摘要：背景:动物实验证明乙醇可引起股骨头内脂肪积聚,导致骨坏死,其作用机制不详。NIH3T3成纤维细胞是一种多潜能干细胞,尚未见关于乙醇对NIH3T3成纤维细胞作用的有关报道。目的:观察乙醇对NIH3T3成纤维细胞分化为脂肪细胞的作用,及其对成脂转录因子过氧化物酶体增殖子活化受体-γ表达的影响。设计:单一样本观察。单位:郑州大学基础医学院生物化学教研室和郑州大学第一附属医院骨科。材料:NIH-3T3成纤维细胞由美国弗吉尼亚大学医院骨科实验室提供。方法:实验于2002-04/2003-06在郑州大学基础医学院生物化学教研室实验室完成。取NIH-3T3成纤维细胞随机分为6组,每天分别加入体积分数为0.998乙醇,剂量为0(对照组),0.03,0.06,0.09,0.15,0.21mol/L,培养至14d,苏丹Ⅳ染色,采用电子计算机图像分析软件ImageProPlus4.1,确定脂肪细胞百分比。采用反转录聚合酶链反应技术,检测细胞过氧化物酶体增殖子活化受体-γmRNA的表达。主要观察指标:①NIH3T3细胞分化为脂肪细胞结果。②乙醇组和对照组细胞基因表达结果。结果:以递增浓度(0.03,0.06,0.09,0.15,0.21mol/L)乙醇处理细胞14d。①各乙醇组中脂肪细胞百分比分别为11.9%,23.8%,28.2%,31.1%,42.6%,分别是对照组(9.6%)的1.2,2.5,2.9,3.2,4.4倍。0.03mol/L乙醇组与对照组的差别无统计学意义(P>0.05),其余4组与对照组及0.03mol/L乙醇组的差别有高度显著性(P0.05)。其余4组与对照组及0.03mol/L乙醇组的差别有高度显著性(P<0.001)。结论:乙醇能够直接诱导NIH3T3成纤维细胞大量分化为脂肪细胞,这可能是乙醇性骨坏死时骨髓内脂肪增多的原因之一。

摘要：目的:探讨新西兰兔骨髓间充质干细胞在体外不同条件下定向分化为阴茎海绵体平滑肌细胞的可行性。方法:实验于2004-10/2005-05在中山大学第二附属医院实验中心完成。采用全骨髓贴壁法分离骨髓间充质干细胞;分别通过添加血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子进行体外直接诱导以及与阴茎海绵体平滑肌细胞不同比例(据骨髓间充质干细胞与阴茎海绵体平滑肌根细胞数量比,共培养诱导分为4∶1组、2∶1组以及1∶1组。每6孔作为1个诱导组,每孔兔骨髓间充质干细胞终浓度为1×10L-1,阴茎海绵体平8滑肌细胞相应终浓度分别为0.25×10L-1、0.5×108L-1及1×10L-1)进行88共培养两种方法诱导干细胞分化为阴茎海绵体平滑肌细胞。培养2d后的细胞爬片进行荧光免疫细胞化学染色测定抗α平滑肌肌动蛋白抗体表达,全程避光进行。完成染色后,立即进行激光共聚焦显微镜镜检。每孔爬片随机取5个视野,计算出每孔中Hoechst33342与FITC(Cy3)或双阳性细胞数及Hoechst33342单阳性的细胞数的比值以计算每孔的诱导率,应用SPSS软件进行完全随机设计的方差分析。结果:①阴茎海绵体平滑肌细胞的生长特性、形态及鉴定:组织块贴壁后细胞渐游出,呈梭形或长条形,原代细胞汇合90%约需16～19d,传代后生长加快,90%汇合时1∶2传代后约3d可再次传代。细胞融合时呈现典型的“峰-谷”样形态。传至10代之后细胞生长放缓,胞体渐变宽大,胞内颗粒增多。荧光免疫细胞化学检测特异性抗α平滑肌肌动蛋白抗体见绝大部分细胞呈阳性。②直接诱导以及共培养诱导的初步分析结果:骨髓间充质干细胞之细胞核标记良好,诱导后见胞浆表达多量抗α平滑肌肌动蛋白抗体,与阳性对照组相似;高倍镜下可清晰见平滑肌肌动蛋白肌丝,而阴性对照组只有核显色,无抗α平滑肌肌动蛋白抗体表达。③不同组别诱导率方差分析S-N-K检验得各组总体均数差异性检验的(F=44.831P<0.05),表明统计学上有显著性差异;共培养1∶1,组效率最高,依次是共培养2∶1组、共培养4∶1组,血管内皮生长因子组、血管内皮生长因子+碱性成纤维细胞生长因子组最低,后两者间诱导效果在统计学上无差别。结论:骨髓间充质干细胞可通过添加生长因子和共培养的方法诱导分化为阴茎海绵体平滑肌细胞,其中以共培养的方法效率较高。

