摘要：建立一种快速、准确鉴定牛肉制品中牛源性成分并且量化牛肉成分含量的方法。以牛线粒体细胞色素b基因为靶基因,设计出具有特异性引物。选择真核生物核糖体16SrDNA为内参基因,采用实时荧光相对定量法。牛肉质量百分比的对数值与之对应的循环阈值差值△Ct呈良好线性关系。标准曲线回归公式为y=-3.3645x+0.8737,R2=0.9926,扩增效率达98.25%。通过模拟混合样品对标准曲线进行质量评估,证明该方法适用于对牛肉成分的鉴定以及含量的检测,为量化肉制品中牛肉成分研究提供参考意见。

摘要：旨在检测患病犬经三氮脒治疗后,吉氏巴贝斯虫线粒体细胞色素b(Cyt b)是否存在基因突变。调查了2010至2020年犬巴贝斯虫病的流行情况,收集了11份自然感染吉氏巴贝斯虫且接受三氮脒治疗的患犬血液样品,采用蛋白酶K消化,苯酚提取法提取血液中基因组DNA,设计引物,通过PCR扩增吉氏巴贝斯虫Cyt b基因片段并进行测序分析。调查发现,自2010年以来,通过三氮脒治疗的吉氏巴贝斯虫病的疗程逐渐延长,复发率也逐渐增加。在11份血样中,吉氏巴贝斯虫的Cyt b基因彼此之间相似性高达99.65%~100%,与日本分离株也有较高的同源性(99.18%~99.54%)。在Cyt b基因nt363基因位点上没有发现基因突变。这些结果说明虽然吉氏巴贝斯虫对三氮脒逐渐产生耐药,但三氮脒对吉氏巴贝斯虫Cyt b基因并不产生影响。

摘要：建立一种快速、准确鉴定羊肉制品中羊源性成分并且量化羊肉成分含量的方法。以羊线粒体细胞色素b基因为靶基因,设计出具有特异性引物。选择真核生物核糖体16S rDNA为内参基因,采用实时荧光相对定量法。羊肉质量百分比的对数值与之对应的循环阈值差值ΔCt呈良好线性关系。标准曲线回归公式为y=-3.4057x-0.3112,R^2=0.9916,扩增效率达E达96.62%。本试验中羊源性DNA检测限可达16 pg/μL,回收率在93.07%~106.20%。抽取8份市售羊肉制品进行检测,有3份含量低于50%。本试验中建立的实时荧光PCR检测方法操作方便、特异性强、灵敏度高,所得数据可靠,为肉制品羊源性成分检测提供了参考方法。

摘要：本研究旨在研制一种快速鉴定肉制品中狗源性成份的DNA检测试剂盒,并对此试剂盒做出方法学评价。以改良SDS-PK法提取狗肉及掺假肉品种(狐肉、貂肉)基因组DNA,选择具有种属特异性的线粒体细胞色素b基因作为鉴定靶基因,应用Primer5.0设计特异性引物,建立狗源性DNA检测方法,组装狗源性DNA检测试剂盒,并进行特异性、稳定性及重复性评价。结果表明,本试剂盒可有效检测肉制品中狗、狐、貂源性成分,DNA提取效率高,仅0.05 g肉样即可提取浓度高于100 ng/μL的基因组DNA,OD260/280处于1.80~2.00之间,最低检测限为10-4 ng/μL,所有检测步骤可在4.5 h内完成,操作简便,特异性高。试剂盒所采用试剂安全无毒,反复冻融20次后仍然有效,可于-20℃保存一年。随机抽取12份市售样品进行检测,有3份样本中存在狐、貂肉冒充狗肉现象,掺假率高达25%,该结果与长春食品药品检验中心检测结果一致。狗源性DNA检测试剂盒灵敏性高、特异性强,检测结果准确稳定,具有良好重复性,适用于狗肉快速定性检测。