摘要：根据其它植物atp6、cob和coxⅡ基因保守区设计特异引物,利用RT-PCR技术从‘国庆1号’温州蜜柑cDNA中分别扩增出特异性片段,将其克隆至pBluescript(sk+)载体上进行测序。同源性分析表明,所克隆的atp6、cob和coxⅡ与其他植物的对应氨基酸区域同源性分别达到85%、98%和96%以上。RT-PCR分析表明它们在叶片、花瓣以及不同时期的花蕾中都有表达,在幼果中没有表达。Southern分析表明它们在温州蜜柑基因组DNA中为多拷贝。

摘要：胎盘在母体-胎儿间物质交换时发挥着重要作用,而其物质交换动力来自胎盘线粒体通过氧化磷酸化产生ATP。为探讨随着动物妊娠阶段的持续,线粒体相关基因的表达量变化,本研究采用RT-PCR技术检测大足黑山羊妊娠20,25,30,60,90和120d胎盘线粒体COXIV、SDHA、PGC-1α、NRF-1和TFAM基因的相对表达量。结果显示,随着大足黑山羊妊娠持续,胎盘子叶和子宫阜线粒体被检测的5项基因相对表达量均呈现先升高后降低、再缓慢变化的趋势。尤其在妊娠25d时相对表达量均达到高峰,但妊娠30d时相对表达量急剧下降。在胎盘子叶组织中COXIV、SDHA和NRF-1的相对表达量分别由0.84,1.53和1.06,降至0.09,0.32和0.22,差异显著（P〈0.05）;在子宫阜中COXIV、SDHA和PGC-1α的相对表达量分别由0.50,4.36和1.36降至0.11,0.84和0.48,差异极显著（P〈0.01）。妊娠60d后,在胎盘子叶组织中,这些基因相对表达量不断升高;在子宫阜,相对表达量呈递减趋势,但差异均不显著（P〉0.05）。相关性分析结果显示,子宫阜组织中线粒体相关基因的表达与胎儿及胎盘生长发育指标如胎儿重、胎儿长、胎盘重、胎盘效率、子叶个数和子叶直径呈显著负相关（P〈0.05）;而子叶组织中线粒体相关基因的表达与胎儿长和子叶直径显著性相关（P〈0.05）,但与胎儿重、胎盘质量、胎盘效率和子叶个数无显著相关性（P〉0.05）。

摘要：目的分析佛山地区孕妇线粒体耳聋基因突变谱。方法选取2020年1月至2021年4月在佛山市妇幼保健院产科门诊就诊的20299名孕妇作为研究对象,采用导流杂交术筛查常见耳聋易感基因,针对线粒体基因12S核糖体RNA和转运RNA特定片段设计引物并扩增,采用Sanger测序法检测线粒体突变位点。结果导流杂交法检测出四个基因11个突变位点共739例(3.64%),其中间隙连接β2蛋白:235delC杂合突变349例(47.22%)。Sanger测序检测出线粒体24个突变位点共130例,其中3种m.12192G>A、m.7443A>G、m.7445A>T为致病性突变。结论导流杂交术结合Sanger测序法用于孕妇耳聋基因筛查在耳聋防控中有重要的价值,线粒体基因测序丰富了佛山地区线粒体耳聋基因突变谱,可以提供更好的遗传咨询和生活指导。

摘要：【目的】由于香蕉高度不育和无性繁殖,经过长期的进化,导致许多资源来源不清晰。开发大蕉资源特异性分子靶标,为香蕉资源鉴定和遗传改良提供技术支撑。【方法】利用香蕉线粒体cox2/2-3基因序列,根据大蕉在该序列的特异性位点进行分子靶标设计,采用37份大蕉,以及香牙蕉、粉蕉、贡蕉、尖苞片蕉(Musa acuminata)、长梗蕉(***)、芭蕉(***)以及阿宽蕉(***)等共计59份其他类型香蕉资源进行鉴定筛选,获得特异性鉴定大蕉的分子靶标DcR/DcF,并进行评价。【结果】通过对共计96份香蕉资源的检测,发现37份大蕉均出现634 bp特异性条带,香牙蕉、粉蕉、贡蕉未出现该条带。在应用该标记对野生蕉检测中发现仅有阿宽蕉出现该特异性条带,长梗蕉、尖叶蕉、芭蕉均未出现该特异条带,同时大蕉和阿宽蕉的杂交后代出现了该特异条带。【结论】成功开发了一个大蕉特异性分子靶标DcR/DcF,可以在栽培蕉中特异性地鉴定大蕉,并具有快速、简便、准确的特点,该技术对香蕉种质资源鉴定、新品种选育等具有重要的应用价值。