摘要：背景:干细胞能够分化为血管平滑肌细胞,参与动脉粥样硬化发生、发展,其机制尚不清楚。“环境诱导分化学说”认为细胞-细胞接触、细胞因子可能在干细胞分化过程中起关键作用。骨髓间质干细胞具有向平滑肌细胞分化的潜能。目的:体外诱导骨髓间质干细胞分化为平滑肌细胞,观察已分化成熟平滑肌细胞及细胞因子对骨髓间质干细胞分化的影响。设计:以细胞为观察对象的重复观察测量,对照性体外实验。单位:西安交通大学第一医院心内实验室。材料:实验于2003-05/2004-05在西安交通大学第一医院心内实验室完成。SD大鼠60～80g、90～110g,雌雄不限,由本校动物中心提供。PE标记小鼠抗大鼠CD34(Santa Cruz),PE标记小鼠抗大鼠CD71(Oxford Biotechnology),FITC标记小鼠抗大鼠CD90(Oxford Biotechnology),小鼠抗人单克隆抗体SM-α-actin(NeoMarkers),小鼠抗人单克隆抗体Calponin(NeoMarkers),TRITC标记山羊抗小鼠IgG(SBA),pEGFP-N3(本实验室提供),Lipofectamine2000(Invitrogen)。方法:采用密度梯度离心和细胞贴壁法与组织贴块法分离培养骨髓间质干细胞与血管平滑肌细胞。通过流式细胞仪检测,平滑肌细胞抗体免疫荧光染色,鉴定骨髓间质干细胞与血管平滑肌细胞。将骨髓间质干细胞转染绿色荧光蛋白,以未转染的骨髓间质干细胞为对照。骨髓间质干细胞与血管平滑肌细胞分条件培养:①取3代骨髓间质干细胞传至12孔培养板,培养液为低糖DMEM加骨髓间质干细胞条件培养液各半,胎牛血清浓度为0%、5%、7.5%。细胞固定后,应用平滑肌细胞抗体免疫荧光染色检测结果。②将半透膜小室置于6孔培养板每一孔内,使每孔隔成内外两室。将骨髓间质干细胞在外室培养,平滑肌细胞在内室培养。以单独培养的骨髓间质干细胞为对照,胎牛血清浓度为3%、7.5%。用平滑肌细胞抗体免疫荧光染色检测结果。③骨髓间质干细胞与平滑肌细胞混合培养:于骨髓间质干细胞转染绿色荧光蛋白后24h,向每孔内加入等量的平滑肌细胞混合培养,观察细胞形态变化。以单独培养的骨髓间质干细胞为对照。主要观察指标:①骨髓间充质干细胞流式细胞仪检测结果。②不同条件培养下平滑肌细胞抗体免疫荧光染色结果。结果:①免疫荧光染色示,平滑肌细胞抗SM-α-actin阳性,抗calponin阳性。骨髓间质干细胞抗SM-α-actin阳性,而抗calponin阴性。②流式细胞仪检测,骨髓间质干细胞不表达CD34,弱表达CD71,高表达CD90。③骨髓间质干细胞转染绿色荧光蛋白持续表达约2周～3周。④加入平滑肌细胞培养液或不同浓度的胎牛血清,骨髓间充质干细胞生长良好。骨髓间充质干细胞与平滑肌细胞分层培养中,骨髓间充质干细胞生长对胎牛血清呈浓度依赖性。骨髓间质干细胞与平滑肌细胞混合培养7d后免疫荧光染色,可见绿色荧光蛋白和抗SM-α-actin、Calponin的双标细胞存在。而加平滑肌细胞条件培养液与分层培养组中骨髓间质干细胞均不表达Calponin。结论:①平滑肌细胞培养液及细胞因子只能促进骨髓间充质干细胞生长,细胞胞浆颗粒增多,并不能诱导骨髓间充质干细胞分化为平滑肌细胞。②细胞间直接接触对诱导骨髓间质干细胞定向分化为平滑肌细胞起决定作用。

