摘要：目的通过同源重组法构建LuxS基因缺失的变形链球菌（Streptococcus mutans）突变株。方法运用基因同源重组方法将红霉素抗性基因（Eym‘）连接到PCR扩增LuxS基因两端区域产生的2个基因片段之间，并共同插入到pUC19载体的多克隆位点中，构建出带红霉素抗性标志的缺失突变载体pUCluxKO。将突变载体转化到含完整LuxS基因的突变受体变形链球菌标准株中，红霉素筛选出LuxS基因缺失的变形链球菌突变株，并经PCR、生物荧光检测及DNA测序鉴定。结果构建的突变载体经限制性内切核酸酶酶切分析显示，产生的条带与设计结果完全一致。PCR方法扩增突变株LuxS和Eym＇基因显示，LuxS基因已被完整敲除掉，经生物荧光检测，突变株不能诱导哈氏弧菌（Vibrio hazy／）BB170的生物发光，说明不能产生信号分子AI-2（autoinducer-2）。DNA测序证实筛选得到了LaxS基因缺失的变形链球菌突变株。连续传代培养后证实，变形链球菌LaxS基因突变株具有良好的稳定性。结论成功构建出LaxS基因缺失的变形链球菌突变株，为研究LaxS基因对变形链球菌致龋毒力的影响奠定了基础。

摘要：PCR扩增出鳗弧菌M3溶血素基因的保守区序列,根据保守区序列设计引物,利用反向PCR和巢式PCR 扩增出溶血素基因的部分序列,结合构建的鳗弧菌M3的基因组文库,克隆出溶血素基因的全长序列.根据基因推测的氨基酸编码序列与已发表的血清型为A的鳗弧菌PT84057有86%的相似性.用自杀质粒对鳗弧菌M3染色体上的溶血素基因进行了插入突变, 将突变株对金鱼进行肌肉注射,结果发现,突变株的毒力没有发生显著的变化,证明所克隆的溶血素基因对鳗弧菌M3的毒力没有直接的贡献.

摘要：自1965年以来,我国对产气杆菌、乳酸菌、攻瑰暗黄链霉菌、玫瑰红链霉菌及游动放线菌葡萄糖异构酶(EC5.3.1.5)的生产条件、诱变育种和固定化作了很多研究,用戊二醛交联游动放线菌细胞制成的固定化酶已批量生产。嗜热菌有许多优点,如高温培养周期短、杂菌污染少、节省冷却水。

摘要：目的:制备杜氏盐藻氯酸盐抗性突变株库并从中筛选出硝酸盐还原酶(NR)缺陷型突变株,测定其NR cDNA全长序列,分析其突变位点。方法:①用乙基亚硝基脲(ENU)对杜氏盐藻进行诱变,得到突变株库。然后用氯酸盐抗性筛选方法获得氯酸盐抗性藻株,经复筛和不同氮源生长试验,获得了氯酸盐抗性突变株库。再用96孔板法进行单藻培养,获得氯酸盐抗性突变株单藻群。用磺胺比色法测定各个单藻群的NR活性,挑选出NR活性完全丧失的突变株。然后用氯酸盐抗性实验和不同氮源生长实验验证其NR突变的稳定性。②根据已知的盐藻NR全长序列,设计3对PCR引物,提取突变株盐藻细胞mRNA,反转录成cDNA,分3段扩增其NRcDNA的全长序列,产物与T载体连接后转化至大肠杆菌JM109中,经筛选后测序,测序结果与野生型盐藻NRcDNA序列比较,分析其突变位点。结果:序列分析表明,3株突变株共有11处相同的突变,其中的3处点突变引起了氨基酸性质的改变。它们均在近3′端有一段相同的移码突变,造成19个氨基酸的完全改变。此外,2株还分别由于在1235和1639的位点突变而产生了一个终止密码子。结论:筛选出了3株杜氏盐藻NR完全缺陷型突变株。

摘要：本文讨论了人类免疫缺陷症病毒(HIV)产生突变株并逃避免疫应答的机理.提出了顾及病毒变异性的候选疫苗的设计和几种方法.理想的突变株含有包括B和T表位的多个突变,复合突变的可能性随感染细胞数增多而增加.HIV的免疫抑制活性与逃逸突变株数量的增加可能具有协同作用.本文提出用与载体蛋白结合的HIV中和区变异株的混合物为免疫原以利用预存的辅助性T(Th)细胞记忆,从而使免疫系统能预期、而不是再现HIV突变,更在于产生广谱抗体以抵抗大多数现存的或潜在的变异株.