摘要：为实现羊肉制品中鼠源性成分的定性检测,基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以鼠的线粒体基因(大鼠环氧化酶基因KP244683.1和小鼠的16S rRNA基因KY018919.1)为靶标,分别设计相应的LAMP特异性引物,通过优化反应条件,确定最佳LAMP反应体系。对混合模拟样品进行特异性、灵敏度和稳定性评估,应用LAMP和聚合酶链式反应检测方法分别对市售羊肉制品进行检测,对比分析检测结果。结果表明,本研究建立的LAMP方法特异性强,大鼠和小鼠的检出限分别为0.1%和0.5%,稳定性好,LAMP与聚合酶链式反应市售实际样本检测结果具有高度的一致性。因此,本实验建立的鼠源性成分LAMP检测方法操作简便、高效、准确,为鼠肉掺假快速诊断和基层诊断提供了新的选择,可作为羊肉制品中鼠源性成分的快速检测新方法。

摘要：为研发能快速、准确地鉴别在我国为害严重的3种福寿螺——小管福寿螺Pomacea canaliculata、斑点福寿螺P. maculata和新发现入侵种Pomacea sp.的PCR技术,基于其线粒体全基因组序列,通过比对分析找到种间差异区段,分别设计并筛选了上述3种福寿螺的特异性引物对,建立了多重PCR检测方法,对其特异性和灵敏度进行评价。结果表明,所设计的引物特异性强,能从不同地理种群的小管福寿螺、斑点福寿螺和Pomacea sp.中分别扩增出1 238、901和571 bp的特异性条带,阴性对照无条带;退火温度为60℃时,32个扩增循环的检测灵敏度可达1 ng样品DNA量。所构建的多重PCR体系可应用于福寿螺不同部位组织碎片、不同性别及不同发育阶段样品的鉴别,具有准确快速、灵敏高效的特点,可用于植保检疫及食品安全部门福寿螺种类的检测。

摘要：阿胶(Asini Colla Corii)及其原料皮张源性成分的鉴定是对阿胶真实性的一种保障,阿胶生产企业和市场监管部门急需马、驴、骡皮张以及阿胶中源性成分鉴别的有效检测方法。本研究基于马、驴核基因组和线粒体基因组筛选物种特异性DNA序列作为检测靶标,设计马、驴特异性引物,建立了鉴别马、驴、骡皮张以及鉴定阿胶中马和驴源性成分的多重PCR方法。结果显示,本文所建立的方法可用于阿胶源性成分及皮张种源的鉴别,其特异性强,只在目标物种中扩增出目的条带,而非目标物种中没有任何扩增产物,而且灵敏度能达到0.2 ng,可为阿胶生产企业和市场监管部门提供技术支撑。

摘要：针对花生蚜虫体型小、在田间不易准确快速识别的问题。本文采用基于线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基I(mitochondrial DNA cytochrome coxidase subunit I,mtDNA COI)基因的种特异(species-specific COI)PCR方法,研究了其快速鉴定的分子技术。研究利用mtDNA COI基因通用型引物F-LCO-1490/R-HCO-700ME获得青岛地区花生蚜虫COI基因序列,并根据测序结果设计六对花生蚜特异引物,同时以同一花生田采集的、与花生蚜同生境节肢动物、线虫、软体动物的166个DNA样本为模板对六对引物的种特异性进行了检测。PCR结果显示,引物AC_F2/AC_R2对花生蚜基因组模板有特异扩增能力,片段长度为299bp;且该对引物在与花生蚜同生境节肢动物、线虫、软体动物样本中均未扩增出条带,显示出此种特异性引物对其他物种不具有交叉反应扩增能力,可用于花生蚜的快速检测及预测预报,同时对本地天敌对花生蚜捕食作用的检测也具有重要意义。

摘要：目的利用微滴数字PCR技术,建立鸭源性成分的快速、特异、灵敏检测方法。方法根据鸭线粒体基因全序列设计的引物及探针,利用微滴数字PCR进行扩增,建立鸭源性成分检测方法;以市场中常见畜禽肉为参考物种作微滴数字PCR特异性检测;以羊肉为干扰物观察微滴数字PCR的抗干扰性;将鸭肉DNA进行梯度稀释,对方法灵敏度进行检测。结果该方法能够有效对鸭源性成分进行检测,特异性强,灵敏度高,并且其他物种成分的存在对方法灵敏度检测没有影响。结论该方法特异性强,灵敏度高,可以实现畜肉食品中的鸭源性成分检测。

摘要：目的建立一种快速、特异、灵敏的鸭源性成分检测方法。方法本研究以鸭线粒体基因全序列为靶位点设计引物和探针,进行荧光定量PCR扩增,建立鸭源性成分检测方法;以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测;以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对鸭肉DNA进行梯度稀释,做灵敏度检测。结果该方法能够有效对鸭源性成分进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度较高(可达0.1μg/kg)并且羊肉成分的存在对鸭肉灵敏度检测没有影响。结论该方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测畜肉食品中含有的鸭源性成分。