摘要：背景:骨髓间质干细胞体内、外均能分化为心肌细胞,但数量少且定向分化率较低。目的:探讨干细胞因子促进骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的作用。设计:开放性实验。单位:咸宁学院心血管疾病研究所,华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科。材料:实验于2003-10/2004-08在咸宁学院心血管疾病研究所实验中心完成。选取出生1～2d的SD新生大鼠20只,用于心肌细胞的培养。另选取清洁级成年SD大鼠25只,随机数字表法分为干细胞因子组、空白对照组,12只/组,剩余1只大鼠用于骨髓间充质干细胞的提取、培养及纯化。方法:①在共培养前用4,6-联脒-2-苯基吲哚标记骨髓间充质干细胞。干细胞因子组对大鼠进行体内动员,连续5d皮下注射重组鼠干细胞因子,20μg/(kg·d),然后提取其骨髓间充质干细胞于心肌细胞培养第3天进行共培养。空白对照组皮下注射相等剂量的生理盐水,未施加任何干预的骨髓间充质干细胞于心肌细胞培养第3天进行共培养。②用数码显微摄像及免疫荧光技术分别记录和检测MHCα/β、肌钙蛋白T的表达,测定4,6-联脒-2-苯基吲哚-骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的百分率。主要观察指标:①骨髓间充质干细胞生长情况。②检测4,6-联脒-2-苯基吲哚对骨髓间充质干细胞的核标记率。③拟做共培养的心肌细胞活力、纯度分析。④共培养后骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化情况。结果:①骨髓细胞悬液接种于塑料培养皿,细胞呈圆形散在分布于瓶底,24h换液后可见稀少的长梭形贴壁细胞,4d后梭形贴壁细胞开始增多,进入对数增长期,8～12d达到80%的融合。传代细胞增殖更加迅速,随着换液与传代,骨髓间充质干细胞逐渐得到纯化。②4,6-联脒-2-苯基吲哚对骨髓间充质干细胞的胞核标记率为100%。③心肌细胞体外培养第3天,搏动细胞的百分比为63%,搏动频率40～60次/min。免疫细胞化学技术检测肌钙蛋白T表达的阳性细胞百分比为75%。④在共培养的第2,3天,干细胞因子组4,6-联脒-2-苯基吲哚-骨髓间充质干细胞表达MHCα/β的阳性百分率均显著高于空白对照组(P<0.01);在共培养的第3,4,5天,干细胞因子组4,6-联脒-2-苯基吲哚-骨髓间充质干细胞表达肌钙蛋白T的阳性百分率亦均显著高于空白对照组(P<0.01)。结论:干细胞因子对骨髓间充质干细胞具有明显的促增殖分化作用。

