摘要：目的克隆粉防己Stephania tetrandra苄基异喹啉类生物碱生物合成途径中的细胞色素p450基因StCYp80G,进行生物信息学分析、表达载体构建和组织特异性表达分析。方法设计特异性引物,从粉防己cDNA中克隆得到StCYp80G编码蛋白的基因序列;利用生物信息学在线工具预测StCYp80G蛋白的结构域、理化性质和跨膜区等分子特征;利用MEGA11.0对氨基酸进行多序列比对和系统进化关系分析;通过同源重组法构建含有StCYp80G基因的重组质粒;采用实时荧光定量pCR技术分析该基因在粉防己不同组织中的相对表达量。结果StCYp80G基因开放阅读框长度为1458 bp,编码485个氨基酸,蛋白质相对分子质量为54770,预测其具有CYp450的保守结构域,含有跨膜结构域,可能定位在内质网上。氨基酸序列比对与系统进化树分析显示,StCYp80G与莲NnCYp80G、智利桂Ls CYp80G的序列具有同源性且一致度较高,推测StCYp80G与这2条序列具有相似的功能。StCYp80G基因在粉防己叶中表达量显著高于根中。质粒序列分析结果表明,重组质粒pESC-Leu-StCYp80G构建成功。结论StCYp80G基因的克隆、生物信息学分析、重组质粒的构建、以及组织表达特异性的研究结果,为进一步探究其在苄基异喹啉类生物碱生物合成途径中的功能奠定了基础。

摘要：目的:从中华大蟾蜍(Bufo gargarizans Cantor)肝脏组织中克隆细胞色素p450还原酶基因(BgCpR,GenBank登录号:OQ572435)进行生物信息学分析,并进行功能验证。方法:基于中华大蟾蜍转录组数据库挖掘BgCpR基因序列,使用SnapGene软件设计BgCpR基因两端特异性引物,以蟾蜍肝脏组织总RNA逆转录成的cDNA为模板进行pCR扩增。利用生物信息学分析BgCpR蛋白理化性质、空间结构并构建系统进化树;基于CRISpR/Cas9基因编辑系统将蟾蜍BgCpR基因表达框经同源重组整合进入酿酒酵母基因组,利用聚乙二醇法制备转化子微粒体,验证其对细胞色素C的还原功能。结果:克隆得到全长2043 bp的BgCpR基因cDNA,编码680个氨基酸,相对分子质量77852 Da。结构预测显示,BgCpR蛋白为非分泌蛋白;有一段跨膜螺旋区,位于蛋白的第24~46位氨基酸之间;亚细胞定位预测显示该蛋白定位于内质网上。采用体外酶活实验证明其具有传递电子功能。结论:本研究克隆得到中华大蟾蜍BgCpR基因,并构建了表达具有生物活性的BgCpR的酿酒酵母工程细胞,为进一步研究蟾蜍CYp450基因功能乃至解析蟾蜍二烯内酯类化合物的生物合成途径奠定了基础。

摘要：细胞色素p450(cytochrome p450 monooxygenases,CYp450)是一类超基因家族编码的含有血红素的氧化酶类,分布于各种需氧生物体内,广泛参与萜类、生物碱、黄酮、脂肪酸等的生物合成。本研究依据课题组前期测得白木香转录组数据库中一个CYp450单加氧酶基因的部分转录本序列设计引物,利用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-pCR,RT-pCR)和cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆该基因的全长cDNA序列;并对其组织表达及亚细胞定位进行了研究。结果发现,该基因全长cDNA序列为1920 bp,其中5′-非翻译区(untranslated region,UTR)为88 bp,3′-UTR为344 bp并具有21 bp的polyA尾,开放阅读框为1488 bp,编码495个氨基酸。序列比对发现该蛋白属于CYp450家族的CYp71D家族成员,命名为AsCYp71D1。组织表达分析的结果显示,AsCYp71D1基因主要在茎中表达。进一步洋葱表皮中亚细胞定位显示,AsCYp71D1编码的蛋白在细胞质、细胞核及细胞膜上都有表达。本研究为后续深入研究其在沉香倍半萜合成途径的功能奠定了基础。

摘要：近年来对CYp450基因型和表型相关性的研究越来越受到重视,从临床合理用药方面来说,人们希望利用基因型分析来了解个体中药物代谢酶的活性,期望既能提高药物治疗水平同时又降低不良反应的发生;从新药研发角度来说,研究药物的代谢酶CYp450的功能能够指导新药的设计、筛选及优化。该文通过查阅国内外相关文献综述了近年来关于CYp450遗传多态性研究的进展,分别介绍了CYp2C19、CYp2C9、CYp3A4、CYp2D6、CYp1A2和CYp2E1这6种主要的药物代谢酶。研究CYp450对新药设计、筛选、评价及优化有重要意义。

摘要：细胞色素p450作为生物标记物,在环境质量监测中具有重要应用。采用同源建模和分子动力学方法模拟了细胞色素p450在纯水体系和含致癌物氨基甲酸甲酯的污水体系中的响应情况,在分子水平上研究了细胞色素p450的蛋白结构在不同水环境中的变化。结果表明,相较于纯水体系,细胞色素p450的蛋白结构在污水体系中发生了明显变化,总表面积明显增大,二级结构盐桥、转向、折叠和螺旋所含残基数量发生了明显变化,氨基甲酸甲酯是影响细胞色素p450蛋白结构变化的主要因素;蛋白与水之间氢键数目的减少是细胞色素p450蛋白结构发生变化的主要原因;在污水体系中,细胞色素p450蛋白结构变化的主要区域是转向区域。该研究为新型标记物的设计以及细胞色素p450的应用提供了理论依据。

