摘要：目的为研制有效的空肠弯曲菌疫苗,构建PEB1与LTB融合基因的空肠弯曲菌疫苗,并初步探讨pcDNA3.1(-)-PEB1-LTB核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫BALB/c小鼠的免疫应答水平。方法通过腿部肌肉注射免疫小鼠的方式,在第0、3、6周采用核酸单独免疫与核酸蛋白联合免疫小鼠的免疫程序,于第5、8周末,测量小鼠体液免疫应答和细胞免疫应答水平。结果 3次免疫后,核酸蛋白免疫组诱导的IgG抗体含量[(14.392±0.579)μg/ml]是核酸疫苗单独免疫的2.43倍(P<0.05),说明核酸蛋白联合免疫诱导了更高的体液免疫应答水平;3次免疫后,核酸疫苗单独免疫组诱导的IFN-γ水平[(1 472.34±73.99)pg/ml]是联合免疫组[(290.323±15.46)pg/ml]的5.07倍,说明PEB1-LTB核酸疫苗单独免疫诱导较高的细胞免疫应答。结论核酸疫苗能诱导较强的细胞免疫应答,与PEB1-LTB蛋白联合免疫呈现出不同的免疫应答特点。该研究为抗空肠弯曲菌疫苗的优化设计与合理应用提供了理论依据。

摘要：目的为实验动物微生物检测提供一种简便、灵敏、快速,并且特异性强的小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、志贺氏菌和空肠弯曲菌多重PCR检测方法。方法根据小肠结肠炎耶尔森氏菌fox基因、假结核耶尔森氏菌inv基因、志贺氏菌ipa H基因及空肠弯曲菌gyr A基因设计并筛选出特异性引物;优化退火温度等条件,分析多重PCR的特异性、敏感性,使用该多重PCR方法检测小鼠和豚鼠样品。结果多重PCR扩增出了预计的PCR产物,即小肠结肠炎耶尔森氏菌(511 bp)、假结核耶尔森氏菌(779 bp)、志贺氏菌(290 bp)和空肠弯曲菌(156 bp)。该方法的灵敏度为1×10-3ng/μL(小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、志贺氏菌)和1×10-2ng/μL(空肠弯曲菌)。特异性检测未从其他菌中检测出阳性条带。使用该方法从样品中检测出不等的阳性样品数。结论该多重PCR方法对实验动物微生物检测具有很好的应用和开发前景。

摘要：目的建立空肠弯曲菌TaqMan实时荧光-PCR方法,用于粪便标本的直接检测。方法根据空肠弯曲菌特异性基因hipO和mapA分别设计引物和探针,在对2组引物和探针进行灵敏度、特异性和重复性评价的基础上,对45例临床腹泻患者粪便标本提取DNA之后,荧光PCR检测,同时进行分离培养。结果两组引物和探针能准确检测空肠弯曲菌菌株2株,检测限可达到10～20 cfu/ml,并与其他肠道致病菌无交叉反应。检测45份腹泻病例粪便标本,该方法检测到3份为阳性,同时进行的传统培养方法仅从该3份标本中的两份中分离到空肠弯曲菌。结论本研究建立的TaqMan荧光PCR检测粪便标本中所携带的空肠弯曲菌灵敏度高,特异性好,能够提高粪便中空肠弯曲菌的阳性检出率和缩短检测时限。

摘要：[目的 ]建立空肠弯曲菌液相芯片检测方法。[方法 ]本研究将空肠弯曲菌HIP蛋白单克隆抗体与聚苯乙烯微球偶联,结合双抗体夹心技术建立空肠弯曲菌液相芯片检测方法,测定不同浓度的抗体与微球偶联率。通过L9(34)正交设计试验优化方法的反应条件,并进行灵敏度和特异性试验。[结果 ]较优实验条件即多克隆抗体工作浓度为1:100、生物素标记的羊抗兔IgG工作浓度为1:500、SA-PE的工作浓度为10ug/mL、生物素标记的抗体与SA-PE反应时间为90min。该方法灵敏度可达103CFU/mL,与其他常见食源性致病菌无交叉反应。[结论 ]该方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可快速检测食品中的空肠弯曲菌。