摘要：背景:硝普钠作为血管扩张剂加入骨髓间充质干细胞培养过程中,对其分化潜能发生何种影响?目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞体内向造血细胞分化过程中加入硝普钠后的变化,并与单纯细胞移植的效果进行比较。设计:随机区组,对照观察。单位:广东医学院微生物免疫学教研室,广州医学院病理生理教研室。材料:实验于2006-08在广州医学院完成。选取清洁级出生七八周balb/c小鼠27只作为受体,随机数字表法分为3组:细胞移植组、硝普钠+细胞移植组、空白对照组,9只/组。另选取4周龄SD大鼠1只作为实验用骨髓间充质干细胞的供体来源。注射用硝普钠(50mg/支,北京双鹤现代医药技术有限责任公司,国药准字H11020907)。方法:①无菌条件下取出SD大鼠的股骨,进行骨髓间充质干细胞的分离培养。传至六七代作为供体细胞,消化离心,调整浓度为1×109L-1。细胞悬液中加入荧光素标记的抗体,流式细胞术检测表型。②取50mg/支的注射用硝普钠1支,加入2.5mL生理盐水混匀,从中取出1.0mL液体加入到100mL的生理盐水中,配成终浓度为200mg/L,配置后4h内使用。③各组小鼠细胞移植前均经5.0GyX射线全身照射4h,吸收剂量率为1.45Gy/min。照射完毕后,细胞移植组直接经尾静脉输注0.3mL骨髓间充质干细胞悬液(含1.5×106个细胞);硝普钠+细胞移植组先注射已配好的200mg/L硝普钠液体0.15mL,1min后立即输注骨髓间充质干细胞悬液0.3mL(含1.5×106个细胞);空白对照组输注等量无血清培养液。④移植后60d,各组存活小鼠眼眶外周取血,处死后常规制备骨髓及脾脏单细胞悬液,流式细胞术检测大鼠源性造血细胞CD11a与CD45的植入水平。主要观察指标:①骨髓间充质干细胞培养扩增情况。②不同组织大鼠源性造血细胞的植入水平检测。结果:作为受体的27只balb/c小鼠均存活至实验结束。①骨髓间充质干细胞培养扩增情况:培养3d后细胞贴壁,形态比较均一,长梭形,至第6天细胞90%融合,无重叠。传代后24h内细胞完全贴壁,长梭形,增殖生长迅速,3d即达到完全融合。②不同组织大鼠源性造血细胞的植入水平检测:细胞移植组、硝普钠+细胞移植组在外周血、骨髓、脾细胞悬液中均可检测到低表达的大鼠源性造血细胞CD11a与CD45,且硝普钠+细胞移植组明显强于细胞移植组(t=2.619,P<0.05);空白对照组CD11a与CD45呈阴性表达。结论:大鼠骨髓间充质干细胞具有向造血细胞分化的潜能,硝普钠可促进其分化。

摘要：STSE教育和思政教育在教育目标、教学方式和育人理念上有互通之处。基于STSE教育理念,在高中生物学教学中融入思政元素,是实现生物学课堂思政的重要路径之一,为实现“立德树人”教育根本任务奠定了坚实的基础。以“细胞的分化”为例,通过创设情境,结合图片、视频、活动、设置思考题等多种教学方式,将STSE教育理念运用于课堂教学中,同时深入挖掘思政元素,有效达成立德与求知的育人目的。

摘要：牛骨骼肌卫星细胞是一种多功能干细胞,能修复受损的骨骼肌。蛋白质二硫键异构酶PDIA3在肌肉再生过程中起关键作用。本试验旨在研究PDIA3对牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的影响。利用牛骨骼肌卫星细胞体外成肌分化模型,设计合成PDIA3的干扰模型,并构建PDIA3的过表达载体pcDNA3.1-PDIA3,检测其干扰和过表达效果。采用EdU染色法检测PDIA3表达量的改变对细胞增殖的影响,通过肌管形成状态检测对分化进程的影响,并采用RT-qPCR和Western Blot方法检测牛骨骼肌卫星细胞在RNA水平和蛋白水平上增殖标志因子和分化标志因子的变化,综合分析干扰和过表达PDIA3对牛骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响。结果显示:与对照组相比,干扰或过表达PDIA3后Pax7在mRNA和蛋白表达水平均无明显变化,EdU阳性细胞率无明显变化,表明PDIA3表达水平的改变对其增殖无明显影响。干扰PDIA3后,可发现肌管数量明显少于对照组,肌管直径明显变小,分化标志因子MyHC的RNA表达水平极显著降低,MyHC的蛋白表达水平显著降低;而过表达PDIA3后,可发现肌管数量明显多于对照组,肌管直径明显变大,且分化标志因子MyHC的RNA表达水平和蛋白水平均显著升高。以上结果表明PDIA3能正向调节牛骨骼肌卫星细胞的分化过程。本研究结果为PDIA3在肌肉发育的研究提供了一定的参考。

