摘要：描述采自浙江省苕溪水系■属(Zacco)鱼类一新种——苕溪■(Zacco tiaoxiensis ***.)。经形态比较,该新种与广泛分布于浙江各水系的棘颊■(***)形态较相似,但与之有着较明显的形态差异:侧线鳞41~44(vs.44~47),侧线上鳞8(vs.8~10),侧线下鳞3~4(vs.4~5),围尾柄鳞12~15(vs.14~17),性成熟的雄性个体腹鳍到达(vs.超过)肛门。新种与异域分布的中华■(***)和宽鳍■(***)的形态区别主要在侧线下鳞数目、头长与体长的比例等可比性状以及眼睛上缘颜色等。基于线粒体细胞色素b基因的遗传分析也支持苕溪■为一独立物种。

摘要：目的建立聚合酶链式反应(PCR)技术鉴别浙龟甲[来源为龟黄喉水龟Clemmys mutica(Cantor)的背甲及腹甲]真伪的方法。方法提取浙龟甲及其混淆品的基因组DNA,从NCbI网站上检索黄喉水龟及其混淆品的线粒体基因,进行分析比对,根据黄喉水龟细胞色素b(cytochrome b gene,Cytb)基因上的特异位点应用Oligo软件设计引物,对浙龟甲及其混淆品样本进行PCR扩增。结果所设计的引物能特异性扩增黄喉水龟,扩增片段长度为357 bp,能有效区分浙龟甲及其混淆品种。结论建立的PCR技术鉴别浙龟甲方法,具有特异性高、方法简便快捷、实用性较强的特点,在快速准确鉴别浙龟甲方面具有良好的应用前景。

摘要：在自然或人为因素下容易出现鳗苗种质混杂的现象,由于鳗鲡苗种在形态上十分相似,难以区分。为了保障鳗农的合法利益和提高养殖效益,急需建立一种能够在现场快速、高效使用的鳗鲡种质鉴定方法。本研究通过比对找出5种常见鳗鲡养殖种类:日本鳗鲡(Anguilla japonica)、美洲鳗鲡(***)、花鳗鲡(***)、太平洋双色鳗鲡(*** pacifica)、欧洲鳗鲡(***)线粒体细胞色素b(cytochrome b,cyt b)基因的差异序列,基于5个cyt b基因序列差异较大的片段,设计多对引物,分别经过PCR验证和条件优化,挑选出4对引物:aj S1/A1、r-a S1/A2、bp-m S5/A3和m-a S4/A4。将这4对引物组合在同一个反应体系中进行PCR扩增,进行条件优化,筛选出组合PCR的最优条件:退火温度为58oC;退火时间为45s;循环数为27。结果表明,通过扩增产物凝胶电泳中条带的有无及大小可快速准确的鉴定出五个鳗鲡种类。本研究建立的组合PCR方法在3小时内可完成整个种类鉴定过程,同时可使用便携式小型仪器完成操作,可满足现场快速、高效鉴定的要求。此外,通过MEGA5.0软件构建5种鳗鲡线粒体cyt b基因序列NJ进化树,发现花鳗鲡和太平洋双色鳗鲡先聚为一支,再与日本鳗鲡聚在一起,而欧洲鳗鲡和美洲鳗鲡聚在一起,进化树图显示的遗传距离和它们的地理分布的远近相似。

摘要：目的探讨复合聚合酶链反应（PCR）技术鉴别中药材龟甲真伪的分子标记特征。方法采用盐析法提取龟甲正品及其伪品线粒体DNA（MitochondrialDNA，mtDNA）。从Genbank数据库中下载乌龟mtDNA细胞色素b（cytochromeb，Cytb）和细胞色素C氧化酶亚基I（cytochromeoxidasesubunit I，CoD的基因序列，用Premier5．0设计2对特异性引物，建立复合PCR技术对龟甲正品及其伪品进行扩增并测序。结果盐析法提取的龟甲mtDNA的大小均为16．6×10。bp，正品龟甲经复合PCR扩增在300～500bp间有2条明亮分明的条带，而伪品龟甲只出现1条或无条带。结论复合PCR技术鉴别龟甲真伪具有高度特异性、简便、准确、快捷、实用性强，对龟甲类药材的鉴定有很高的应用价值及准确性。，

