摘要：背景:单一的支架材料往往具有一些自身难以克服的缺点,拟构建一种具有较多优越性的复合支架,希望能够解决种子细胞与支架材料黏附的问题。目的:应用纤维蛋白胶、异种无机骨构建骨组织工程复合支架材料,探讨兔骨髓基质细胞在这种复合支架材料中立体培养情况。设计、时间及地点:观察实验,于2007-11/2008-03在吉林大学中日联谊医院骨科研究室、天津理工大学机械工程学院完成。材料:纤维蛋白原与凝血酶按比例制备纤维蛋白胶,牛松质骨经去脂去蛋白等无机化处理后与纤维蛋白胶复合,制成复合骨支架材料。方法:将兔骨髓基质细胞作为种子细胞进行传代培养,收集后在纤维蛋白胶、异种无机骨构成的复合支架中进行立体培养。主要观察指标:采用相差显微镜、透射电子显微镜等手段观察骨髓基质细胞在纤维蛋白胶中的生长状况。结果:相差显微镜下观察见骨髓基质细胞均匀分布于复合支架中,具有良好活性,细胞不断增殖、分化,培养4周骨髓基质细胞形成密集立体网状。透射电子显微镜下见复合支架中培养4周的基质细胞内细胞器结构完整,局部有细突起,胞质内可见线粒体,核糖体,粗面内质网。结论:在纤维蛋白胶与异种无机骨构建的复合支架中骨髓基质细胞具有良好活性,可迅速扩增生长。

摘要：背景:采用生理盐水溶解重组人骨形态发生蛋白2/聚乳酸-聚乙醇酸共聚物微球时,活性成分易于吸收、流失,不能在局部维持较高浓度;而采用静脉血或骨髓血溶解时凝固时间难以掌握,往往在体外已凝血,失去可注射性,操作不便,因此还需一种能控制凝固时间的缓释载体。目的:制备携载重组人骨形态发生蛋白2的聚乳酸与聚乙醇酸缓释微球并将其与纤维蛋白胶复合,构建具有自固化能力的可注射性骨形态发生蛋白缓释体系。设计、时间及地点:对比观察实验,于2005-01/2008-04在解放军总医院骨科研究所完成。材料:聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(聚乳酸/聚乙醇酸75/25,MW=3000,黏度0.025L/g)由山东省医疗器械研究所提供,重组人骨形态发生蛋白2由解放军军事医学科学院提供,纤维蛋白胶由杭州普济公司提供。方法:复乳-溶剂挥发法制备重组人骨形态发生蛋白2/聚乳酸-聚乙醇酸共聚物载药微球,然后将微球与纤维蛋白胶复合制备出重组人骨形态发生蛋白2/聚乳酸-聚乙醇酸共聚物/纤维蛋白胶复合材料。主要观察指标:复合材料凝固时间、体外释放性质、能谱分析及体外降解液pH值。结果:①与纤维蛋白胶相比,复合材料的固化时间少量增加。②复合材料的释放存在突释,2d骨形态发生蛋白释放量达到16.76%,42d释放量达到76.75%。③能谱分析显示微球混入纤维蛋白胶后优化了释放过程,延长了其释放时间。④复合材料的pH值变化介于微球与纤维蛋白胶之间。结论:重组人骨形态发生蛋白2/聚乳酸-聚乙醇酸共聚物/纤维蛋白胶复合材料具有良好的缓释效果并具有可注射性,既可以降低局部的酸环境,又可以在局部维持较高浓度,是具有良好应用前景的骨修复材料。

