摘要：目的:渗透压对拟胚体(embryoid body,EB)分化的确切影响尚不明确,本研究旨在探讨增加渗透压对EB分化的影响,及该过程与钙黏蛋白之间潜在的联系。方法:本研究使用聚乙二醇300来增加培养液的渗透压,在高渗透压和常规培养液下培养EB。实验设计包括对照组、实验组(高渗组)、不同浓度的聚乙二醇300处理组和高渗+抑制剂组,采用Western blot、RT-qPCR、AM/PI染色、CCK-8、免疫细胞化学染色等检测方法,对EB的细胞活力及上皮钙黏蛋白(E-cadherin,CDH1)和神经钙黏蛋白(N-cadherin,CDH2)、三胚层标志物以及多能性标志物的表达进行了分析。结果:高渗不影响EB的细胞活力。在实验组和对照组的EB中,钙黏蛋白CDH1和CDH2的表达显示出显著差异,但无明显的上皮间质转化转变趋势。实验组中CDH2的表达显著下调,并且与渗透压变化呈现明显相关性。此外,在高渗组中,相较于对照组,EB的多能性标志物在第2~5天表达显著提高。同时,高渗组中胚层标志物的表达量明显增加,而外胚层标志物呈现下调趋势。本研究使用SB431542特异性抑制TGF-β信号上调CDH2表达,结果显示高渗组EB的中胚层和外胚层标志物的表达趋势发生了逆转。结论:当渗透压较高时,会促进EB中胚层的分化效率,这一过程可能与渗透压引起的CDH1和CDH2变化相关。

摘要：目的研究甘草查尔酮A抑制B16F10细胞增殖机制。方法 SRB法检测甘草查尔酮A对B16F10细胞增殖影响,Giemsa染色法观察细胞形态变化,比色法检测B16F10细胞内、外黑色素含量,Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡率,流式细胞术测定细胞周期分布,Q-PCR法检测细胞凋亡相关基因B淋巴细胞-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞周期蛋白(Cyclin E2)和细胞周期蛋白依赖性激酶-2(CDK2)的mRNA表达。结果甘草查尔酮A能有效抑制B16F10细胞增殖,呈现浓度依赖性和时间依赖性;随药物浓度增加,细胞增殖速度降低,细胞形态由树突状变为固缩圆球状,并伴有黑色素颗粒物出现,且细胞内、外黑色素含量呈浓度依赖性增加趋势,甘草查尔酮A能使细胞阻滞在G1期,在低浓度时,诱导细胞分化,高浓度时,诱导细胞凋亡;同时,甘草查尔酮A下调凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比率,抑制周期相关蛋白Cyclin E2、CDK2的mRNA表达。结论甘草查尔酮A抑制B16F10细胞增殖机制可能是通过使B16F10细胞G1期阻滞,进而诱导细胞分化和凋亡。

摘要：目的探讨视网膜新生血管发生过程中Twist基因的表达情况。方法对照实验研究。将40只新生C57／BL小鼠分为两组：（1）对照组，正常空气环境中饲养；（2）高氧组，在高氧环境中制作小鼠缺氧性视网膜新生血管动物模型。将出生第7天的小鼠放入氧箱，在75％浓度的高氧环境中饲养5d后，取出氧箱。待出氧箱第12天和第17天（视网膜新生血管发生高峰时间）分别处死小鼠，制作视网膜铺片和切片，观察小鼠视网膜新生血管发生情况。应用免疫组织化学染色检测小鼠视网膜血管内皮细胞（VE）-钙黏蛋白、波形蛋白及Twist基因表达变化情况；提取全视网膜RNA，应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测VE-钙黏蛋白、波形蛋白及Twist基因表达变化情况。应用SPSS11．5统计学软件进行数据处理，对高氧组与对照组小鼠出生后不同时间的VE．钙黏蛋白、波形蛋白、Twist基因表达的灰度值比较，采用两因素析因设计的方差分析，以P〈0．05作为差异有统计学意义。结果免疫组织化学检测结果显示，出生后第17天的小鼠，高氧组VE一钙黏蛋白表达的灰度值（65．19±8．39）与对照组（75．36±7．04）相比明显减少（F=8．616，P=0．009），波形蛋白表达的灰度值（95．09±14．13）与对照组（82．14±6．32）相比明显升高（F=6．999，P=0．016），Twist基因表达的灰度值（119．48±7．90）与对照组（93．30±6．37）相比亦明显升高（F=66．557，P=0．000）。RT-PCR检测结果显示，不同处理组间波形蛋白、Twist基因表达的灰度值与检查时间存在交互作用（F=5．508，P=0．032；F=17．760，P=0．001）。结论在小鼠视网膜新生血管形成过程中，细胞转型调控的Twist基因发挥着重要作用，其作用机制可能是通过下调血管内皮细胞间的紧密连接蛋白，促进内皮细胞转型实现。

