摘要：目的：确定丙型副伤寒沙门氏菌（Salmonella paratyphi C,SPC）噬菌体SPC-P1在其他血清型中是否存在,并确定其在宿主菌基因组中的整合位点。方法：以丙型副伤寒沙门氏菌RKS4594基因组中SPC-P1为模板,设计6对引物,分别在11株伤寒沙门氏菌、11株甲型副伤寒沙门氏菌、12株乙型副伤寒沙门氏菌和23株丙型副伤寒沙门氏菌中进行SPC-P1片段的扩增。同时下载美国国立生物技术信息中心（National Center for Biotechnology Information,NCBI）基因组数据库中全基因组序列完成的100株20个血清型的沙门氏菌全基因组序列,通过Mauve 2.3.1软件进行比对,以确定SPC-P1在各个血清型中的分布。根据SPC-P1在RKS4594基因组中的整合位点,设计引物,对10株SPC-P1阳性的丙型副伤寒沙门氏菌进行扩增,并对产物测序,根据测序结果分析SPC-P1整合情况。结果：SPC-P1广泛存在于丙型副伤寒沙门氏菌基因组中,14株能够扩增到所有的6个片段,2株扩增到3~5个片段,所有扩增阳性的片段与预期大小吻合。在伤寒沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌和乙型副伤寒沙门氏菌中,6个片段均阴性或仅存在1~2个片段,并且片段均比预期小。Mauve比对结果显示,仅在与丙型副伤寒沙门氏菌进化关系较近的猪霍乱沙门氏菌中存在接近完整SPC-P1的片段,但序列相似性存在差异。SPC-P1在丙型副伤寒沙门氏菌基因组中的整合位点是固定的,位于两个相邻基因pgt E和yfd C之间。结论：SPC-P1是丙型副伤寒沙门氏菌独特的致病因子,其存在可能使得丙型副伤寒沙门氏菌的宿主范围、致病性大小等功能方面有别于其他沙门氏菌。

摘要：目的构建展示角质细胞生长因子（KGF）噬菌体活性肽，检测其促表皮细胞增殖的作用。方法选择4个KGF序列，设计引物；用反转录．PCR法获得3个KGF序列（Pl、P2和P4），直接合成1个KGF序列（P3）；将KGF序列亚克隆至噬菌粒pComb3中；用噬菌体展示技术，将KGF基因片段展示于噬菌体表面；用四甲基偶氮唑盐（MTF）法检测KGF噬菌体活性肽促表皮细胞增殖的作用，测定其在570nm的吸光度（A）值，用免疫荧光法检测其细胞亲和力。结果获得4种KGF基因，构建在噬菌粒pComb3中；通过噬菌体展示技术将其表达于噬菌体的表面。MTr检测的吸光度（A）值结果显示阴性对照组（0．293±0．017）与KGF对照组（0．520±0．043）及4种KGF噬菌体活性肽组（P1～4）（0．469±0．057、0．441±0．048、0．438±0．035、0．446±0．037）间差异均有统计学意义（均P〈0．01），免疫荧光检测结果显示KGF和4种KGF噬菌体活性肽与表皮细胞具有较好的亲和力。结论构建展示的KGF噬菌体活性肽能够显著促进表皮细胞增殖。

摘要：目的:克隆表达铜绿假单胞菌噬菌体PaP3多糖解聚酶基因并检测其活性.方法:应用PCR技术从铜绿假单胞菌噬菌体PaP3基因组中扩增多糖解聚酶基因,将其克隆于原核表达载体pQE-31中,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109,IPTG诱导表达;采用Ni-NTA柱亲和层析分离纯化目的蛋白;提取铜绿假单胞菌生物膜胞外多糖,观察目的蛋白对胞外多糖的降解活性.结果:采用PCR技术成功扩增了铜绿假单胞菌噬菌体PaP3多糖解聚酶基因,所构建的重组质粒经酶切及测序鉴定与设计序列一致;转化***109后,IPTG诱导目的蛋白表达率约为25%;SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约为20.4×103,与理论预期值一致;破菌后电泳证实目的蛋白主要在上清中以可溶形式表达.经Ni-NTA柱亲和层析后蛋白纯度大于95%.初步活性检测结果表明重组PaP3多糖解聚酶蛋白对生物膜胞外多糖具有一定的降解作用.结论:重组噬菌体PaP3多糖解聚酶在体外可以特异性的降解铜绿假单胞菌的胞外多糖,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.

摘要：目的　 观察噬菌体对鲍曼不动杆菌引起的小鼠肠源性脓毒症的治疗效果。 方法 采用双层琼脂法从环境中分离鲍曼不动杆菌噬菌体。通过腹腔注射氨苄青霉素和环磷酰胺的方法，同时经口感染耐氨苄青霉素鲍曼不动杆菌，建立小鼠肠源性脓毒症模型。在细菌感染前1 d、感染结束后2 d，以及感染结束后6 d给予噬菌体治疗，观察小鼠的存活情况。另取未给予噬菌体治疗小鼠作为对照。各组分别设6只小鼠。采用成组设计的两样本均数 t 检验比较噬菌体治疗组和对照组小鼠外周血和肝脏内炎症因子水平，以及肝脏和脾脏内的细菌数量。 结果 鲍曼不动杆菌引起肠源性脓毒症小鼠全部死亡的最小致死量为1×10 7 CFU/mL。在感染前、结束后2 d和6 d给予噬菌体治疗，分别有2，4，3只小鼠存活，对照组全部死亡。噬菌体治疗组小鼠外周血白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏子因子(TNF)-α和IL-6水平分别为(105±6)ng/L，(105±11)ng/L和(104±12)ng/L，明显低于对照组( t ＝5.04，9.05和9.33， P 0.05)；噬菌体治疗组小鼠肝脏和脾脏内细菌数量分别为(2.9±1.3)×10 3 CFU/g和(8.3±7.6)×10 2 CFU/g，明显低于对照组( t ＝9.16和8.96， P <0.01)。 结论 噬菌体治疗鲍曼不动杆菌引起的肠源性脓毒症确切有效。