摘要：采用正交设计和响应面分析等实验方法对基因工程菌株里氏木霉 (Trichodermareesei)30 6产组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)的液体发酵条件进行了优化。确定了适宜的培养基配方和最佳发酵工艺条件。在优化发酵条件下 ,摇瓶液体发酵液中的t PA酶活力达 3386 91IU/mL ,比初始发酵条件下酶活力提高上千倍。

摘要：目的:构建人组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,tPA)原核表达载体,检测其在大肠杆菌Escherichia coli中的初步表达.方法:以含有人tPA基因的质粒为模板,设计引物扩增出含有RGDS-tPA基因并构建到原核表达载体pET28a中,测序证实为正确的rtPA序列,并将pET28a-tPA转化至菌株*** BL21(DE3).用IPTG诱导rtPA在***中表达,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行验证.结果:琼脂糖凝胶电泳获得目的基因片段tPA的条带约在1 700bp处,鉴定为阳性重组体;聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定获得目的蛋白片段rtPA的条带约53KDa,为非活性的包涵体.结论:人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体构建成功,可在大肠杆菌中有效表达.

摘要：脑卒中日益成为威胁人类的三大重要疾病之一,其中以急性缺血性脑卒中最为常见。目前静脉溶栓治疗已成为急性缺血性脑卒中的首选,但大量研究表明静脉溶栓会增加出血性转化的风险。文中将对重组组织型纤溶酶原激活剂溶栓后出血性转化的临床分型、发生率、发生机制及危险因素的最新进展做一综述,并探讨出血性转化的可能预测指标,为临床溶栓治疗提供新的参考。

摘要：背景:同型半胱氨酸已成为动脉粥样硬化的独立危险因子,它可能通过破坏内皮细胞的结构和功能从而导致动脉粥样硬化。目的:探讨同型半胱氨酸对老年冠心病患者纤溶酶活性的影响。设计:以冠心病患者为研究对象,健康人群为对照组的病例-对照。单位:一所大学医院的综合科及心内科。对象:本研究于首都医科大学附属北京朝阳医院综合科及心内科完成。选择2001-12/2003-8本院心内科及综合科门诊及住院患者177例,根据冠状动脉造影结果分为:冠心病组91例,其中男50例,女41例,平均年龄(66±6)岁;冠状动脉造影阴性组86例,其中男43例,女43例,平均年龄(60±6)岁。正常对照组为同期于本院门诊体检的健康中年人85例,其中男43例,女42例,平均年龄(55±5)岁。方法:收集外周血,检测血浆中的组织型纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活物抑制剂1和血管性血友病因子的活性,用酶免疫试验法测同型半胱氨酸,并计算纤溶酶原激活物抑制剂1/组织型纤溶酶原激活剂活性比值。主要观察指标:血清同型半胱氨酸水平及血浆组织型纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活物抑制剂1、血管性血友病因子活性,纤溶酶原激活物抑制剂1/组织型纤溶酶原激活剂的比值。结果:冠状动脉病变组同型半胱氨酸,纤溶酶原激活物抑制剂1,纤溶酶原激活物抑制剂1/组织型纤溶酶原激活剂,

摘要：目的观察动脉溶栓辅助血管内支架成形术治疗急性脑梗死的效果。方法采用前瞻性病例对照设计，将24例动脉溶栓后遗留血管狭窄（〉50％）的急性脑梗死患者分为支架治疗组和药物治疗组，分别给予支架成形术＋药物治疗和常规药物治疗，评价两组血管完全再通率、残余狭窄率以及3个月时改良Rankin量表评分。结果支架治疗组血管完全再通率高于药物治疗组（54．5％对0％,x^2=6．382，P〈0．001），残余狭窄率显著低于药物治疗组（4．5％±5．2％对82．5％±10．5％，t=7．464，P〈0．001），临床转归良好率显著高于药物治疗组（100％对76．9％，x^2＝14．263，P=0．038）。结论动脉溶栓辅助血管内支架治疗急性脑梗死疗效优于药物治疗组，且较为安全。

摘要：哺乳动物细胞能够提供复杂的翻译后修饰,表达蛋白性质与天然蛋白接近,使蛋白药物更加稳定有效。自1987年FDA批准第一个中国新药组织型纤溶酶原激活剂(TPA),哺乳动物细胞广泛应用于重组蛋白的生产,开始了工业化生产之路。在生物制药行业几十年的快速发展中,哺乳动物CHO细胞成功生产了众多细胞因子、重组酶、重组抗体、重组融合蛋白等有价值的生物技术药物,为市场需求作出重大贡献,同时也奠定了它在生产细胞中的优势地位。抗体药物是现代生物医药产业的主力军,占全球生物药物市场的50%以上,是生物医药产业增长最快的细分领域,抗体药越来越多地应用于几乎所有的医学分支,抗体疗法的日益成功推动了重组抗体技术和生产设施的设计和管理。抗体药物自身有着不容忽视的问题,如结构复杂不稳定、大规模生产复制困难、研发周期长、生产成本高、工艺复杂等[1]。随着国内抗体药物的发展和应用,降低成本成为企业的主要任务,提高蛋白表达量是降低成本的主要手段之一。

摘要：目的探讨羊膜移植在治疗早期兔角膜碱烧伤中的疗效及其对组织型纤溶酶原激活剂(tissue-typeplasminogenactivator,t-PA)和1型纤溶酶原激活剂抑制剂(plasminogenactivatorinhibitor1,PAI-1)活性的影响。设计随机对照实验研究。研究对象72只新西兰白兔,随机分为碱烧伤组、新鲜羊膜移植组、保存羊膜移植组及正常对照组,每组18只。右眼为实验眼。方法制作角膜碱烧伤模型,烧伤后30分钟实施手术。术后第14、30、60天,通过计算机图像分析系统分析角膜情况;并用发色底物法检测角膜组织浸液中t-PA和PAI-1的活性。主要指标角膜上皮荧光染色、角膜烧伤斑面积和平均光密度,t-PA及总PAI-1活性,t-PA/PAI-1比值。结果术后第14、30、60天,新鲜羊膜移植组及保存羊膜移植组t-PA活性和t-PA/PAI-1与碱烧伤组相比均显著下降(P<0.01)。术后第14天,新鲜羊膜移植组t-PA活性明显低于保存羊膜移植组(P=0.022),而总PAI-1活性明显高于保存羊膜移植组(P=0.001);术后第14、30天,t-PA/PAI-1明显低于保存羊膜移植组(P=0.000,P=0.030)。结论羊膜移植术后t-PA活性和t-PA/PAI-1显著下降,证实羊膜具有抑制炎症、抑制瘢痕、促进上皮愈合的功能;新鲜羊膜优于保存羊膜。