摘要：细胞穿透肽是近年来发现的具有穿透生物膜功能,并能介导大分子物质跨膜转导的一类小分子短肽。该肽段以其转导效率高,速度快,生物活性好,对细胞损害小等特点,成为药物导向治疗方法研究领域的热点。肿瘤靶向治疗的一个局限性是不能使药物有效地进入肿瘤细胞内,极大地降低了肿瘤靶向药物治疗的疗效。因此,如何使抗癌药物特定输送至肿瘤细胞群是当前亟需研究设计的课题,本文就特异性靶向穿膜肽在肿瘤靶向治疗方面的设计、应用作一综述。

摘要：为解决外源性物质通过有效传递由胞外运输至胞内的难题,具有运载和穿透细胞膜的短肽类物质近年来受到极大的关注。细胞穿透肽(cell-penetrating peptides, CPPs)是一种一般少于30个氨基酸残基,自身能够携带外源性物质进入细胞内的多肽类物质,它们能够以多种方式通过与细胞膜的相互作用穿透其屏障而作用于细胞内。本研究就CPPs的转导方式和转导机制进行详细的综述,对当前需解决的问题进行了说明,并阐述了穿透肽在预防和治疗的应用情况,为CPPs的设计和临床应用等方面提供理论参考。

摘要：细胞穿透肽(cell penetrating peptides,CPPs)也称为蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)是一类具有较强的穿膜活性的多肽,可以携带各种生物分子转运到细胞内,这一特点使其在药物转运系统及疾病治疗等领域有着广泛的研究,但是其穿膜转运机制尚不清楚。CPPs的穿膜过程可以分为3步,首先CPPs特殊的生化性质使其与细胞表面相互作用,形成空间优势,然后通过不同的方式进行跨膜转运,之后在CPPs在细胞内有不同的转运路径与定位。这种特性使其在免疫治疗方面有广阔的应用前景。本文就其运转过程的研究做一概括总结。随着研究不断深入,需要对传统的PTD进行改建、开发或者构建新的仿CPPs分子达到提高其运转效率、细胞内特异性定位及靶向不同种类细胞的目的,优化CPPs运转系统,为疫苗设计提供新的思路,并满足基础研究的需要。

摘要：目的设计通用甲型流感病毒DNA疫苗,并检测其在小鼠体内的免疫效力。方法合成含H1N1、H3N2、H9N2亚型甲型流感病毒M2(3M2e)胞外结构域的DNA序列,克隆至载体pVAX1中,构建真核表达质粒pVAX1-3M2e。将质粒pVAX1-3M2e分别与细胞穿透肽(cell penetrating peptides,CPPs)RVG9dR、Protamine、RVG9dR+Protamine多肽复合物(质量分数1∶1)按不同质量分数混合(1∶0.5、1∶1、1∶2、1∶4、1∶8),进行凝胶阻滞试验,以确定DNA与CPPs的正确结合;并通过细胞荧光试验在细胞水平(293T细胞)检测CPPs的递送效率。选择RVG9dR+Protamine递送质粒pVAX1-3M2e经肌内免疫雄性BALB/c小鼠(多肽复合物两种剂量:25μg pVAX1-3M2e+500μg多肽复合物、50μg pVAX1-3M2e+1000μg多肽复合物,每组8只小鼠),检测通用甲型流感病毒DNA疫苗对3种亚型流感病毒(H1N1、H3N2、H9N2)的交叉保护作用。结果DNA与RVG9dR、Protamine、RVG9dR+Protamine的最佳结合比分别为1∶2、1∶2、1∶1;RVG9dR+Protamine在1∶20的质量分数下对质粒pVAX1-3M2e具有超强的递送效率;50μg pVAX1-3M2e+1000μg多肽复合物对3种亚型流感病毒攻毒组小鼠的保护率均为100%。结论由RVG9dR+Protamine多肽复合物递送的质粒pVAX1-3M2e在小鼠中提供了针对3种亚型甲型流感病毒的交叉保护。

摘要：细胞穿透肽在体内缺乏细胞和组织专一性,使得这类载体的临床应用受到很多限制.成功设计各类疾病特异性靶向穿透肽的关键是充分认识这类多肽的跨膜分子机制.分子动力学模拟已逐渐成为开展该领域研究不可或缺的重要工具,与实验研究相互促进,对特异性靶向穿透肽的设计具有重要的指导作用.目前,利用分子动力学模拟主要开展的研究内容包括跨膜过程、跨膜自由能变化、多肽序列结构特征以及不同细胞膜组成如何影响其跨膜机制等.随着分子模型及增强采样方法的发展,单组模拟能够直接快速获取多肽跨膜自由能和构象变化.因此,分子动力学模拟对如何改造或设计细胞靶向穿透肽提供理论依据和指导,对改善药物跨膜能力、减少药物对其他健康组织的毒害等方面有着重要的科学和实际意义.

摘要：前期分离得到1株具有较强裂解能力的金黄色葡萄球菌噬菌体vB_SauM_JS25。测序后发现,噬菌体vB_SauM_JS25的裂解酶基因LysJS25与裂解酶LysK同源性最高,且可以广谱裂解金黄色葡萄球菌。为提高LysJS25细胞穿透效果,设计了穿透肽嵌合裂解酶LysJS25-R9,经原核表达和纯化,体外评价了LysJS25-R9裂解活性、细胞穿透活性及细胞内杀菌活性。结果表明:LysJS25-R9对葡萄球菌表现出较好的裂解能力,杀菌效率较原裂解酶提高2.1倍。激光共聚焦及细胞内杀菌活性实验证实LysJS25-R9进入MAC-T细胞内杀菌。该研究为穿透肽嵌合裂解酶的设计提供了一个良好的例证,同时有助于裂解酶细胞穿透性改造的设计。

摘要：大肠杆菌是常见致病菌,对多种抗生素已产生耐药性,因此,需要开发新型抗菌剂用于预防及治疗大肠杆菌感染.然而,大肠杆菌独特的细胞外膜结构可阻止多种抗菌剂进入菌体发挥作用.为提高抗菌剂的跨膜杀菌性能,选取T4噬菌体编码的T4溶菌酶,在其N端融合不同种类的细胞穿透肽,并对融合蛋白进行重组表达.细胞壁降解实验及碘化丙啶染色实验表明,融合了细胞穿透肽的T4溶菌酶保留了其催化活性,同时具有穿膜特性.杀菌实验证明,阳离子型细胞穿透肽Pc及两亲型细胞穿透肽Pa与T4溶菌酶的融合可极大提高酶对大肠杆菌的跨膜杀菌活性,且低浓度EDTA的辅助可进一步提高融合酶的杀菌效果.其中,对于初始菌浓为10^(6) CFU/mL的Top10菌株,联合使用0.35μg/mL的Pa-T4L融合酶与0.3 mM EDTA,可在室温条件下于3 h内杀灭94%的菌体.研究结果可为针对革兰氏阴性菌的抗菌剂设计提供新思路.

摘要：卵巢癌是威胁女性健康的常见恶性肿瘤之一。针对这一恶性肿瘤,本研究以细胞穿透肽为基础设计并合成了一种修饰有半菁染料荧光团(Cy5)的多肽药物。通过荧光成像、流式细胞分析及细胞毒性实验,证实了该多肽药物具有良好的抗卵巢癌细胞活性。本研究为开发新的抗肿瘤药提供了一种新的思路。