摘要：目的建立实时荧光PCR快速检测空肠弯曲菌的方法。方法以空肠弯曲杆菌HipO基因的保守序列为模板设计特异性引物探针,建立一种能快速检测样本中空肠弯曲杆菌的实时荧光PCR方法;对方法的特异性和敏感性进行评价,并以正常人粪便为空白样本,添加一定量空肠弯曲菌标准株菌液进行检测,以对方法的检测效果进行初步评价。结果该实时荧光PCR方法只对空肠弯曲杆菌进行特异扩增,同种属的结肠弯曲菌及其他常见食源性病原菌均不能扩增;整个检测过程只需要80min,对空肠弯曲菌菌悬液可检测至5个细菌,对加标粪便样本可检测至10～100个细菌。结论本研究建立的实时荧光PCR检测空肠弯曲菌方法不仅能实现对空弯菌的快速检测,而且还为空弯菌的快速诊断及其引起的食源性疾病的监控溯源提供有意义的参考。

摘要：目的:基于TaqMan-MGB探针的荧光定量PCR技术,研发出一种定量检测食品污染物中空肠弯曲菌的方法,为食品污染物调查提供快速、可靠的监测工具。方法:根据TaqMan-MGB探针原理,在空肠弯曲菌基因组保守区设计引物和探针,探针的5′端用FAM荧光标记,3′端标记MGB,建立基于TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法。并对其特异性、灵敏度、重复性进行评价,然后对收集的市场食品污染物调查样本进行检测,与常规方法做对照。结果:所建立的实时荧光定量PCR方法可准确、特异的检测空肠弯曲菌,最低检测限为10 cfu/ml;对50例市场污染物调查样本进行评价,结果显示6份食品污染物调查样本中空肠弯曲菌为阳性,其余为阴性,结果与常规培养检测结果一致。结论:空肠弯曲菌TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法具有结果可靠、操作简便等优势,比目前常规检测方法更灵敏,该方法可用于食物污染物调查、临床检验等多个方面。

摘要：弯曲菌可引起人们食源性疾病，减少家禽肠道弯曲菌可降低家禽产品污染。辛酸是一种中链脂肪酸，可杀灭各种病原菌。美国阿肯色大学研究了在即将屠宰的肉鸡饲料中添加辛酸对肉鸡肠道中弯曲菌的影响。他们设计了4个试验，在试验1和2中（n=60），试验组被分为6个组，分别为对照组、

摘要：为了解急性腹泻病人空肠和结肠弯曲菌的感染率，建立了空肠和结肠弯曲菌的ＰＣＲ检测方法。引物设计在结肠弯曲菌鞭毛Ａ基因高度保守区，扩增产物为４５０ｂｐ。结果显示该方法仅在空肠和结肠弯曲菌ＤＮＡ有扩增产物出现，最小检测量达５０ｆｇＤＮＡ，而其它细菌如幽门弯曲菌，亲水气单胞菌，豚鼠气单胞菌，副溶血弧菌和产肠毒素性大肠埃希菌均未见扩增产物。检测急性腹泻患者粪便１００份，１１例为阳性。

摘要：目的克隆并鉴定布鲁氏菌的16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因,为建立实时荧光定量PCR检测方法作准备。方法设计、合成布鲁氏菌的16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲菌flaA、肝螺杆菌flaB和幽门螺杆菌的cagA基因的特异性引物;PCR扩增、克隆16SrRNA、flaA、flaB和cagA基因;对重组质粒进行酶切鉴定、PCR鉴定和测序分析。结果布鲁氏菌的16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲杆菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的ca-gA基因PCR扩增产物分别在612bp、600bp、922bp、637bp、1545bp和1168bp处出现特异性目的条带,结果均与预期扩增的目的片段大小一致。将PCR产物分别与pMD18-T载体连接并转化感受态细菌大肠埃希菌JM109。对重组质粒pT-BC16SrRNA、pT-MP16SrRNA、pT-CP16SrRNA、pT-CJflaA、pT-HHflaB和pT-HPcagA分别进行酶切鉴定及PCR鉴定,结果均可见特异性目的条带。测序结果显示,布鲁氏菌的16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因序列与GenBank中细菌相应序列同源性高达100%,说明上述6种致病菌的16SrRNA、flaA、flaB和cagA基因已成功克隆。结论成功克隆了布鲁氏菌16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因,为建立实时荧光定量PCR检测方法奠定了基础。

摘要：据《中华预防医学杂志》1999年9月33卷第5期报道 中国协和医科大学流行病学教研室乌正赉等,为探讨儿童格林-巴利综合征(GBS)的危险因素,采用病例对照设计方法。