摘要：目的　评价体外培养牛眼虹膜色素上皮 (irispigmentepithelial,IPE)细胞的维生素A代谢功能。方法　采用酶辅助的显微分离法和培养新生牛眼IPE细胞 ,Trizol一步法提取总RNA。根据Genbank中维生素A结合蛋白 (retinol bindingprotein ,RBP)和细胞内视醛结合蛋白 (cellularretinldehyde bindingprotein ,CRALBP)的相关系列设计特异引物 ,对其mRNA的表达进行逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptionpolymerase chainreaction ,RT PCR)检测。结果　传 2代牛眼IPE细胞中提取的总RNA完整、无降解。RT PCR检测结果 :RBP及CRALBP的mRNA在培养的牛眼IPE细胞中均有表达。结论　牛眼IPE细胞具有与视网膜色素上皮细胞相似的维生素A转运和代谢功能。

摘要：简单介绍了剪切力对植物细胞产生的影响，并对剪切力对植物细胞的损伤机理、研究方法以及悬浮细胞培养生物反应器设计等方面进行了评述．

摘要：目的探讨长链多不饱和脂肪酸（LPFA）对体外培养的成年海马少突胶质前体细胞（OPC）的存活及突起生长影响。方法采用成组设计，使用从成年大鼠海马分离培养的两种神经祖细胞，分别经花生四烯酸（AA）、二十碳五烯酸（EPA）或二十二碳六烯酸（DHA）处理后，以乳酸脱氢酶（LDH）分析法测定细胞活性；再行免疫细胞荧光染色后做突起的定量测量。结果EPA、DHA和AA在高浓度（50μmol／L）时使海马硫酸软骨素蛋白聚糖（NG2）阳性OPC数量显著增加（P〈0．05），而EPA和DHA还可使OPC突起长度显著增长（P〈0．05）。结论ω-3LPFA即EPA和DHA对OPC的增生和突起形成有促进作用。

摘要：哺乳动物细胞表达系统是生产重组蛋白药物最常用的表达系统。但在无蛋白培养基中 ,哺乳动物细胞生长活力差 ,且容易发生细胞凋亡 ,因而难以大规模培养。为解决此问题 ,应用双顺反子表达载体在CHO dhfr- 细胞中同时表达Igf 1 Bcl 2或Bcl 2 CyclinE基因组合 ,通过Bcl 2使细胞获得抗凋亡能力 ;通过Igf 1或CyclinE促进细胞生长分裂 ,使细胞获得在无蛋白培养基中生长的能力。以上述基因组合转染CHO dhfr- 细胞 ,应用Westernblot从G4 18抗性克隆中分别筛选到Bcl 2高表达克隆若干个 ,对其中表达Bcl 2最高的CHO IB3和CHO BC1做进一步Westernblot和流式细胞分析 ,确认此两个细胞株分别高表达Igf 1 Bcl 2和Bcl 2 CyclinE基因组合。分别通过撤去血清和加入放线菌素D诱导细胞凋亡 ,并以流式细胞术和DNALadder法检测细胞凋亡 ,证明CHO IB3和CHO BC1均具有较强的抗细胞凋亡能力。MTT法证明两个细胞株在不含血清的IMDM培养基中的增殖活力显著高于CHO dhfr- 对照细胞。在细胞培养瓶中的连续培养实验表明 ,CHO IB3和CHO BC1在本实验室设计的IMEM无蛋白培养基中的生长速度和活细胞数显著高于CHO dhfr- 对照细胞。提示此两个细胞系能够在无血清培养基中抗凋亡高活力生长 ,适于作为生物工程宿主细胞。

摘要：背景:迄今为止临床上对较大范围骨缺损的修复仍未得到有效的解决。目的:探讨自体骨髓基质干细胞修复兔桡骨远端骨缺损的可行性。设计:以实验动物为研究对象,自身对照设计的探索性研究。单位:一所医科大学医院骨科。对象:实验于2002-10/2003-04在福建省医科所实验动物中心完成。健康新西兰大白兔12只,雌雄各半,体质量3.1～3.4kg。方法:取兔髂骨骨髓,体外分离培养扩增骨髓基质干细胞,与生物材料混合后植入体内修复兔桡骨远端骨缺损,应用X射线片、大体标本、组织切片观察修复效果。主要观察指标:主要结局:①大体标本及X射线片。②组织学观察。次要结局:骨髓基质干细胞分离与培养。结果:移植后12周,X射线片显示高密度新骨形成,大体标本上见白色皮质骨充满骨缺损处,组织切片显示骨缺损修复处骨小梁丰富,骨髓腔形成。结论:自体骨髓基质干细胞移植是修复兔桡骨远端骨缺损的理想方法。

摘要：目的 探讨采用灌注式生物反应器和可控微结构支架促进人胚成骨细胞在大体积支架内均匀扩增的可行性和优势.方法 设计灌注式生物反应器,制备大体积可控微结构磷酸三钙支架.将人胚成骨细胞与支架复合后分别行静态培养或灌注培养4、8、16 d.利用D-葡萄糖日消耗量、细胞活力（MTT法）检测,和组织学切片观察、扫描电子显微镜（SEM）观察及X射线能谱（EDX）分析,研究细胞在支架内的扩增、分布及功能情况.结果 葡萄糖日耗量随培养时间延长而升高（F=96.81,P＜0.05）,灌注培养组显著高于静态培养组（F=1848.91,P＜0.05）；细胞活力随培养时间延长而升高（F=125.67,P＜0.05）,灌注培养组显著高于静态培养组（F=1588.15,P＜0.05）.组织学切片及SEM观察均显示静态培养组细胞仅在支架边缘存活,而灌注培养组细胞在遍及支架内部的管道内均有良好增殖,并形成层状的新生组织.EDX分析证实细胞间的类球体基质为磷酸钙结节.结论 灌注培养结合可控微结构支架实现了人胚成骨细胞在大体积支架内的均匀扩增,可控微结构支架可作为深入研究载体内液流调配和细胞行为的有效工具,人胚成骨细胞可作为体外构建大体积骨移植物的种子细胞.