摘要：目的观察纤维蛋白胶玻璃体内注射对兔视网膜的毒性。设计实验性研究。研究对象28只青紫蓝兔。方法将28只青紫蓝兔随机分为4组,每组7只。4组动物中的3组右眼玻璃体内分别注入剂量为0.1 ml、0.2 ml、0.4 ml的纤维蛋白胶,空白对照组右眼玻璃体内注入0.2 ml生理盐水。注射后1天、7天、14天及28天行裂隙灯、间接检眼镜、视网膜电流图(ERG)检查,观察暗适应最大反应b波波幅,最后一次检查后取眼球行病理切片光镜检查,观察视网膜各层细胞形态、排列。主要指标实验动物眼术后KP、闪光,视网膜皱褶的发生情况,ERG暗适应最大反应b波波幅,视网膜病理切片光镜下各层细胞的形态、排列情况。结果实验组眼术后未观察到明显的KP、闪光等炎性反应证据,未观察到视网膜皱褶形成、玻璃体视网膜牵拉等增生性玻璃体视网膜病变(PVR)发生的证据,ERG b波幅较对照组变化无显著性差异,病理切片光镜下视网膜各层细胞形态、排列未见异常。结论玻璃体内注射≤0.4 ml的纤维蛋白胶是安全的。

摘要：背景:Bio-oss的颗粒状结构通常应用于洞形缺损的充填性移植,对于三壁以上的缺损修复难以成形。目的:评价Bio-oss以纤维蛋白胶复合骨形态发生蛋白2作为赋形材料后的成骨性能。方法:拔除9条杂种犬双侧下颌第2,4前臼齿及第2臼齿,造成1cm×1cm的骨缺损区,将Bio-oss+纤维蛋白胶+骨形态发生蛋白2、Bio-oss+纤维蛋白胶及Bio-oss材料分别植入第2,4前臼齿及第2臼齿骨缺损区。结果与结论:各组软组织均一期愈合。Bio-oss复合纤维蛋白胶后,骨粉结合紧密,不易剥离。术后4,8,12周时Bio-oss+纤维蛋白胶+骨形态发生蛋白2组新生骨百分率均高于其他两组(P<0.05)。表明纤维蛋白胶的加入可以解决Bio-oss成形困难的问题,骨形态发生蛋白2的加入可促进成骨效果。

摘要：背景:以往对间充质干细胞分化的报道多为体外培养,甚少涉及宿主体内间充质干细胞的分化及辅助因子对其分化的影响。目的:探讨人羊膜间充质干细胞移植对脑损伤大鼠行为学和空间学习记忆能力的影响,以及神经生长因子、纤维蛋白胶在人羊膜间充质干细胞移植中的作用。设计、时间及地点:细胞学体内对照观察,于2006-07/2007-01在郑州大学医学院完成。材料:正常足月剖腹产胎儿的胎盘由郑州大学第一附属医院妇产科提供。Wistar大鼠90只,随机分为5组:假手术组、模型对照组、细胞移植组、细胞+神经生长因子组、细胞+纤维蛋白胶组,18只/组。方法:无菌条件下钝性分离胎盘脐带面的羊膜,经胰酶消化制成单细胞悬液,贴壁法纯化扩增,传至第3代的人羊膜间充质干细胞备用。假手术组只开颅钻孔不进行硬膜外撞击,其余4组大鼠均采用自由落体硬膜外撞击法建立脑损伤模型。造模1d后,模型对照组在损伤区分点注射生理盐水40μL;细胞移植组注射含1×107个人羊膜间充质干细胞的等量生理盐水;细胞+神经生长因子组在细胞移植组基础上于造模后连续2周每日腹腔注射0.5μg神经生长因子;细胞+纤维蛋白胶组注射人羊膜间充质干细胞与纤维蛋白胶混合液40μL;假手术组不行细胞移植。主要观察指标:行为学评分,Morris水迷宫检测潜伏期,脑组织切片免疫组化染色检测神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的表达。结果:移植后7d,与模型对照组比较,细胞移植组、细胞+神经生长因子组、细胞+纤维蛋白胶组行为学评分均明显升高,但细胞移植组升高幅度明显低于后2组(F=155.322,P<0.05)。移植后3周,与模型对照组比较,细胞移植组、细胞+神经生长因子组、细胞+纤维蛋白胶组潜伏期均明显缩短,但细胞移植组缩短幅度明显小于后2组(F=22.678,P<0.05)。移植后4周,人羊膜间充质干细胞能够在大鼠损伤脑组织内分化,与神经生长因子、纤维蛋白胶混合移植可提高神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的阳性表达率(F=705.406,F=424.884,P<0.05)。结论:人羊膜间充质干细胞可改善脑损伤大鼠行为能力及空间学习记忆能力,分化后能表达神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白,神经生长因子与纤维蛋白胶均可增强细胞移植治疗效果。

