摘要：目的建立一种实用、简便、准确的中药材龟甲DNA分子标记鉴定方法。方法采用酚-三氯甲烷抽提法和盐析法提取龟甲mtDNA。从Genbank数据库中下载乌龟及常见伪品源动物mtDNA细胞色素b基因序列,经序列比较分析,设计特异性引物,并使用该引物对正品及其伪品mtDNA进行扩增并测序。结果盐析法提取DNA的浓度高于酚-三氯甲烷抽提法,并且盐析法省时、经济。本实验所设计引物只能扩增正品龟甲mtDNA,测序结果与龟甲同源性100%。结论盐析法是一套适合从龟甲中提取高质量DNA的方法,本实验所设计的引物具有高度特异性,可用于龟甲类药材的鉴定。

摘要：目的:建立一种优于传统方法的、简单快速和灵敏度高的细胞种属鉴别及种属间细胞交叉污染的PCR检测方法。方法:以细胞色素b(cytochrome b)作为研究内容,设计并优化针对10种不同动物种属的引物,进行单种属引物和混合种属引物PCR反应的比较研究。结果:本文设计出可通过混合引物单PCR方式高效、敏感地检测10种常见动物种属细胞,并有效判断种属间细胞交叉污染的PCR检测方法。结论:本方法明显优于传统的细胞种属鉴定及种属间细胞交叉污染的方法,能显著提高对细胞资源库细胞、生产用细胞基质及治疗性细胞产品的质控能力。

摘要：参考鳗鲡等鱼类线粒体 DNA序列进行了中国花鲈线粒体 DNA细胞色素 b基因片断的引物设计、PCR扩增及其序列测定。得到中国花鲈的碱基序列为 4 10 bp,其 A、T、G、C含量分别为 10 1bp(2 4 .6 3% )、112 bp(2 7.32 % )、72 bp(17.56 % )、12 5bp(30 .4 9% ) ,与鳗鲡等其他鱼类相同基因片断序列碱基含量相似。

摘要：【目的】证实前期消减文库的研究结果,揭示紫外诱导条件下麦长管蚜的生态遗传机理。【方法】根据前人研究证明的细胞色素b基因和SOD基因的保守性区域,设计特异性引物,采用RT-PCR方法,扩增紫外线照射24,48h和对照麦长管蚜变异基因的部分序列,进行测序及核苷酸分析,并推导氨基酸序列。【结果】RT-PCR扩增分别得到长度420bp的细胞色素b基因cDNA片段和357bp的超氧化物歧化酶(SOD)基因cDNA片段。序列分析表明,细胞色素b基因编码140个氨基酸残基,30W紫外辐射48h处理的麦长管蚜细胞色素b基因突变位点为3个,其编码的氨基酸序列变异位点为2个;SOD基因编码119个氨基酸残基,且对照与处理的序列一致,未发现变异位点。【结论】紫外诱导条件下,麦长管蚜细胞色素b基因发生突变部分的具体位点已经找到,其突变方式为转换和颠换;SOD基因未发现变异位点。

摘要：以暗纹东方鲀(Takifugu fasciatus)肝脏的线粒体DNA为模板,按照红鳍东方豚(Takifugu rubripes)线粒体DNA序列设计合成特异引物进行PCR扩增,克隆并测定线粒体细胞色素b(Cyt b)及其侧翼tRNA基因的全序列,结果显示,克隆的暗纹东方Cyt b基因(1 137 bp)及其5′端上游的tRNAGlu基因和3′端下游的tRNAThr基因序列共1 327 bp。用DNA分析软件对暗纹东方与Genbank中10个目13种鱼类的Cyt b序列进行比较分析,显示暗纹东方与这些鱼类的Cyt b基因具有较高的同源性,与同属红鳍东方的同源性最高,为96.1%;与同目不同科的矛尾翻车(Masturus lanceolatus)和翻车(Mola mola)的同源性分别为74.1%和74.8%。tRNAGlu基因由69个碱基组成,tRNAThr基因由72个碱基组成,与红鳍东方相应tRNA的碱基组成完全相同。推定的这两种tRNA的二级结构都具有典型的三叶草型结构,各臂的碱基配对率高,稳定性好。根据暗纹东方与其他13种鱼的Cyt b基因序列同源性所建立的进化树比较,结果与传统的分类地位基本吻合。

