摘要：目的研究纤维连接蛋白(fibronectin,FN)对人结肠癌细胞侵袭力的影响,并探讨其中的信号传导机制。方法以递增浓度的 FN 刺激结肠癌细胞株 Colo320,以免疫沉淀和蛋白质印迹法检测结肠癌细胞内黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)第397位酪氨酸(tyr-397)磷酸化的状况,以改良Boyden 小室法检测相应的细胞侵袭力变化。设计反义寡核苷酸阻断 FAK 蛋白质表达,再次观察接受FN 刺激后,结肠癌细胞内 FAK tyr-397磷酸化状况及细胞侵袭力的改变。结果 FN 能够促进 Colo320FAK tyr-397磷酸化,在一定范围内具有剂量依赖性。FN 浓度达10nmol/L 时,此作用最显著,继续增加 FN 浓度,FAK tyr-397磷酸化不再呈现继续增强趋势,当浓度达到100 nmol/L 时,磷酸化程度反而有所下降;FN 可以增强细胞侵袭力,同样在一定范围内具有剂量依赖性;反义寡核苷酸干预后,结肠癌细胞内 FAK tyr-397磷酸化及细胞侵袭力均有显著降低(P<0.01)。结论 FN 可以有效增强结肠癌细胞的侵袭力,其作用是通过 FN-FAK 信号通路实现的,FAK 的活性形式是其酪氨酸位点的磷酸化,阻断 FAK 的表达可以减弱 FN 促进细胞侵袭的作用。

摘要：目的研究纤维连接蛋白激活paxillin后对人胃癌细胞侵袭力的影响,探讨抑制paxillin影响胃癌细胞侵袭力的机制。方法以递增浓度的纤维连接蛋白刺激人胃癌细胞株AGS,以免疫沉淀和蛋白质印迹法检测胃癌细胞内paxillin第118位酪氨酸(tyr-118)磷酸化的变化,同时以改良Boy-den小室法检测细胞侵袭力变化。设计合成paxillin siRNA并进行效果比较,观察siRNA抑制纤维连接蛋白促胃癌细胞内paxillin tyr-118磷酸化及细胞侵袭力的改变。结果纤维连接蛋白能促进AGS细胞paxillin tyr-118磷酸化的增强和胃癌细胞侵袭力(P<0.05),并在一定范围内具有剂量依赖性。siRNA干预后,胃癌细胞内paxillin tyr-118磷酸化及细胞侵袭力均有显著降低(P<0.05)。结论纤维连接蛋白可有效增强胃癌细胞的侵袭力,paxillin tyr-118磷酸化在此过程中起关键作用,使用paxillin siRNA可以抑制纤维连接蛋白促人胃癌细胞侵袭的作用。

摘要：背景:如何使移植入脑的或自体激活的神经干细胞在迁移途中能大量存活并准确到达病灶部位,以修复和替代受损组织,是应用神经干细胞治疗神经系统损伤的关键问题。目的:观察转化生长因子β1对以纤维连接蛋白为生长基质的神经干细胞定向迁移的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-03/11在佳木斯大学神经科学研究所完成。材料:选取同一基因背景Wistar大鼠72只,随机数字表法分成3组:模型对照组、单纯神经干细胞移植组、转化生长因子β1与纤维连接蛋白包被的神经干细胞联合移植组(简称联合移植组),每组24只,移植后1,3,7,14d每个时间点6只。方法:各组大鼠均采用ZeaLonga线栓法建立局灶性脑缺血模型。单纯神经干细胞移植组在左侧侧脑室注入5μL已标记Brdu的神经干细胞悬液。联合移植组在左侧感觉运动皮质区注入100μg/L的转化生长因子2μL;左侧侧脑室注入5βL已标记Brdu的纤维连接蛋白包被神经干细胞悬液。各组分别于移植后1,3,7,14d取脑组织制备切片。主要观察指标:Brdu标记的的神经干细胞在宿主脑内的迁移。结果:体外培养的神经干细胞移植到大鼠脑缺血模型后,在侧脑室下区,移植1d时,各实验组均有细胞存活,3d时细胞逐渐增加,到7d时,Brdu阳性细胞从侧脑室大量迁出,侧脑室下区阳性细胞数明显增多达到高峰,联合移植组的阳性细胞数多于其他两组,且迁移趋势明显。在皮质区,神经干细胞移植3d时迁移到皮质区的细胞数量开始增加,7d时达到高峰,各时间点均多于对照组,差异有显著性。并且到达皮质区的神经干细胞最终能分化为神经元。结论:转化生长因子β1可以促进以纤维连接蛋白作为生长基质的神经干细胞定向迁移。转化生长因子β1与纤维连接蛋白在诱导神经干细胞迁移方面可能有协同效应。