摘要：21世纪初,为解决生物医药过程工程研究所面临的微生物和哺乳动物细胞培养的实验通量、研发效率与成本方面的问题,更重要的是质量源于设计(QbD)导向的生物过程工程实验设计(DoE)的迫切需要,基于微、小型生物反应器的平行发酵(细胞培养)技术与产品得到了广泛应用。近年来微生物代谢工程与合成生物学的飞速发展,对高性能菌种库的高通量筛选与菌种表型过程表现的早期评价提出了更高实验通量的需求,这进一步拓展了不同培养体积的平行发酵培养装置在工业生物技术领域的应用。时至今日,可模拟工业培养条件并实施过程参数准确控制的微小型反应器的多联罐平行发酵装置、系统操作软件和数据处理的集成系统已成为生物过程工程研发的强大工具,它在生物医药创新、代谢工程和合成生物学等基础研究成果向工业化技术转化中起到重要的支撑作用。特别是在合成生物学领域中,基于“工业相似性”原则的平行发酵技术,可以解决培养板或摇瓶高通量菌种筛选无法表征克隆表型、在规模化培养中的表现受培养过程参数显著影响的痛点问题,实现过程工程导向的高通量、高效率的菌种筛选与评价。本文对高通量平行发酵与细胞培养技术的发展近况与其在合成生物学研究中的应用场景做了介绍,其中主要总结了平行发酵培养技术在高通量菌种筛选评价“三段论”中的价值、平行发酵培养如何支持菌种筛选的工业相似性原则的实施、平行发酵培养结合DoE实验策略实施高效的生物过程工程开发、使用平行发酵培养建立过程多变元批次模型的方法,以及平行发酵培养与建立生物培养过程缩小模型的关系等。

摘要：根据目前的微生物学知识体系,利用现有的微生物培养技术仅仅能够分离和培养部分微生物,自然环境中绝大多数微生物暂不能培养。本文总结归纳了部分微生物培养技术和培养策略,包括采取生境隔离、延长培养时间以及模拟自然环境条件等方法,尤其是培养基的营养水平对可培养微生物数量及种类产生重要影响。简要总结了寡营养微生物及其生态意义,以及营养物浓度影响微生物生长的机理。提出可根据微生物的生态环境条件及细胞生理特性,设计合理的培养条件和培养方法,以及采用多种分离培养方法联合,以期最终提高环境微生物的可培养性。

摘要：背景:Beagle犬性情温和、遗传背景明确,且牙周结构与人类相似,是研究牙周疾病的常见大型动物模型。目的:体外分离、培养、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞。设计、时间及地点:观察对比实验,于2006-09/2007-02在福建医科大学附属口腔医院中心实验室和解放军南京军区福州总院比较医学科完成。材料:Beagle犬5只,12月龄,体质量10～13kg,雄性。方法:基础麻醉下,切取Beagle犬游离龈。使用半消化+改良组织块法分离、培养、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞;手术及组织学观察确定组织块来源。以经成骨诱导的骨髓基质干细胞作为阳性对照组,试剂盒内标准品作为标准组,蒸馏水作为空白组。主要观察指标:免疫细胞化学及碱性磷酸酶检测明确细胞来源;四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖状况。结果:未经胰酶处理的组织块边缘锐利,组织致密;上皮细胞迅速增殖,呈鹅卵石样占满组织块周边。经胰酶处理过的组织块疏松,其周围上皮细胞少,成纤维样细胞游出迅速。波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性。结果证实所取组织块为Beagle犬游离龈;免疫细胞化学证实细胞源于中胚层。此成纤维样细胞基本不表达碱性磷酸酶,细胞增殖状况良好。结论:使用半消化+改良组织块法能够分离、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞。

摘要：背景:前期研究表明亚健康疲劳状态时血清对体外培养骨骼肌细胞的生存活力、细胞超微结构、细胞线粒体膜细胞色素C氧化酶活性和线粒体能量负荷具有显著影响。目的:进一步运用二维凝胶电泳和质谱技术观察亚健康疲劳状态血时清对骨骼肌细胞蛋白质表达谱的影响。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-03/05在南方医科大学中医证候研究实验室和天津生物芯片技术有限责任公司蛋白质组学实验室完成。材料:亚健康疲劳状态时血清和正常状态时血清为自制;人骨骼肌细胞为Sciencell公司产品。方法:体外培养骨骼肌细胞,随机分为正常组和亚健康组,分别用含30%正常血清和30%亚健康疲劳者血清的DMEM/F12细胞培养液培养72h,收集细胞,提取细胞总蛋白。主要观察指标:通过PDQuest7.3.0软件分析二维凝胶电泳图谱,比较各组间蛋白表达量,然后利用质谱制作差异蛋白点的肽谱,确定差异蛋白,通过生物信息学分析所得蛋白的功能。结果:在2组凝胶中有15个蛋白质点显著差异表达,亚健康组中表达升高的蛋白质点有10个,下降有5个,其主要涉及能量代谢,核苷酸合成,细胞修复,应激等相关蛋白。结论:亚健康疲劳状态时血清可影响人骨骼肌细胞相关蛋白的表达。