摘要：目的:研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)反义寡核苷酸对体外巨噬细胞表达MIF的影响。方法:设计特异性MIF寡核苷酸,其序列为:反义:5’-TACGGATACAAGTAGCAC-3’;正义:5’-ATGCCTATGTTCATCGTG-3’;错义:5’-CTCTCAGACTCGATCTGT-3’。通过脂质体包裹后将其分别转染至小鼠巨噬细胞,观察MIF反义寡核苷酸对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞表达MIF的影响。结果:LPS刺激后6h,巨噬细胞表达MIFmRNA和合成分泌的MIF量增加,9-12h达高峰。MIF反义寡核苷酸转染巨噬细胞后,可见LPS刺激的MIFmRNA和MIF的表达均明显少于LPS刺激组、LPS刺激+转染正义寡核苷酸组和LPS刺激+转染错义寡核苷酸组(P<0.05),与非LPS刺激组无显著差异。结论:LPS可刺激小鼠巨噬细胞合成和表达MIF。MIF反义寡核苷酸可显著抑制巨噬细胞MIF的过度表达。

摘要：1生物合成新技术概述合成生物学将工程设计原则合理地应用于分子生物学、新的基因装置设计,在疾病的诊断和治疗的领域发挥作用[1],如,创建全细胞生物传感器[2],基因修饰益生菌[3]以及细胞生物分子加工厂。源自基因工程的生产细胞系基础上,生物合成已成为药品生产[4]、蛋白质疗法[5]、燃料及其他产品[6]的主流技术。

摘要：目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)各种转录本亚型在成骨细胞分化中的作用。方法应用特殊设计的引物,逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测VEGFmRNA在人类成骨细胞样细胞SaOS2和MG63和胎鼠颅盖骨细胞(FRC)在第0、5、9、14天不同分化阶段中的选择性剪接表达。结果人类成骨细胞样细胞SaOS2和MG63表达所有的VEGFmRNA亚型,其中以VEGF121和VEGF165表达最强。鼠FRC细胞表达3种VEGFmRNA亚型(即VEGF120,VEGF144和VEGF164),其中以VEGF120和VEGF164表达最强。伴随着FRC细胞的增殖、分化和矿化,这些亚型的表达逐渐增强,并且在结节矿化后达到最高水平。结论小分子的VEGF121/120和VEGF165/164在成骨细胞的分化过程中表达增强,可能起重要的血管源性调节作用。

摘要：培养鹌鹑输卵管上皮细胞和鹌鹑胚胎成纤维细胞作为检测平台,将重组后的人血清白蛋白表达载体用脂质体包埋法转染以上两种细胞,通过荧光显微镜观察到报告基因绿色荧光蛋白的表达,结果表明构建的表达载体在成纤维细胞上未见表达;而原代输卵管上皮细胞上有表达。取转染细胞的基因组DNA,设计特异性的检测引物,用PCR筛选法检测了报告基因表达的阳性细胞克隆,SDS-PAGE银染色法确定鹌鹑输卵管上皮细胞分泌蛋白的分子量,结果显示在转染的鹌鹑输卵管上皮细胞培养上清中含有分子量约为68kDa的HSA。表明构建的表达载体是有效的,而且表达构件已经初步整合到阳性鹌鹑输卵管上皮细胞的染色体中。

摘要：目的:构建pSecTag opg真核分泌表达穿梭载体,培养经opg基因修饰的Cos 7细胞系并检测其表达能力,为基因工程技术治疗牙周病提供物质基础。方法:提取293细胞的总mRNA,设计和合成特异性引物,进行逆转录-聚合酶链反应(RT PCR),扩增出具有抑制破骨细胞功能的opg基因cDNA,并将其重组到载体中测序;用脂质体法将目的基因转染至Cos 7细胞,应用免疫组织化学和Westernblot方法证实转染的细胞表达OPG。结果:重组质粒pSecTag2 /B opg经PCR、HindIII单酶酶切及EcoRI和BamHI双酶酶切,电泳显示均能切下与预期大小相符的片段,经测序证实此基因与GenBank中[gi: 33878056]提供的序列完全一致;经免疫组织化学和Westernblot方法检测,在转染opg基因的Cos 7细胞中有OPG表达。结论:成功构建了pSecTag2 /B opg分泌表达穿梭载体,并培养出高分泌表达OPG的Cos 7细胞系。

摘要：从奶牛的全血中提取基因组DNA,参照GenBank已有序列,通过Prim er5.0和Vector 7.0辅助设计一对引物,克隆了牛乳腺核基质附着区(BMR s)。利用生物学软件对其进行初步分析后,TA克隆于pMD 18-T vector上。上下游引物5′端分别引入Kpn2Ⅰ和XhoⅠ酶切位点,将所得的BMR s克隆到pEGFP-C1的报告基因下游,构建成表达载体pBE,脂质体法转染牛耳成纤维细胞。以转染pEGFP-C1的牛耳成纤维细胞作为对照,发现所克隆的BMR s功能明显,在消除位置效应、增强报告基因表达方面具有一定的作用。

摘要：20l1年3月7日，以色列Compugen公司宣布，利用专有的蛋白质相互作用阻断剂（***，PPIb10Ckers）平台开发出新型多肽CGEN．25068，在动物实验上取得了好成绩。CGEN．25068在免疫反应过剩的特定疾病中发挥着重要作用，被设计来阻止某些蛋白质之间的相互作用。阻止嗜中性白细胞（neutrophil）和单球细胞表达的靶标蛋白与其他蛋白质相互作用的CGEN一25068，