摘要：背景:以骨髓间充质干细胞作为种子细胞,把干细胞和基因治疗结合起来是研究中枢神经系统损伤和肿瘤治疗新的思路和趋势。目的:观察腺病毒载体绿色荧光蛋白基因(Ad-GFP)在兔骨髓间充质干细胞转染和表达的量效关系及对细胞生物学特性的影响,探讨用该载体构建基因修饰骨髓间充质干细胞的可行性。设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2008-08/2009-03在南方医科大学完成。材料:新西兰大白兔,雌雄不拘,质量2.0～3.0kg。方法:体外分离培养兔骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞免疫表型,293细胞包装制备病毒,以不同滴度的Ad-GFP(1×103～1×1010PFU/mL)转染骨髓间充质干细胞,细胞计数法分析转染率。主要观察指标:倒置显微镜观察细胞形态学改变,CCK8法检测细胞增殖活性,用血清撤离加入β-巯基乙醇诱导感染Ad-GFPBMSCs向神经样细胞的定向分化。结果:3～6代骨髓间充质干细胞表面标志CD34、CD45阴性,而CD29、CD44阳性。当病毒滴度为1×107PFU/mL时感染率为55%,1×109,1×1010PFU/mL感染率均为85%,但1×1010PFU/mL时出现细胞病理现象,7d荧光表达最强,28d仍可见荧光表达。感染Ad-GFP的骨髓间充质干细胞经β-巯基乙醇诱导可分化为神经元样细胞,神经元特异性烯醇化酶表达阳性。结论:合适滴度的Ad-GFP可以高效感染骨髓间充质干细胞,对细胞的生物学特性影响较小,不影响诱导分化功能,骨髓间充质干细胞可以作为Ad-GFP载体系统进行基因治疗研究的种子细胞。

摘要：设计了一种具有容错能力的可重构阵列,它以2D-Mesh型片上网络(Network-on-Chip,No C)路由器作为互连单元,以精简指令集的处理器为计算单元,这种结构适用于数字信号处理等应用领域。对于阵列互连结构中的瞬态故障,采用三模冗余、扩展海明码和检错重传的方法对其进行容错,使用连线内建自测试(build-in self-test)与自修复及自适应路由的方法对互连结构中的永久故障进行容错。对于计算单元失效的情况,模仿生物体胚胎细胞的分化机制,通过调整相关配置信息实现计算任务的重新分配,从而实现容错。将一个19阶的音频FIR带通滤波器映射到3×3的容错可重构阵列上,分别对其运算和容错能力进行了验证,结果表明系统可以实现预期的运算功能,且具有较强的容错能力。

摘要：背景:作者前期工作已经证实,在人体的多种组织中均存在有一类分化潜能可与胚胎干细胞媲美的原始干细胞群体,其表型为CD105+。目的:验证人的动脉是否也存在原位干细胞,并观察其分化潜能。设计、时间及地点:细胞观察实验,于2004-01/2007-01在河南省人民医院和中国医学科学院组织工程中心完成。材料:实验血管来源于流产胎儿,实验方案经河南省人民医院伦理委员会批准。方法:用MACS磁珠分选CD105+细胞,应用极限稀释法获得单细胞克隆,观察其表型,在特定的诱导培养基中培养,用免疫荧光法和免疫印迹等方法检测其分化。主要观察指标:①干细胞表面抗原鉴定。②血管内皮、平滑肌细胞和脂肪细胞特异性抗原表达。结果:细胞的表型是CD105+Flk1+CD31-αSMA-,可以向血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和脂肪细胞分化。结论:人的动脉中存在着可以向血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和脂肪细胞分化的干细胞。

摘要：背景:脊柱和创伤骨科的重建修复对骨的需求量极大,但现实的供需缺点和矛盾限制了植骨运用,急需找寻一种替代途径。目的:探索骨髓间充质干细胞体外分离培养的最佳实验条件,并观察其生物学特征。设计、时间及地点:细胞水平的体外组织工程实验,于2007-05/2008-05在苏州大学附属儿童医院骨科实验室完成。材料:选择4周龄雄性新西兰大耳白兔,由苏州大学动物中心提供。方法:自股骨大转子及髓腔抽取新西兰大耳白兔骨髓,采用密度梯度离心法获取离心层骨髓单个核细胞,体外接种连续培养观察,原代接种后48h首次换液,此后每二三天全量换液;待细胞长至90%汇合时,用胰酶和EDTA混合液消化传代。主要观察指标:采用倒置显微镜下进行细胞生长形态观察,四唑盐比色法测定细胞活性并描绘细胞生长曲线;另选择P3代细胞进行成骨条件培养液培养4周,应用Gomori钙钴染色法鉴定成骨分化的标志物——碱性磷酸酶阳性细胞,应用Von-Kossa改良染色法测定钙节结。结果:分离培养的骨髓间充质干细胞生长形态和增殖活性良好,接种后的细胞由短梭形向长梭形、三角形乃至多角性发展,各代细胞有明显的生长潜伏期、对数增长期和平台期,细胞可以连续培养至P9代。经成骨诱导分化的细胞碱性磷酸酶染色阳性率为93%,矿化结节染色阳性。结论:骨髓间充质干细胞体外分离、扩增简单可行,可以定向诱导为成骨细胞。