摘要：背景:血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)可促进梗死心肌血管再生,但经系统性静脉灌注来传递VEGF是无效的,反复直接心肌注射会损伤正常心肌结构。目的:验证通过可降解材料纤维蛋白胶将VEGF移植到心肌梗死及缺血区域促进血管再生的可行性,并观察大鼠心功能的变化。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-01/2008-04在新疆医科大学第一附属医院冠心病VIP实验室完成。材料:树脂色谱法纯化获得重组蛋白VEGF121,与纤维蛋白胶结合得到VEGF纤维蛋白胶。9周龄雄性SD大鼠28只,其中13只节扎冠状动脉左前降支制备心肌梗死模型为心肌梗死组,其余15只仅打开心包,不节扎左前降支者为为非心肌梗死组。方法:心肌梗死组梗死即刻将空白或VEGF纤维蛋白胶移植到梗死区域,附着在梗死和缺血区;非心肌梗死组将空白或VEGF纤维蛋白胶附在相应的左室前壁,另有3只不处理做为对照。主要观察指标:移植4周后经心脏超声行心功能检测,然后麻醉处死大鼠,取出心脏行免疫组化及血管测量分析。结果:移植VEGF胶后,非心肌梗死和心肌梗死组大鼠的毛细血管密度显著高于空白胶组(P<0.001);心肌梗死组梗死附近缺血区毛细血管密度显著高于间隔区(P<0.01)。移植VEGF胶后,大鼠心功能有改善的趋势,但差异无显著性意义(P=0.2482),结论:通过可降解材料移植VEGF可使大鼠非心肌梗死区和心肌梗死心肌区的毛细血管明显增生;将纤维蛋白胶作为传递血管再生因子到心肌的介质是可行的。

摘要：背景:骨组织工程的支架材料主要作用为模拟细胞体内生长的空间环境,为细胞形成骨组织提供三维支架载体,但目前尚缺乏理想载体材料。目的:应用纤维蛋白胶作为细胞支架进行兔骨髓基质细胞立体培养,探讨其作为骨组织工程支架材料的可行性。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-09/2008-01在吉林大学中日联谊医院及天津科技大学机械工程学院完成。材料:将纤维蛋白原和凝血酶按不同比例混合,制备不同强度的纤维蛋白胶。1月龄雄性新西兰大耳白兔1只,体质量0.25kg。方法:以兔骨髓基质细胞作为种子细胞在CO2孵箱中进行传代培养后,收集扩增的骨髓基质细胞与支架材料纤维蛋白胶复合后再进行培养4周。主要观察指标:采用相差显微镜观察纤维蛋白胶中培养的骨髓基质细胞的生长状况,以苏木精-伊红染色观察不同时期纤维蛋白胶中骨髓基质细胞的活性,以电子显微镜观察培养4周后骨髓基质细胞超微结构变化。结果:骨髓基质细胞在不同强度的纤维蛋白胶中的生长状态不同,在低强度纤维蛋白胶中活性好,扩增迅速,而在高强度纤维蛋白胶中细胞生长缓慢,数量少或逐渐死亡。电镜观察纤维蛋白原和凝血酶比例为4∶1的纤维蛋白胶培养4周的基质细胞,各细胞器清晰可见,细胞具有良好活性。结论:骨髓基质细胞在低强度形成固体时的纤维蛋白胶中能够良好扩增生长,以纤维蛋白原和凝血酶比例为4∶1的效果最佳。

