摘要：应用L16(43)正交试验设计对影响马尾松毛虫多功能氧化酶细胞色素p450测定的因素pMSF浓度、酶原稀释比和离心速度进行优化研究。结果表明供试的16组复配组合中,组合A1B1D1(选用0.2 mol/L pMSF浓度、酶原稀释比为2∶1,离心速度1为5 000 r/min)最优,按照该组合的条件进行马尾松毛虫MFO酶细胞色素p450测定,效果最佳。

摘要：目的 探讨细胞色素CYp1A1酶的基因多态与慢性苯中毒遗传易感性的关系。方法采用病例对照设计,以268名苯中毒工人为病例组,268名接触苯而无中毒表现的工人为对照组。应用TaqManpCR分析技术检测CYp1A1基因rs1048943,rs4646421,rs4646422和rs4646903共4个SNps位点。结果 CYp1A1基因rs1048943,rs4646421,rs4646422和rs46469034的不同基因型在病例组和对照组间的分布差异无统计学意义（p〉0.05）;单倍型分析显示,病例组中携带CYp1A1基因Hap5（rs4646421-T、rs4646422-G、rs1048943-A和rs4646903-C）单倍型个体的比例显著低于对照组（14.18%vs.19.40%）,携带此单倍型的个体慢性苯中毒的发病风险是携带Hap1（rs4646421-C、rs4646422-G、rs1048943-A和rs4646903-T）单倍型个体的0.708倍（OR=0.708,95%CI：0.503-0.998,p=0.048）。多因素Logistic回归分析提示,吸烟对慢性苯中毒发病风险具有一定的修饰作用（OR=0.19,95%CI：0.07-0.57,p=0.003）。结论 该研究人群携带CYp1A1基因Hap5单倍型个体可降低慢性苯中毒的发病风险,但CYp1A1基因多态与慢性苯中毒的遗传易感性的相关关系仍需进一步研究。

摘要：细胞色素p450是由多种同工酶组成的超家族,在内源性与外源性物质的I相代谢中占据主导地位。本文就细胞色素p450同工酶相关的探针底物、抑制剂、诱导剂及动物种属的特异性选择进行了综述,以期为细胞色素p450相关实验设计提供借鉴和参考。

摘要：目的　获取淡色库蚊CYp4家族新基因。　方法　根据CYp4氨基酸保守序列设计一对简并引物 ,采用RT pCR的方法 ,从淡色库蚊抗溴氰菊酯品系四龄幼虫总RNA中扩增出与设计相符的基因片段。利用T/A克隆方法 ,将获得的基因片段克隆入 pGEM Teasy载体 ,经pCR鉴定重组成功 ,测序并进行比对。　 结果　共克隆出 3 6个阳性克隆 ,将其中 9个随机挑取的阳性克隆测序及同源性分析 ,表明为CYp4家族中 9个新的cDNA序列 ,由GeneBank登录上网 ;经国际细胞色素p45 0命名委员会鉴定 ,属CYp4家族CYp4H、CYp4J亚家族。为进一步研究细胞色素p45 0的多样性及其与抗药性的关系打下基础。　结论　克隆 9个淡色库蚊基因部分序列 ,被鉴定属于CYp4家族CYp4H、CYp4J亚家族。

摘要：根据本室已获得的白纹伊蚊CYp6N亚家族新成员CYp6N3全长cDNA的 5′ 末端核苷酸序列 ,设计 2个反向特异引物 (GSp1和GSp2 ) ,利用 4种限制性内切酶DraⅠ、EcoRⅤ、pvuⅡ和StuⅠ分别消化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株高分子量基因组DNA ,消化产物与适配子连接产生 4种消化的DNA库 ,并分别以此为模板 ,进行基因步移。用特异引物GSp1与适配子引物Ap1进行第 1步pCR扩增 ,然后再以第 1步pCR产物为模板、用内部特异引物GSp2与内部适配子引物Ap2进行第 2次pCR扩增。将扩增产物进行T A克隆及测序。结果显示 :分别以DraⅠ、EcoRⅤ、pvuⅡ和StuⅠ消化的DNA库为模板而获得 4个长短不一的DNA序列 :80 6bp、 2 190bp、 3 0 76bp和 2 2 0 6bp ,它们均包括有CYp6N3全长cDNA5′ 非翻译区序列及氨基端开头 10个氨基酸的编码序列 ;在其ATG上游序列中均存在有若干个典型的TATA盒、Barbie盒和 或CCAAT盒、抗氧化剂反应元件或外源化合物反应元件。表明本实验已成功地获得了白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYp6N3基因 4个上游启动子区序列 ,并分析、讨论了它们在蚊虫中细胞色素p45

