摘要：目的：研究瘦素诱导下端粒酶反转录酶与乳腺癌发生机制的关系。方法选取以乳腺癌MCF-7细胞系为处理对象，通过细胞培养传代得到足量乳腺癌细胞，以1×10^5个／孔种植于96孔板，数字表随机分为观察组（n＝48）和对照组（n＝48）。观察组以10 nmol／L瘦素处理细胞，对照组饥饿后不做任何处理。分别利用半定量RT-PCR和Western blot方法分析瘦素刺激前后两组端粒酶反转录酶mRNA、端粒酶反转录酶单表的表达情况的改变。设计针对信号转导和转录激活因子3（ STAT3）的特异性实验，下调乳腺癌细胞中STAT3的表达水平，用半定量RT-PCR法检测下调STAT3表达水平前后及瘦素刺激前后端粒酶反转录酶表达水平的变化。结果观察组经瘦素处理后，端粒酶反转录酶mRNA、端粒酶反转录酶蛋白都出现了倍数增加，其中端粒酶反转录酶mRNA比对照组增加了（3．2±0．5）倍（t＝2．675，P＝0．009），端粒酶反转录酶蛋白比对照组增加了（2．5±0．3）倍（t＝2．352，P＝0．032）。在人乳腺癌细胞MCF-7 STAT3表达水平下调的情况下，端粒酶反转录酶表达水平也随之下调（t＝2．019，P＝0．045），而且经瘦素处理后，瘦素对端粒酶反转录酶表达水平上调的现象也没有出现（t＝2．348，P＝0．037）。结论瘦素通过STAT3信号途径上调端粒酶反转录酶的表达参与乳腺癌的发生和发展。

摘要：目的探讨端粒酶活性在兔后囊膜混浊晶状体上皮细胞中的表达及意义。方法对新西兰大白兔11只（22只眼）行超声乳化晶状体吸除术法，术后3个月所有实验动物的晶状体后囊膜均已混浊。20只眼分别取赤道部囊膜、混浊后囊膜组织，采用端粒重复序列扩增-聚丙烯酰胺凝胶电泳法定性和端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附定量法检测其晶状体上皮细胞端粒酶活性。两者端粒酶活性比较采用成组设计t检验。结果以HepG2细胞作为端粒酶检测阳性对照，兔晶状体赤道部囊膜组织、后囊膜均可检测到端粒酶活性，表现为自50bp开始多个模糊梯度条带状电泳图谱，其吸光度A450枷值分别为0．85±0．23、0．67±0．19，两者比较差异有统计学意义（t=2．526，0．021；P〈0.05）。结论在兔后囊膜混浊晶状体上皮细胞中存在端粒酶活性，其活性较晶状体赤道部囊膜上皮细胞低。

摘要：目的利用RNA干扰稳定筛选-抑制技术,抑制人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达,探讨靶向hTERT基因RNAi与抑制肝癌细胞增殖的时-效关系.方法设计靶向hTERT基因的小干扰RNA,构建重组表达质粒pGenesil-shR-NA-hTERT并导入肝癌SMMC-7721细胞株,经G418筛选,建立稳定表达siRNA-hTERT的细胞株.采用real-time RT-PCR、MTT和PCR-TRAP法同时检测pGenesil-shRNA-hTERT稳定抑制组和未处理SMMC-7721细胞组hTERT基因表达、端粒酶活性及细胞增殖变化.结果在稳定表达pGenesil-shRNA-hTERT的SMMC-7721细胞株中,RNAi效力持续、稳定存在,hTERTmRNA表达、端粒酶活性明显降低,瘤细胞增殖被抑制.结论RNA干扰能持续、稳定地抑制靶基因hTERT mR-NA表达及肿瘤细胞增殖,是有潜力的基因治疗肿瘤新方法.

摘要：目的:构建针对h TERT基因的人工mi RNA表达框架,并验证其对Hep G2细胞端粒酶活性的抑制作用。方法:应用融合PCR技术针对不同位点设计并构建3个靶向h TERT的人工mi RNA表达框架,对各表达框架鉴定后,将其单独或两种共转染Hep G2细胞,采用TRAP-银染法和TRAP-二聚体蝎形探针荧光定量PCR法检测细胞端粒酶活性。结果:3个针对h TERT基因的人工mi RNA表达框架均成功构建,单独或共转染Hep G2细胞后,Hep G2细胞的端粒酶活性均被不同程度的抑制,且两种表达框架共转染的抑制作用明显大于单独转染,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:靶向h TERT基因的人工mi RNA表达框架能有效而特异抑制Hep G2细胞端粒酶活性,多位点联合抑制是一种有效的实验方案。