摘要：本研究通过体外生化实验研究细胞色素p450 3A7对维生素D3的羟化作用。根据GenBank报道的序列设计特异引物,扩增cyp3a7的编码区,将cyp3a7的编码区插入到pcDNATM3.1/myc-His(-) A的XhoⅠ/Bam HⅠ,通过测序检测序列的正确性。pcDNA-CYp3A7及pcDNA分别瞬时转染293T细胞,48 h后收集细胞,提取S9组分,用Bradford法测定蛋白质浓度。S9组分经12%SDS-pAGE凝胶电泳和Western blotting检测,用myc抗体作为一抗检测CYp3A7在293T细胞的表达水平。0.6 mg S9组分与1μmol/L维生素D3于37℃孵育30 min,用4倍体积的氯仿甲醇(体积比为3∶1)抽提,有机相在氮气流下吹干,残基用于HpLC分析。结果显示,重组表达CYp3A7的293T细胞的S9组分通过Western blotting检测到了特异的约60 kD的条带,对照样品未检测到特异条带的蛋白质。重组表达CYp3A7的293T细胞S9组分的孵育样品通过HpLC检测到了25-羟基维生素D3,对照样品未检测到25-羟基维生素D3。结果表明重组表达的CYp3A7羟化维生素D3生成25-羟基维生素D3。本研究为进一步探究还有哪些p450参与维生素D3在鸡体内的代谢,为阐明其代谢途径提供理论依据。

摘要：细胞色素p450(CYp)是一类含亚铁血红素的酶,不但能催化内源性底物的生物合成和代谢,而且对外源性化合物的代谢、激活以及降解毒性等起着重要作用.p450也是人体内最主要的药物代谢酶,能催化代谢约75%的临床药物.已有的p450酶晶体结构显示,绝大多数酶呈现闭合的构象,其催化活性位点位于血红素上方且深埋于蛋白质的中心,没有明显的通道用于配体进出活性中心.因此一个有趣而重要的问题是,配体如何进出酶的活性中心达到被氧化或发生抑制作用?近年来,关于p450酶配体通道的研究取得了显著进展.本文重点综述了通道研究的实验方法及6类p450酶可能存在的通道和作用机制,并对其未来的发展方向进行了展望.

摘要：目的探讨中国健康受试者细胞色素p450 3A4*18B(CYp3A4*18B)和细胞色素p450 3A5*3(CYp3A5*3)基因多态性对喹硫平药代动力学的影响。方法纳入34例中国健康受试者,单次给予喹硫平片25 mg,按照试验方案设计采集血样,检测喹硫平血药浓度,计算药代动力学参数,比较不同基因型对药代动力学参数的影响。结果 G6986A-AA组、G6986A-AG组和G6986A-GG组的Cmax分别为(35. 03±4. 41),(111. 06±33. 46)和(93. 66±41. 25)ng·mL^-1;AUC0-t分别为(135. 49±27. 65),(316. 97±119. 94)和(288. 22±133. 82) ng·mL^-1·h^-1;AUC0-∞分别为(144. 67±28. 18),(328. 57±122. 08),(300. 83±139. 27) ng·mL^-1·h^-1。G6986A-AG组、G6986A-GG组的上述指标分别与G6986A-AA组比较,差异均有统计学意义(均p <0. 05)。结论喹硫平在体内的药代动力学参数与CYp3A5*3基因多态性有相关性,根据基因型制定个体化给药方案有助于喹硫平合理使用。

摘要：综述了细胞色素p 450的种类和功能多样性,介绍了细胞色素p 450参与除草剂代谢及其作用机理.同时,简述了细胞色素p 45014DM与杀菌剂特异性作用的机制.报道了我们从抗除草剂的瑞士黑麦草中克隆CYp 81B 1同源基因及其功能的研究,以及柑橘绿霉菌细胞色素p 45014DM基因的克隆表达.为深入研究杀菌剂作用细胞色素p 45014DM的机理从而设计以p 45014DM为特异性靶标的新型农药、以及进一步研究细胞色素p 450酶系与除草剂代谢的关系打下了良好的基础.

摘要：利用本实验室已建立的体外肝微粒体模型,测定36个黄酮类单体化合物对人细胞色素p450 CYp1A2的抑制活性,并使用三维定量构效关系方法研究化合物的分子结构参数与其抑制活性之间的关系。CoMSIA模型证实黄酮类化合物的结构参数与其CYp1A2抑制活性存在明显的相关性(模型的相关系数R2为0.948),且有良好的预测能力(交叉验证相关系数q2为0.630),同时使用"留五法"证实模型的稳定性和可靠性。结果表明,相对于黄酮,α-萘黄酮的π-π共轭体系更有利于提高化合物的抑制活性。根据获得的模型的三维等势图,在α-萘黄酮基础上,6、3′、4′位引入带正电基团或是疏水基团,同时5位引入带负电基团,能有效改善化合物的CYp1A2抑制活性。