摘要：类枯草杆菌蛋白酶(subtilisin-like proteases, SBT)是一类与植物发育、防御反应相关的多功能丝氨酸蛋白酶。本文以百子莲(Agapanthus praecox ***)胚性愈伤组织为供试材料,利用RACE技术克隆出全长的ApSBT基因为2 316 bp,编码771个氨基酸。预测ApSBT蛋白为82.69 kDa,是从属于Peptidases S8家族的亲水蛋白。同源序列对比分析可知,百子莲ApSBT蛋白与棕榈科和禾本科等单子叶植物的SBT遗传进化关系较近。百子莲丛生芽经过4种单一的非生物(渗透、盐、氧化及内质网)胁迫处理12和24 h后,实时荧光定量PCR检测发现ApSBT基因的相对表达量对4种胁迫均有响应,其中胁迫12 h时的表达量最高,分别为对照的12.00、4.25、3.20和2.50倍。通过单一胁迫实验发现,在10 mmol·L^(-1) H2O2诱导下的转基因拟南芥幼苗死亡率高达78.57%,说明ApSBT主要响应了氧化胁迫。

摘要：在水稻叶蝉僵虫中分离出一株球孢白僵菌(Beauveria bassiana),根据GenBank上球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶基因序列同源性设计引物,采用RT-PCR法得到一个球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因的cD-NA片段.利用表达载体pET28 a(+),在大肠杆菌中表达了CDEP2蛋白.

摘要：构建了球孢白僵菌不同诱导时间的混合cDNA文库。根据丝氨酸类蛋白酶的保守区域设计引物 ,以构建cDNA文库同样的mRNA为模板 ,采用RT PCR法得到长度为 5 94bp的片段BbP。序列测定表明BbP是球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶Pr1的一部分。以BbP为探针 ,从上述cDNA文库筛选得到长度为 15 5 7bp的克隆CDEP 1。CDEP 1含有一个 1134bp的开放阅读框 (ORF) ,编码 377个氨基酸、分子量为 386 16、PI=8.30 2的蛋白酶前体。CEDP 1的核苷酸序列与蛋白酶K、金龟子绿僵菌Pr1、球孢白僵菌Pr1的同源性分别为 :5 7.9%、5 4 .7%、83.3%。根据cDNA序列扩增到CDEP 1的基因组序列 ,分析表明其中含有 3个内含子。Southern杂交表明CDEP 1在球孢白僵菌是单拷贝。