摘要：根据常见支原体23S rRNA的保守区域基因序列,设计通用引物,应用SYBR Green Real Time PCR技术,研究建立了细胞培养物中支原体污染的快速检测方法。该方法能检测到污染细胞培养物的6种常见的支原体,敏感度达4.2×10-2pg/mL模式株的DNA。

摘要：目的快速全面检测感染细胞、疫苗等多种生物制品中的支原体.方法从多种支原体的16SrRNA核酸序列中选择了两段高度保守的核酸序列,作为支原体种属特异性引物,对标本进行检测.结果用这对种属特异性引物对已知阳性的50份标本进行检测,检测结果显示全部为阳性.应用于实践,检测了89份疫苗标本,阳性率为31.4%,而用常规培养法检测阳性率为12.3%.结论用该种属特异性引物检测支原体具有检测速度快、检测灵敏度高、特异性强等优点.

摘要：目的　快速全面检测感染人体、动物和细胞培养的多种常见支原体。方法　从 12种支原体的 16S与 2 3SrRNA核酸序列中选择了两段高度保守的核酸序列 ,作为支原体通用引物 ,一次PCR扩增就能检测出 12种支原体。结果　用这对通用引物检测了 41份临床标本 ,16份细胞培养物和 2 0只大白鼠 ,阳性率分别为 14 6 %、 43 7%和 2 0 0 %。结论　用通用引物检测支原体具有覆盖面广、检测种数多、不易发生漏检等优点。

摘要：采用蔗糖密度梯度离心,纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的细胞培养物,分别设计7,17,11,10和4对引物,构建了49个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段。结果表明:克隆CCV1,CCV2,CCV5和CCV7可特异诊断CCV,克隆FCV6,FCV7,FCV8和FCV9可特异诊断FCV,克隆FIPV2,FIPV7,FIPV8和FIPV9可特异诊断FIPV,克隆PRCV1,PRCV2和PRCV3可特异诊断PRCV,克隆TGEV3,TGEV4,TGEV5和TGEV6可特异诊断TGEV。将这些特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒PCR产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于这5种动物冠状病毒的检测与区分。

摘要：波兰研究人员对应用简化RT-nPCR诊断猪瘟(CSF)进行了研究。用TRIZOL从250μl含有病毒的细胞培养物上清中提取总RNA。将5μlRNA进行逆转录并用两种方法扩增:标准的三步法和改进并密闭的单管法。每种方法用两组引物。第一种引物根据瘟病毒基因组5′UTR,这种引物对所有瘟病毒都特异。第二种引物根据用于特异性检测CSFV株的E2蛋白编码区设计。