摘要：目的:研究细胞外基质磷酸化糖蛋白(MEPE)基因启动子在小鼠前成骨细胞中表达的调控机制。方法:利用软件分析小鼠的MEPE基因启动子,得到5条启动子候选序列后,设计引物进行不同长度MEPE基因启动子的构建,并分别将其转染小鼠前成骨细胞;然后利用双荧光素酶基因检测报告系统分析不同长度MEPE基因启动子在前成骨细胞中的转录活性,并同时观察BPM2对小鼠前骨细胞中不同长度MEPE基因启动子转录活性的影响及其时间效应。结果:成功构建了P-78^+66、P-140^+66、P-300^+66、P-500^+66、P-1 081^+66的MEPE基因启动子;分别转染小鼠前成骨细胞后,不同长度MEPE基因启动子的活性两两相比均有显著性差异(P<0.05),其中以P-500^+66的活性最强,推测-140^-500区域可能为MEPE转录表达的调控元件主要结合部位;BMP2作用于不同长度MEPE基因启动子后检测发现,BMP2在启动子-140^-500区域内可明显上调MEPE基因的转录活性(P<0.05)。结论:成功构建了MEPE基因启动子,并发现BMP2调控MEPE基因启动子的主要区域在-140^-500区域。

摘要：目的通过对2个遗传性牙本质发育不全Ⅱ型家系的细胞外基质磷酸化糖蛋白(matrixextracellularphosphoglycoprotein,MEPE)、骨涎蛋白(BonesialoproteinⅡ,IBSP)进行突变检测,寻找Ⅱ型乳光牙致病基因,为临床诊断、基因治疗提供分子基础。方法在MEPE、IBSP基因内设计引物,经PCR和DNA测序对基因编码序列及其临近内含子进行突变检测。结果在MEPE基因发现c.1027G>A的碱基变化,该变化导致MEPE出现V330I的氨基酸变化,在IBSP发现c.797G>A的碱基变化,该变化导致IBSP出现G219R的氨基酸变化。两种变化在家系内与表型不存在一一对应关系。结论排除了MEPE、IBSP为两个DGI-Ⅱ型家系致病基因的可能,进一步缩小了候选基因范围,为最终的基因治疗提供基础。