摘要：对中华鳖、砂鳖和山瑞鳖线粒体DNA细胞色素b基因进行了引物设计、PCR扩增、序列测定和PCR-PFLP(Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism)分析。研究结果表明中华鳖、砂鳖与山瑞鳖线粒体DNACytb基因的序列全长相同,均为1140bp,其A、C、G、T含量相似,分别为378个(33.2%)、322个(28.2%)1、22个(10.7%)、318个(27.9%)、373个(32.7%)、324个(28.4%)、124个(10.9%)、319个(28.0%)、380个(33.3%)3、30个(28.9%)、127个(11.1%)、303个(26.7%)。同源性及序列差异率分析表明:中华鳖与砂鳖b基因序列的同源性为92.3%,中华鳖、山瑞鳖的为85.0%,砂鳖、山瑞鳖的为84.1%;中华鳖与砂鳖b基因核苷酸序列间的差异率为7.7%,中华鳖、山瑞鳖间的序列差异率为15.0%,砂鳖、山瑞鳖间的序列差异率为15.9%,而中华鳖、砂鳖、山瑞鳖各自个体间的序列差异率分别为2.37%、0.88%和0.18%,种间差异显著。用内切酶酶切分析其扩增产物,结果表明:用内切酶NdeⅠ可准确鉴别砂鳖,而用内切酶bamHⅠ则可准确鉴别山瑞鳖。内切酶NdeⅠ和bamHⅠ的联用分析,可使这三种鳖在分子水平都得到明确的鉴定。从三种鳖线粒体DNACytb基因核苷酸序列的显著差异和酶切位点的变化,可以进一步证明砂鳖是不同于中华鳖的鳖属一新种。

摘要：根据实验室测序的大豆线粒体基因组片段设计线粒体细胞色素b(Cytochrome,cob)基因特异引物,PCR扩增获得1 173 bp大豆(JLGM-1b)线粒体cob基因保守区序列。经序列分析,该基因编码391个氨基酸,A+T含量58.1%,G+C含量41.9%。Southern杂交表明cob基因在栽培大豆线粒体基因组中至少有2个拷贝。氨基酸序列及系统进化树分析表明,大豆与其它植物的cob基因具有较高的同源性,与双子叶作物同源性高达98%,其分类地位与传统系统分类地位相吻合,说明cob基因具有较高的保守性,可以作为分子系统分类学潜在的遗传分化标记。

摘要：利用cDNA差减杂交法从压力负荷型心肌肥厚模型形成初期 (3d)的大鼠心肌组织中分离出13个差异性基因片段 ,菌落原位杂交和斑点杂交显示它们在心肌肥厚模型组和对照组中存在表达差异 .经同源性分析后发现其中一个 93bp的cDNA片段与细胞色素b脱辅基蛋白的基因高度同源 ,以其序列设计基因特异性引物应用SMARTRACE (cDNA末端快速扩增法 )技术 ,分离出该基因的全长cDNA ;经克隆、测序后已被Genbank收录 (AF2 95 5 4 5 ) .Northern杂交证实该基因在绑扎腹主动脉 3d的大鼠心脏中高表达 。

摘要：用一对根据人线粒体细胞色素ｂ基因保守区序列设计的引物，以一枚恐龙蛋内ＤＮＡ为模板，在ＰＣＲ上扩增出大约１７０ｂｐ的基因片段。序列测定后经ＩＮＴＥＲＮＥＴ联网的ＢＬＡＳＴ数据库类似性检索，结果表明，该序列与人类线粒体细胞色素ｂ基因的序列完全相同（９６－１００％相似）。因此，可以肯定实验材料本身有严重污染。

摘要：目的西藏小型猪Cyt b氨基酸序列进行分析,研究其遗传分化及其与部分国内家猪的亲缘关系。方法提取西藏小型猪的全基因组DNA,设计引物扩增Cyt b基因,测序后将碱基序列转换为氨基酸序列并进行比对分析。结果Cyt b氨基酸序列分析表明,西藏小型猪与欧洲猪有三个位点氨基酸存在着差异,其中在295位点,大部分A型西藏小型猪与欧洲猪同为缬氨酸(V),而b型和少部分A型为异亮氨酸(I)。结论显示国内家猪与西藏小型猪有很近的亲缘关系。同时西藏小型猪群体内存在分化,mtDNA控制区的结构变化与功能基因的结构变化存在相关性。