摘要：人工合成了朝鲜蝮蛇(Agkistrodoncaliginosus)类凝血酶Calobin的编码序列。在设计引物时选择大肠杆菌和酵母菌的偏爱密码子,通过相互搭桥的方式,将全长为789bp的编码序列分成14个片段,每个片段长度为78个碱基左右,采用“核心模板法”并加以改进,通过4次PCR延伸反应,得到了全长基因。经扩增后回收目的片段,双酶切后连接到克隆载体,将得到的转化子酶切鉴定后,任意选择6个克隆进行双向测序,得到了全序列正确的3个克隆。本工作为类凝血酶在大肠杆菌和酵母系统中的高效表达奠定了基础,也为长度为700～900bp片段的合成提供了帮助。

摘要：根据同源性设计引物,通过RT-PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因,并由此推测出其相应的氨基酸序列.将该基因克隆到表达载体pPIC9K中,经电激转化后整合至毕氏酵母细胞中获得表达.该表达产物经两步柱层析后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,获得单一条带,并表现较强的生色底物活性.

摘要：目的 :分离和纯化长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段 ,为克隆全长类凝血酶cDNA奠定基础。方法 :应用RT -PCR方法获得长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段 ,克隆于pGEM T载体上 ,进行测序和NCBI数据库同源性分析。结果 :获得长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段长度为 2 89bp ,该片段与其他种蝮蛇类凝血酶DNA片段有同源性。结论 :本实验克隆了长白山白眉蝮蛇类凝血酶基因片段。根据不同种属蛋白质家族成员的保守性和同源性设计引物可以有效地克隆家族成员的DNA片段。

摘要：将编码大连蛇岛蝮蛇类凝血酶 (Gloshedobin)的基因克隆于表达载体pET 32a( + )中 ,以融合蛋白形式在大肠杆菌中获得表达。在 2 5℃下经 1mmol LIPTG诱导 6h ,SDS PAGE和蛋白质印迹分析表明 ,部分融合蛋白以可溶形式存在于大肠杆菌的细胞质中。针对金属螯合亲和层析分离某些含His 标签重组蛋白质时专一性不高 ,并且存在配基泄漏的缺陷 ,设计合成了以抗重组类凝血酶的鸡卵黄免疫球蛋白为配基的免疫亲和层析柱。通过疏水色谱OctylSepharoseFF ,IgY免疫亲和层析以及强阴离子交换色谱SourceQ等三步柱色谱分离纯化获得比活力为 45 4 7U mg的重组蛇毒类凝血酶 ,活力回收率为 34 8%。蛋白质印迹分析和纤维蛋白原凝结活性分析表明 。

摘要：目的为了获得长白山白眉蝮蛇乌苏里亚种类凝血酶基因。方法根据Gene Bank白眉类凝血酶cDNA 5'和3'保守序列设计了引物,通过RT-PCR从白眉蝮蛇乌苏里亚种毒腺Total RNA中扩增得到1条长714bp的特异cDNA片段,将该cDNA片段重组到Simple Tvector,转化进*** JM 109competent cell,阳性克隆委托生物公司测序,利用生物信息学方法对测序结果进行分析。结果该特异性片段与蛇毒类凝血酶同源性为95%,它为一个开发阅读框架,其编码的蛋白质序列与其他蛇毒类凝血酶序列同源性为94%,与其他蛇毒类凝血亲缘关系非常近。结论本实验获得了一种新型白眉蝮蛇乌苏里亚种类凝血酶基因。