明,设计的引物具有良好的特异性。本研究进行了LAMP检测方法与细菌平板计数法和PCR法的灵敏度比较,结果LAMP检测与PCR法有相近的灵敏度,比细菌平板计数法灵敏度高3个数量级。我们还研究发现提取核酸前加入DNase可以有效地减少死菌DNA对LAMP结果的影响。使用LAMP方法对鸡法氏囊的检测表明,结合核酸提取步骤中的DNase处理步骤,可以准确的检测出鸡法氏囊中的空肠弯曲菌。

摘要：首先根据空肠弯曲菌mapA基因序列设计LAMP引物,建立检测空肠弯曲菌的LAMP检测方法。继而对LAMP方法中不同反应组分的浓度分别进行筛选,结果显示,当内外引物浓度分别为1.6,0.2μmol/L、Mg2+浓度为8mmol/L、dNTP浓度为1.4 mmol/L、Betaine浓度为0.8 mol/L时获得最佳的反应结果。最后对LAMP反应的特异性和敏感性进行检测,特异性检测结果显示,对其他13种革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌扩增结果均为阴性;敏感性检测结果显示,对空肠弯曲菌基因组DNA的检测限为每个反应管100 fg,对空肠弯曲菌培养菌液检测限为每个反应管7.5cfu。试验建立的LAMP方法为快速简便地自动物源性产品中检测空肠弯曲菌奠定了基础。

摘要：构建空肠弯曲菌表面蛋白特异性多表位抗原原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达,免疫动物后检测其抗血清与空肠弯曲菌菌体的反应性。从空肠弯曲菌的6个表面蛋白中分析到特异性抗原表位,人工合成其串联基因片段,将其插入原核表达载体,获得重组质粒pET-32a(+)-CJMEA-A,经IPTG诱导后表达出25k的目标蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,Western blot和间接ELISA检测重组蛋白抗原性和抗血清反应性。结果表明目标蛋白具有良好的反应原和免疫原性,抗血清能与菌体发生反应。其抗体可用于***免疫磁珠和免疫胶体金等检测方法的建立。

摘要：为优化空肠弯曲菌分离培养过程并建立PCR鉴定方法,从鸡盲肠内容物中分离培养获得空肠弯曲菌,以该菌特异的保守序列为模板自行设计引物,扩增产物为773bp片段。鸡盲肠内容物分离培养得到空肠弯曲菌,而其他细菌如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌均不能扩增出特异性片段,并对分离培养过程进行了优化。分离培养过程的优化有利于检测工作的进行,而所建立的PCR鉴定方法具有灵敏、特异的特点,可克服传统生化鉴定的缺点,为空肠弯曲菌的检测提供新方法。

摘要：为建立一种空肠弯曲菌和沙门菌的双重实时荧光定量PCR检测方法,根据空肠弯曲菌的保守基因hipO和沙门菌的保守基因invA分别设计合成引物和TaqMan探针,分别使用FAM、JOE作为探针报告基团,TAMRA作为探针淬灭基团。优化反应体系及条件,建立适用于检测食品中空肠弯曲菌和沙门菌的双重实时荧光定量PCR方法。结果显示,该检测方法特异性强,灵敏度高,空肠弯曲菌检测限可达10CFU/mL,沙门菌检测限达230CFU/mL。表明建立的双重实时荧光定量PCR可为实现食品中空肠弯曲菌和沙门菌的同时检测提供新方法。

摘要：根据空肠弯曲菌基因序列设计引物,以菌株ATCC 29428为模板扩增出peb1A基因片段,定向克隆至pMD18-T载体中,并对克隆片段测序,比较所测序列与不同来源弯曲菌的同源性;用软件改造并合成peb1A基因78 bp^780 bp区间片段,PCR扩增后,构建出表达载体pET-28a(+)-peb1Ag,转化至***21(DE3)后诱导表达,纯化后获得重组蛋白PEB1;将其进行Western blot分析、小鼠免疫试验。结果表明,克隆的peb1A基因序列与报道的NCTC 11168核苷酸同源性为98.1%,改造表达后的重组蛋白PEB1具有良好的抗原性和免疫原性,免疫小鼠后血清效价达1∶12 800,为空肠弯曲菌保护性抗原的研究和单克隆抗体的筛选奠定了基础。

摘要：以*** ORF-C基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针,建立了实时荧光定量PCR快速检测***的方法。结果显示,对15株试验菌株进行荧光定量PCR检测,只有***菌株检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为11 CFU/m L,利用该检测方法对采集的60份样品进行检测,共计检出1份***阳性样品,与国标法GB 4789.9—2014检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。

摘要：目的建立同时检测空肠弯曲菌、单核细胞增生性李斯特菌（简称单增李斯特菌）和大肠杆菌O157的多重聚合酶链反应（PCR）检测技术。方法根椐空肠弯曲菌mapA基因序列、单增李斯特菌的编码溶血素（hly）基因序列和大肠杆菌的O157抗原（rfbE）基因序列,分别设计了3对特异引物,PCR扩增的目的基因片段为589 bp、360 bp和194bp;并对反应条件进行了优化。结果对3种致病菌检测,多重PCR检测DNA的敏感度分别为空肠弯曲菌2.264 ng、单增李斯特菌37.92 ng、大肠杆菌2.100 ng,样品检测时间6-8 h。结论该方法操作简便,检测周期短,特异性和敏感度高,为同时检测污染样品中空肠弯曲菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157奠定了基础。

摘要：目的建立快速检测空肠弯曲菌的PCR方法。方法从鸡猪样品中分离培养获得空肠弯曲菌,以该菌特异的VS1基因保守序列为模板自行设计引物,扩增产物为516bp片段,同时进行特异性、灵敏度试验。结果显示该方法只对空肠弯曲菌有扩增产物出现,而其它细菌如大肠杆菌、沙门氏菌、无乳链球菌、粪链球菌、金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌ATCC、腐生葡萄球菌等均不能扩增出特异性片段,检测灵敏度达6 CFU/ml。结论该方法具有灵敏、高效、特异、稳定的特点。