摘要：背景:骨髓基质细胞是贴壁黏附的非造血多潜能干细胞,其在一定条件体外培养、扩增可被诱导分化为神经元和胶质细胞。目的:观察家猫骨髓基质细胞体外培养及诱导分化成神经干细胞的生长情况。设计:随机取样。单位:南方医科大学附属珠江医院神经外科。材料:实验于2002-01/12在解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所中心实验室进行,实验动物是由第一军医大学动物中心提供健康家猫20只,年龄1.0～2.0岁,体质量2.5～4.0kg,雌雄各半。干预:随机抽取家猫左右下肢的骨髓,从中分离得到骨髓基质细胞,提取的骨髓基质细胞悬液在体外给予神经干细胞培养基培养,增殖后用维甲酸为分化诱导因子进行诱导骨髓基质细胞向神经干细胞转化。CK2型倒置相差光学显微镜(OLYMPAS,JAPAN)追踪观察活细胞培养生长情况,同时观察4,12,24,48h去除非贴壁细胞及不去除贴壁细胞骨髓基质细胞生长情况。采用免疫组织化学染色改良法对干细胞阶段的骨髓基质细胞进行免疫细胞化学检测,OLYMPAS光学显微镜观察。主要观察指标:对接受实验干预的骨髓基质细胞分别进行倒置相差显微镜下观察活细胞生长情况及光镜下观察免疫细胞化学染色情况。结果:20只家猫全部进入结果分析。猫骨髓基质细胞在体外培养中胞体增大,倒置相差显微镜下可见丰富的胞浆颗粒,继之出芽,贴壁生长,可形成克隆团,同时可传代培养。免疫组化染色分析结果显示能表达神经干细胞特异性抗原Nestin,而且能分化出胶质细胞样细胞和神经元样细胞。结论:家猫骨髓基质细胞具有干细胞特征,在合适条件下可扩增、形成克隆并诱导分化出神经胶质细胞和神经元特征细胞。

摘要：组织工程皮肤是修复皮肤急、慢性缺损的重要生物活性材料,种子细胞对其修复效果起着至关重要的作用。本文对近年来组织工程皮肤种子细胞的研究进展作一综述。1表皮细胞与成纤维细胞（fibroblast,Fb）角质形成细胞（keratinocytes）是表皮的主要组成部分,

摘要：背景:近年来基因修饰干细胞与支架材料复合形成组织工程化骨为修复骨缺损提供了骨组织重建的全新思路。目的:实验拟观察转染人骨形态发生蛋白2基因转染骨髓间充质干细胞复合珊瑚羟基磷灰石支架材料修复骨质疏松症下颌骨缺损的效果。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-06/2006-10在教育部口腔生物医学工程重点实验室完成。材料:6月龄未孕雌性SD大鼠24只,SPF级,体质量250~300g,构建绝经后骨质疏松症动物模型。含人骨形态发生蛋白2基因的pcDNA3.1-hBMP-2重组质粒由解放军第三军医大学提供;支架材料珊瑚羟基磷灰石由卫生部口腔生物医学工程重点实验室提供。方法:24只SD模型大鼠随机数字表法分为实验组和对照组,每组12只。3个月后分别取其骨髓间充质干细胞培养。实验组骨髓间充质干细胞通过脂质体Lipogen介导转染pcDNA3.1-hBMP-2质粒,对照组细胞未作处理。3d后将每只大鼠骨髓间充质干细胞与珊瑚羟基磷灰石支架材料复合,再分别对应地植入取材动物的自体下颌骨极限性骨缺损区。主要观察指标:术后第4,8周组织切片行免疫组织化学染色,观察新骨形成情况。术后8周进行成骨量的半定量检测。结果:24只SD模型大鼠均进入结果分析。①术后4周实验组在珊瑚羟基磷灰石材料边缘有新生骨质形成,8周时见相互连接的层板状成熟骨基质形成,对照组4周时只在材料边缘有少量骨基质形成,8周时新生骨质数量上明显少于实验组,且材料边缘及中央处有脂肪样结构形成。②对照组术后8周新生骨所占面积百分比为(0.046±0.004)%,实验组为(0.233±0.015)%,各组成骨量差异具有显著性意义(P<0.01)。结论:人骨形态发生蛋白2基因修饰的骨髓间充质干细胞复合珊瑚羟基磷灰石支架形成的组织工程化骨修复骨质疏松症下颌骨的成骨量较无基因修饰明显增加。