摘要：目的建立鹿血聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)种间及种内鉴定方法并确定检测限度。方法根据梅花鹿、马鹿、猪、牛、羊、鸭的细胞色素b(cytb)基因序列的差异,设计并选取DNA限制性内切酶Eco RV和Mse I分别作为区分鹿和非鹿,梅花鹿和马鹿的工具。采用试剂盒法提取样品基因组DNA,经PCR扩增cytb片段后,分别进行RFLP分析;在梅花鹿血基因组DNA中分别加入不同比例非鹿类动物血基因组DNA或马鹿血基因组DNA,PCR产物用限制性内切酶Eco RV和Mse I进行切割,确定检测限。结果经PCR-RFLP分析,Eco RV切割鹿和非鹿cytb片段,前者得到2个片段(287、185 bp),后者未被切割;Mse I切割梅花鹿与马鹿cytb片段,前者被切成2个片段(281、191 bp),后者被切成3个片段(281、126、65 bp),191 bp的片段作为梅花鹿血的特征片段,126 bp的片段作为马鹿血的特征片段。梅花鹿血中加入非鹿类动物血基因组DNA的检测限为3%,加入马鹿血基因组DNA的检测限为6%。结论建立的PCR-RFLP方法可以快速鉴定鹿血及相关伪品或掺伪品,也可区分鉴定梅花鹿源的鹿血或马鹿源的鹿血,为鹿血相关产品的质量控制提供了新的技术手段。

摘要：通过设计雀形目鸟类线粒体细胞色素b的通用引物并对其PCR反应体系进行优化,确定了雀形目38种鸟由基因组DNA扩增线粒体细胞色素b基因全序列的最佳反应条件.在10μl最佳反应体系中,dNTP浓度为100μM,引物浓度100nM,退火温度范围为51～55℃,模板量在50～150 ng之间,扩增反应效果最好.在上述最佳反应体系和条件下获得的目的条带清晰、明亮,可应用于雀形目鸟类分子系统学研究.

摘要：目的建立一种用于种属鉴定的线粒体DNA16SrRNA基因和细胞色素b基因荧光标记复合扩增检测体系。方法利用引物设计软件Primer5.0对mtDNA序列的16SrRNA基因和细胞色素b基因各设计一对引物,建立复合扩增体系,分别扩增人和牛、猪、狗、鸡、草鱼5种常见动物,用310遗传分析仪对产物进行分析。结果人和5种动物DNA扩增产物均出现两个峰,Cytb通用引物的扩增产物为人与动物的共有峰,为358bp;16SrRNA基因的扩增产物为人与动物间存在位置差异的特异峰,位于231～256bp之间。结论该复合扩增体系可以明确区分人和5种动物样本,可用于种属鉴定。

摘要：利用PCR反应延伸过程中,3′端碱基不配对,PCR反应不能启动的等位基因特异性PCR分析法(AS-PCR)原理,采用生物软件DNASTAR分析牛、羊线粒体细胞色素b(Cytb)基因,以牛、羊碱基差异较大位点作为上游引物的3′端来设计引物,进行PCR扩增反应,分析牛羊异种克隆胚中线粒体的变化情况。结果表明,AS-PCR法是一种快速、有效鉴定异种重构胚中线粒体异质性的方法。

摘要：为确定实验室常用细胞来源的可靠性,以及培养过程中是否存在不同种属间细胞的交叉污染现象,本研究针对不同物种的细胞色素b基因进行引物设计并优化,建立PCR扩增体系,对实验室常用的7种不同种属来源的细胞(MDbK、MDCK、bHK21、ST、SP20、293、VERO)进行细胞种属鉴定。试验结果表明:该PCR检测方法特异性较好,操作简便,最低可检测到0.01 ng/μL的DNA含量。结论:本研究所建立的方法能够很好的对7种不同种属的细胞进行鉴别,对细胞培养过程中的质量把控具有重要的指导意义。

摘要：目的:分析鹿茸线粒体细胞色素b(Cytb)和细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因特异性,建立双重PCR技术鉴别鹿茸真伪的分子指纹特征。方法:利用碱变性法提取梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸和新西兰鹿茸的基因组DNA,应用引物设计软件Premier 5.0针对Cytb和COⅠ分别设计特异性引物(分别为Cytb 1、2和COⅠ1、2、3),采用单一及双重引物分别进行PCR扩增,筛选特异性强的引物,确定最佳PCR反应条件。结果:采用碱变性法提取的鹿茸基因组DNA片段长度为23 000bp,DNA纯度即A(260)/A(280)为1.80±0.02;应用单一引物进行PCR扩增无法鉴定鹿茸的真伪,而引物Cytb 1和COⅠ1组合后,解链温度为58℃时,梅花鹿茸(吉林、安徽)、马鹿茸均能扩增出395和525bp大小的2个片段,而驯鹿茸和新西兰鹿茸均未能扩增出相应片段;采用该提取方法及最优化的PCR反应条件,对市售样品进行检测,检测结果与实际情况完全一致。结论:双重PCR技术可从分子水平鉴别鹿茸的真伪,该方法特异性高、实用性强,且简便快捷,在鹿茸真伪鉴别方面具有较高的应用价值。