摘要：背景:肠道黏膜免疫屏障下降导致肠道条件致病菌移位,导致肠源性感染,影响患者机体及相应功能的恢复,但其下降机制尚不清楚。目的:对烧伤后肠黏膜免疫组织潘氏结内淋巴细胞(PPL)膜IgA转型以及肠固有层的淋巴细胞(LPL)体外增殖情况进行观察,为提高黏膜免疫屏障水平、预防肠源性感染、加快烧伤患者临床康复提供依据。设计:完全随机对照的纵向性研究。地点和对象:本实验在武装警察部队总医院烧伤科及中心实验室完成,对象为20只无特殊病原菌(SPF)小鼠。干预:随机分为正常对照组(10只)和烧伤组(10只)。烧伤组动物以20%全身体表面积(TBSA)Ⅲ度烧伤,于伤后3d与对照组同时活杀。主要观察指标:体内免疫组化染色观察肠固有层中IgA型浆细胞;免疫诱异部位(PP)中淋巴细胞表面IgA流式细胞计数;烧伤后效应部位肠固有层(LP)淋巴细胞体外增殖检测;肠组织中IL-6ELISA测定。结果:PP中淋巴细胞表面IgA阳性率烧伤后3d低于正常对照组;烧伤后LP中IgA浆细胞数明显少于伤前的水平;烧伤后动物的LP中淋巴细胞体外增殖明显下降;烧伤后3d肠组织中IL-6水平与正常对照组无显著差别。结论:烧伤抑制肠黏膜免疫组织淋巴细胞的增殖、分化,导致黏膜免疫屏障水平降低。

摘要：为了探究泛素结合酶2N(ubiquitin-conjugating enzyme 2N,UBE2N)对牛骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,MSCs)增殖和分化的影响,试验采用天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室冻存的牛MSCs建立成肌分化模型,设计UBE2N的siRNA(si-UBE2N)构建UBE2N的干扰模型,转染牛MSCs,并以转染si-NC作为对照;采用qRT-PCR和Western-blot方法分别检测转染后对UBE2N基因和蛋白表达的干扰效果;采用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测si-UBE2N对牛MSCs增殖的影响;在荧光倒置显微镜下观察分化期(DM期)牛MSCs的肌管形成状态,通过qRT-PCR和Western-blot方法分别检测MSCs中肌细胞生成素(MyoG)和肌球重链蛋白(MyHC)基因和蛋白表达水平,分析转染si-UBE2N对牛MSCs分化的影响。结果表明:与对照组相比,转染si-UBE2N后UBE2N基因和蛋白相对表达量极显著降低(P<0.01)。干扰UBE2N后经EdU染色发现,牛MSCs的增殖率显著降低(P<0.05)。转染si-UBE2N后,与对照组相比,分化期牛MSCs的分化标志因子MyoG基因相对表达量极显著升高(P<0.01),MyoG和MyHC蛋白相对表达量均极显著升高(P<0.01),光学显微镜下转染si-UBE2N的牛MSCs融合形成的肌管数量增多且直径呈增大趋势。说明干扰UBE2N可以抑制牛MSCs的增殖并促进其成肌分化。

摘要：目的观察高铁培养环境下小鼠前成骨样细胞MC3T3-E1增殖、分化指标的变化趋势,探讨铁离子对成骨细胞增殖、分化的影响。方法小鼠前成骨样细胞MC3T3-E1在37℃条件下体外培养,在10 mmol/Lβ-甘油磷酸和50μg/mL抗坏血酸的诱导分化的作用下,分化为成骨细胞,同时用不同浓度(50、100、200μmol/L)枸橼酸铁铵(FAC)干预,用MTT法检测细胞的增殖活性,RT-PCR法检测成骨细胞分化基因成骨相关转录因子(Runx2)、锌指结构转录因子(Osterix)、骨唾液酸蛋白(BSP)和骨钙素(OC)的表达,碱性磷酸酶(ALP)活性试剂盒检测细胞碱性磷酸酶活性。结果 MC3T3-E1细胞的增殖活性、成骨分化相关基因的表达以及ALP水平随FAC干预浓度的增加呈剂量依赖性降低(P<0.05)。结论高铁培养环境可明显抑制小鼠前成骨样细胞MC3T3-E1的增殖和分化。