摘要：背景:肠壁纤维化是克罗恩病的常见表现。转化生长因子β1是炎症性肠病中控制胶原合成和介导肠纤维化复杂调节机制中的重要生长因子,结缔组织生长因子是转化生长因子β特异性下游效应分子。目的:实验拟观察隔药灸与电针对克罗恩病大鼠结肠转化生长因子β1、结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/12在上海中医药大学实验动物中心和国家中医药管理局针灸免疫三级实验室、临床免疫三级实验室完成。材料:健康雄性SD大鼠60只,48只用于制备大鼠克罗恩病模型;三硝基苯磺酸由Sigma公司提供。方法:60只大鼠随机数字表法分为5组,模型组:不作任何治疗,作与隔药灸组相同的固定。隔药灸组:取天枢(双)、气海穴,每次每穴灸2壮,每日隔药饼灸1次,连续10d。电针组:取天枢(双)、气海穴,采用LD202H型韩氏神经穴位刺激仪电针刺激,频率2/50Hz,20min/次,1次/d,连续10d。药物组:美沙拉嗪灌胃治疗,2次/d,连续10d。正常组:无任何干预措施,作与隔药灸组相同的固定。主要观察指标:苏木精-伊红染色后光镜下观察结肠病理组织学变化;免疫组织化学方法检测结肠转化生长因子β1、结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链反应检测结缔组织生长因子mRNA的表达。结果:纳入SD大鼠60只,每组各取1只用于模型鉴定。模型组4只大鼠死亡,7只进入结果分析;其他4组随机取8只进入结果分析。①苏木精-伊红染色正常组可见正常结肠壁组织,黏膜完好;模型组溃疡形成,黏膜下层可见大量纤维组织增生而明显增宽,肉芽组织增生。隔药灸组、电针组和药物组病理组织学均较模型组改善。②与正常组比较,模型组大鼠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、转化生长因子β1、结缔组织生长因子蛋白表达以及结肠结缔组织生长因子mRNA表达均升高(P0.05);隔药灸组对结缔组织生长因子蛋白的下调作用较电针组更显著(P0.05)。结论:隔药灸和电针治疗能够下调克罗恩病大鼠结肠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、转化生长因子β1、结缔组织生长因子蛋白表达,隔药灸对结缔组织生长因子蛋白的调节作用优于电针。

摘要：重型肝炎是严重威胁人类健康的疾病之一，病死率高达80％左右。目前对于多数重型肝炎患者能获得根治且得以长期生存的唯一治疗方法是早期行肝移植。但肝移植存在供体短缺及价格昂贵等问题．且少数患者靠内科综合治疗也可得以生存。因此，对重型肝炎的预后早期进行准确判断，以指导临床选择治疗方案非常重要。课题组前期已经研究证实血清中维生素D结合蛋白（VitD binding ***）蛋白含量是估计重型肝炎患者预后的可靠指标。为了进一步对重型肝炎的预后做出更准确的判断。故我们设计此研究以探讨纤维连接蛋白（FN）与重型肝炎预后的相关性。

摘要：背景:种子细胞来源不足是组织工程研究领域的难题之一,如何充分有效的利用有限的种子细胞,是一个值得深入研究的课题。目的:拟验证脐静脉内皮细胞低密度种植于脱细胞猪动脉支架实现血管内皮化的可行性。设计、时间及地点:观察性实验,于2006-10/2007-04在潍坊医学院生物化学实验室完成。材料:取新鲜猪颈动脉制备脱血管支架;新鲜脐带由潍坊人民医院产科提供,用于内皮细胞的分离和培养。方法:十二烷基硫酸钠和脱氧胆酸钠联合处理获取脱细胞猪动脉支架。0.1%胶原酶灌注获取脐静脉内皮细胞,光镜和免疫组织化学鉴定。分别将细胞以2×105cm-2低密度和2×106cm-2高密度种植于支架,静态培养11d。主要观察指标:DAPI染色法连续观察内皮细胞在支架上的生长情况。第11天对支架进行苏木精-伊红染色,扫描电镜观察,ELISA检测2×105cm-2低密度和2×106cm-2高密度培养液纤维连接蛋白的表达。结果:脱细胞支架细胞成分完全去除,胞外基质保存完好;细胞呈梭形或多角形,核仁清晰,呈典型的铺路石样;免疫荧光检测可见细胞胞浆内有颗粒状红色阳性信号。采用DAPI法连续动态观察内皮细胞在支架上生长良好,贴壁较好;苏木精-伊红染色显示支架表面形成连续融合单层细胞;扫描电镜可见内皮细胞单层形成,细胞呈多角形,椭圆形。低密度种植的培养液中纤维连接蛋白的表达量较高密度种植的高,分别为(121±7.93)μg/106个细胞和(78.20±3.21)μg/106个细胞,两者相比,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:脐静脉内皮细胞低密度种植于脱细胞猪动脉支架不仅可以实现血管内皮化,而且利于增强内皮细胞和细胞外基质黏附力,提高贴壁细胞的抗应切力。