摘要：背景:大量实验证明骨形态发生蛋白2不但对骨组织来源的细胞有刺激分化作用,还可诱导非骨组织来源的细胞株分化为成骨细胞。但是,许多学者在研究中发现,将骨形态发生蛋白直接用于骨的修复效果不理想。目的:将重组人骨形态发生蛋白2/纤维蛋白胶复合物植入髓芯减压后的兔激素性股骨头坏死区,观察股骨头坏死区域的新骨形成情况.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-01/2007-12在武警医学院完成。材料:在纤维蛋白胶的抑肽酶溶液内加入重组人骨形态发生蛋白2形成胶冻状的生物材料,最终聚合材料中重组人骨形态发生蛋白2的质量浓度1mg/L。方法:制造激素型股骨头缺血性坏死的动物模型,将实验动物分为3组全部进行股骨头钻孔减压,在重组人骨形态发生蛋白2/纤维蛋白组和单纯重组人骨形态发生蛋白2组孔道内植入相应材料,髄芯减压组钻孔后不植入材料。主要观察指标:MRI检查股骨头软骨及软骨下骨质信号改变,光镜下观察新骨生长情况,原子吸收分光光度仪测定钙含量。结果:MRI观察显示,植入重组人骨形态发生蛋白2/纤维蛋白胶8周后原骨缺损孔道消失,被新生骨所取代。单纯植入重组人骨形态发生蛋白2可见少量新生骨,髄芯减压组仍为纤维组织。组织形态学观察可见重组人骨形态发生蛋白2/纤维蛋白胶组术后8周原骨缺损区基本消失,有大量相对较成熟的骨小梁及板状骨并存。单纯重组人骨形态发生蛋白2组骨缺损区明显缩小,周边亦有少量骨小梁存在,新生毛细血管少见,缺损区有大量纤维组织填充。髄芯减压组术后8周缺损区缩小,周边有少量新骨形成,中心部仍为纤维组织。重组人骨形态发生蛋白2/纤维蛋白胶组钙含量显著高于另外2组(P<0.01)。结论:骨形态发生蛋白在缺血坏死的股骨头内可诱导新骨形成,与纤维蛋白胶复合后,骨形态发生蛋白诱导新骨形成的质量和数量均明显增强。

摘要：目的探索能够在短期内有效提高骨质疏松椎体骨密度的局部治疗方法。方法采用卵巢切除法(OVX)对6只成年雌性绵羊去势,低钙饲养1年后建立骨质疏松模型。采用拉丁方设计方案,通过经椎弓根注射途径,分别在每只动物的L4、L5、L6注射3种药物:实验组A20mg bBMP/FS,对照组B20mg bBMP,对照组C单纯FS。术后3个月时采用双能X线吸收骨密度测量仪和Micro-CT进行测量分析。结果拉丁方分析BMD显示:实验组BMD(1.334g/cm2)明显高于对照组BMD(1.139g/cm2和1.163g/cm2)。Micro-CT分析表明:实验组骨小梁的密度、连接率均显著高于对照组。结论bBMP复合纤维蛋白胶可以促进骨小梁的改建,改善骨小梁的三维结构,增加椎体的骨质密度,因此可以作为局部治疗脊柱骨质疏松的新型方法之一。

摘要：目的研究猪源纤维蛋白黏合剂封闭视网膜裂孔替代眼内充填物的可行性。设计实验研究。研究对象45只青紫兰兔(45眼)。方法将45只青紫兰兔的右眼行玻璃体切割、视网膜造孔和视网膜下注液,建立孔源性视网膜脱离模型。模型建立1周后,将符合条件的42只兔眼随机分为3组,每组14眼,经玻璃体切割视网膜复位,裂孔周围行激光光凝裂孔。蛋白胶组用纤维蛋白胶(广州倍绣生物技术有限公司)封闭视网膜裂孔后,玻璃体腔应用灌注液充填;气体组玻璃体腔应用30%SF6气体充填;单纯激光光凝裂孔组玻璃体腔单纯灌注液充填。术后1、4周分别行间接检眼镜、眼底照相、眼B超、OCT及组织病理学检查。主要指标视网膜裂孔封闭及视网膜复位情况。结果术后4周,蛋白胶组、气体组、单纯激光光凝裂孔组视网膜复位分别为12/14眼(85.7%)、13/14眼(92.9%)、5/14眼(35.7%),前两者复位率均显著高于单纯激光光凝裂孔组(P=0.009,0.036)。结论在兔眼的实验研究结果显示,国产猪源纤维蛋白黏合剂能够替代眼内充填物起到临时封闭视网膜裂孔的作用。