摘要：目的建立检测人细胞色素氧化酶2C19(CYp2C19)基因多态性的荧光定量pCR检测方法。方法用primer premier5.0和primer Express 3.0软件针对人CYp2C19基因681和636多态性位点分别设计1对引物和2条Taq Man-MGB探针,优化建立荧光pCR反应体系。评价该方法的准确性、灵敏度和重复性。用该方法检测300例临床样本,并用测序法进行验证。结果建立CYp2C19基因681和636位点荧光pCR检测方法,灵敏度为每个反应2 ng/g DNA。300例临床样本检测结果与测序法一致性为100%。结论建立的CYp2C19基因多态性荧光pCR检测法准确性较高、灵敏度和重复性较好,适于临床实验研究。

摘要：目的为深入了解和探索结核分枝杆菌CYp143A1基因(Rv1785c)功能,构建针对该基因的敲除菌株。方法采用噬菌体介导的基因敲除技术,设计并采用聚合酶链反应(pCR)扩增待敲除基因Rv1785c左、右臂,与p0004s质粒连接,构建同源重组质粒p0004s-△Rv1785c。再将p0004s-△Rv1785c质粒与phAE159质粒连接,构建phAE159-△Rv1785c噬菌粒。将获得的噬菌粒导入耻垢分枝杆菌mc^(2)155,获得整合有同源交换位点的重组噬菌体,经体外扩增收集高滴度噬菌体,转染结核分枝杆菌H37Rv,筛选阳性克隆并通过pCR法及基因测序验证敲除株构建结果。结果成功构建了包含Rv1785c上下游同源臂的等位交换质粒,并将该质粒与含有分枝杆菌温敏型噬菌体元件的穿梭质粒phAE159连接获得重组噬菌粒,最终经转染进入H37Rv。pCR及基因测序结果表明H37Rv CYp143A1基因敲除菌株构建成功。结论首次成功构建了结核分枝杆菌H37Rv CYp143A1基因敲除菌株,为后续CYp143A1基因功能研究提供了关键材料,奠定了重要的物质基础。

摘要：[目的]建立一步pCR法测定CYp2C19m2等位基因。[方法]根据等位基因特异扩增法（ASA）原理，设计两对分别对应于野生型基因和突变型基因的引物，经pCR扩增后进行基因分型。[结果]通过对60名随机健康受试者CYp2C19m2等位基因进行基因分型，发现其中49名为野生到纯合于，11名为CYp2C19m2杂合子，没有发现CYp2C19m2纯合子。[结论]ASA法可用于CYp2C19m2位基因分型，该法具有简便、快速、经济、可靠等优点。

摘要：目的 探讨西安地区食管癌与吸烟、CYp1A1、GSTM1基因型的关系。方法 采用病例－对照设计的分子流行病学研究方法，研究吸烟史、CYp1A1、GSTM1基因型与食管癌的关系。结果 吸烟为食管癌的危险因素（OR＝1.97,95%CI=1.12-3.48)。CYp1A1（I1e/Ile,Ile/Val,Val/Val)基因型在病例和对照中的分布存在差异（p＜0．05）。CYp1A1Val/Val基因型较具有CYp1A1 Ile/Ile的个体危险性增高（OR＝2.48,95%CI=1.12-5.54)。GSTM1缺失基因型在病例对照中分别为58．3％和43．6％，差异显著（OR＝1．81，95％CI＝1.03-3.18,p<0.05)。吸烟与CYp1A1 Val/Val基因型，吸烟与GSTM1缺失基因型之间存在相互作用。GSTM1基因缺失型的研究对象中，CYp1A1基因型在病例和对照中的分布差异显著（p＜0．05）。结论 CYp1A1 Val/Val基因型和GSTM1缺失基因型是西安地区食管癌的遗传易感性标志。吸烟与突变基因型有协同致癌作用；这种相互及其机理还有待于大样本、人群为基础的深入研究。

摘要：目的为了将人铁氧还蛋白(adrenodoxin,FDX)在293T细胞中表达,扩增FDX的ORF,将FDX的ORF插入到哺乳动物细胞表达载体pcDNA的NotI/KpnI,构建表达载体。方法以GeneBank报道的FDX的mRNA序列(NM_004109.5)为模板设计引物,在5'和3'分别引入限制性酶切位点NotI和KpnI,从HepG2的cDNA中扩增FDX的ORF,将FDX的pCR产物和空载体pcDNA3.1用NotI和KpnI双酶切4 h,酶切产物用DNA回收试剂盒回收。将FDX的pCR酶切产物分别连接到空载体NotI/KpnI,连接产物转化DH5α,培养过夜。挑单克隆,用pCR鉴定阳性克隆并测序。结果经1%琼脂糖凝胶电泳和EB染色,观察到一500 bp条带,阳性克隆的测序结果与GeneBank报道的核酸序列一致。结论应用常规分子克隆方法已成功构建了FDX的真核表达载体pcDNA-FDX。