摘要：背景:内皮细胞基础培养液主要用于培养内皮祖细胞,作者所查用此液培养间充质干细胞的报道较少。目的:对以内皮细胞基础培养液为基础的不同方法培养脐血间充质干细胞的效果比较。设计、时间和单位:对比观察的细胞培养实验,于2005-09/2006-05在上海市新华医院市级重点实验室完成。材料:选取妊娠杂交犬8只,抽取脐血进行干细胞的分离和培养。内皮细胞基础培养液及内皮细胞培养基为美国Clonetics产品。鼠抗CD11a单克隆抗体,鼠抗CD11b单克隆抗体,鼠抗CD29单克隆抗体,鼠抗CD71单克隆抗体均为美国Antibodydiagnostica产品;鼠抗CD34单克隆抗体为美国LabVisionCorporation产品。方法:收集的脐血干细胞分为A,B,C,D4组。A组用内皮细胞基础培养液培养;B组用添加有微血管内皮细胞生长培养液的内皮细胞基础培养液在6孔板上培养。C组用添加有内皮细胞培养基的内皮细胞基础培养液在纤维连接蛋白包被的6孔板上培养。D组用添加有内皮细胞培养基的内皮细胞基础培养液在25cm2细胞培养瓶中培养。主要观察指标:观察各组细胞形态学变化和群体倍增数。应用免疫组化法检测细胞抗原CD11a、CD11b、CD34、CD29及CD71的表达。结果:各组均有成纤维细胞样细胞培养出。A组细胞形态不良,增殖缓慢;B组细胞增殖旺盛;C组细胞克隆不稳定,容易老化;同时出现另一种细胞克隆。D组细胞培养的结果与C组相似。免疫组化法检测抗原显示CD11a(-),CD11b(-),CD34(-),CD29(+)及CD71(+)。结论:在未经处理的6孔板上,用添加有内皮细胞培养基的内皮细胞基础培养液细胞培养液可以培养出生长良好、增殖旺盛的间充质干细胞。应用纤维连接蛋白和25cm2细胞培养瓶培养的效果不佳。

摘要：目的利用CRISPR/Cas 9系统在人卵巢癌细胞系OVCAR3中构建敲除纤维连接蛋白(FN)表达的稳定表达细胞系。方法检测4株卵巢癌细胞系FN表达情况。使用E-CRISP网站设计针对FN基因的向导RNA(sgRNA)序列,将序列连接到lenti-CRISPR-V2质粒后转染高表达FN的OVCAR3细胞。鉴定构建的细胞系FN表达情况。结果在4株细胞系中选择高表达FN的OVCAR3细胞转入测序结果正确的lenti-CRISPR-V2-FN-sgRNA重组质粒,q-PCR和Western blot方法验证结果显示,其成功降低了卵巢癌OVCAR3细胞的FN的表达水平。结论CRISPR/Cas 9系统能建立敲除FN表达的卵巢癌稳定表达细胞系。

摘要：目的:研究TGF-β1及FN在狼疮样小鼠肾组织中的表达及霉酚酸酯(MMF)的干预作用。方法:建立cGVHD狼疮样小鼠模型。按随机设计原则将模型动物分两组即模型组和MMF治疗组,另设正常对照组。检测各组小鼠血肌酐、尿素氮及尿蛋白的变化,用HE染色观察肾组织纤维化程度,以Real-time PCR检测各组小鼠肾组织中TGF-β1及FN的mRNA丰度,并用Western blotting方法检测各组小鼠肾组织中TGF-β1及FN的蛋白表达情况。结果:12周模型组的小鼠肾小球系膜节段、弥漫性增生,且血肌酐、尿素氮及尿蛋白较正常对照组均明显增加,Real-timePCR及Western blotting结果证实模型组小鼠的肾组织中TGF-β1及FN的mRNA和蛋白表达水平与正常组相比水平均明显增加,而MMF治疗组与模型组相比其TGF-β1及FN的mRNA和蛋白表达均降低,且血肌酐、尿素氮及尿蛋白水平也有所降低。结论:TGF-β1可能参与了狼疮肾炎的发病,MMF可能通过抑制肾组织TGF-β1的表达来改善狼疮肾炎的增生病变。

摘要：目的:研究宫颈超声检查联合妊娠早期宫颈分泌物中胎儿纤维连接蛋白(fFN)水平与高龄产妇早产发生的关系。方法:前瞻性选取2019年1月-2020年1月本院收治的100例高龄产妇作为研究对象。随访至分娩,统计产妇的早产发生情况并计算早产发生率。根据早产发生情况,将产妇分为发生组和未发生组。设计基线资料收集表,收集高龄产妇基线资料,测定高龄产妇妊娠早期宫颈分泌物fFN水平;采用宫颈超声检查测量宫颈长度。对比发生组和未发生组的基线资料;分析妊娠早期宫颈分泌物中fFN水平及宫颈长度与高龄产妇发生早产的相关性。结果:100例高龄产妇中发生早产15例,占15.00%。发生组妊娠早期宫颈fFN水平高于未发生组,宫颈长度短于未发生组(P<0.05);绘制受试者工作曲线(ROC),妊娠早期宫颈分泌物中fFN水平、宫颈长度预测高龄产妇早产风险的AUC分别为0.782、0.795,联合检测效能为0.856。结论:高龄产妇发生早产与妊娠早期宫颈fFN水平及宫颈长度与有关,可通过测定妊娠早期宫颈分泌物中fFN水平及宫颈长度来预测高龄产妇早产的发生风险。