摘要：在调查阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)营养要求的基础上,设计了适合该菌生长的合成培养基,在合成培养基上诱变筛选得到了数株抗嘌呤拮抗物8-AG的突变株。选择其中三株U_(95-1)、U_(95-2)和U_(95-3)进行传代和摇瓶发酵试验,U_(95-3)的核黄素发酵单位低于出发菌,未经传代的U_(95-1)、U_(95-2)比出发菌株的发酵水平分别提高15.5％和9.8％,经5～10代传接,其产核黄素的遗传性状稳定。该研究表明,从代谢控制角度通过减轻核黄素合成途径中重要调节酶的反馈抑制对提高E. ashbyii的核黄素产量和稳定性是可行的,为该菌的菌种改良提供了一条遗传育种途径。

摘要：目的利用Red同源重组系统敲除肠出血型大肠埃希菌的esp F基因及其核苷酸片段;建立以p BAD 33质粒为载体的esp F基因回补实验平台。方法设计1对同源臂引物扩增卡那霉素抗性打靶片段,将抗性打靶片段电转入含有PKD46质粒的EDL933w,在PKD 46介导的重组系统帮助下,打靶片段和菌体esp F基因发生同源重组,PCR和测序验证;PCR扩增esp F及其核苷酸片段的整个ORF区序列,将其克隆入p BAD33质粒,分别将重组质粒转入相应的缺失株,以构建出相应的回补突变株。采用RT-PCR的方法验证在相应的回补突变株中esp F及其核苷酸片段是否转录。结果构建了esp F基因及其核苷酸片段缺失的EHEC O157:H7 EDL933w突变菌株和相应的回补株,且esp F基因及其核苷酸片段在回补株中均发生转录。结论本研究运用Red重组系统构建了肠出血型大肠埃希菌O157:H7 esp F基因缺失株,并建立以p BAD33质粒为载体的EHEC O157:H7基因回补方法,为进一步研究肠出血型大肠埃希菌中esp F基因的调控机制奠定了基础。

摘要：根据华癸中慢生根瘤菌7653R全局转录组分析结果,获得在共生固氮阶段显著上调表达的基因MCHK_8182;设计重叠延伸PCR引物,构建MCHK_8182双交换突变重组质粒载体;通过三亲本杂交,将突变载体导入7653R;在蔗糖压力培养下进行筛选,最终获得MCHK_8182双交换突变株。PCR及测序验证双交换突变株构建成功。植物盆栽试验结果显示,与7653R野生型接种的植株相比,MCHK_8182突变菌株接种的植株根瘤数减少,但固氮酶活未见明显差异。

摘要：目的　探讨HBV核心启动子nt176 2～ 176 4突变与肝病严重性的关系以及对e系统状态和病毒复制的影响。方法　采用半套式突变特异PCR (msPCR)技术检测 97例各型肝病患者血清nt 176 2～ 176 4突变株的感染状况。结果　经测序和扩增产物电泳证实 ,采用我们设计的引物建立的msPCR方法检测HBV感染者血清nt 176 2～ 176 4突变株和野生株的特异性强 ,方法可靠。急性肝炎、慢性肝炎轻度、中度、重度及肝硬化患者nt176 2～ 176 4突变株感染比例分别为 2 5、7 4 3、10 31、1 3和7 15 ,肝硬化患者nt 176 2～ 176 4突变株感染率显著高于慢性肝炎轻度患者 (P <0 .0 2 5 )。在 92例慢性HBV感染者中 ,野生株 (2 5 92 )、突变株 (42 92 )和混合感染者 (2 5 92 )血清HBeAg阳性率分别为80.0 %、5 6 0 %和 6 4.3% ;HBVDNA含量分别为 (4.4± 8.5 )× 10.8、(1.1± 1.36 )× 10.9和 (1.4± 1.8)× 10.9拷贝 ml;ALT异常率分别为 4 4.0 %、5 2.0 %和 4 2.6 % ;ALT水平分别为 (5 8.6± 79.0 )、(5 7.1± 75.2 )和(6 2 .6± 90.3)IU L ,以上各组之间比较差异无统计学意义。结论　msPCR技术检测nt176 2～ 176 4突变灵敏特异。nt176 2～ 176 4突变与肝病严重性有密切关系 ,这种相关性与突变株的e系统状态、高病毒复制无任何关?

摘要：从天然抗体库中筛选得到的抗体通常亲和力较低,在微摩尔水平;同时,经过多次免疫获得的天然抗体也存在100 pmol/L的亲和力极限。然而,以抗体亲和力体内成熟为理论基础的亲和力体外成熟技术,可以模拟体细胞高频突变和克隆选择过程。该技术可以解决库来源抗体亲和力不高、实际应用难的问题,也可以帮助天然抗体突破其亲和力极限。抗体基因体外突变技术可以模拟自体高频突变过程,是抗体亲和力体外成熟的重要手段,常见的抗体基因体外突变技术可以分为易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、DNA改组、突变株、定点突变和链替换等方法。易错PCR可以在抗体基因全长或部分区域随机引入突变,但随着突变率的增加,阳性克隆数量呈指数性递减。DNA改组包括抗体片段随机化切割和重组步骤,可以加快抗体的体外进化速度。突变株法易于构建超大容量的抗体库,但有害突变和突变率难以控制。定点突变的区域通常选择与抗原直接接触的互补决定区(complementary determination region,CDR)或自体突变热点进行操作。链替换通常保留母体抗体的一条重链或轻链,而对另一条链进行随机化组合。这些基因突变方法在提高抗体亲和力中获得了不同程度的应用,但也存在效率不高,且方法选择较为盲目等问题。可是,采用抗体X射线晶体衍射和计算机模拟等方法,却可以帮助预测抗体结合部位,为突变位点的理性设计和方法选择提供有效信息,因而成为亲和力体外成熟技术未来发展的趋势之一。