摘要：传染性法氏囊病病毒(IBDV)是引起世界养禽业重大经济损失的重要病原之一。至今国外已从分子水平揭示了20多株病毒的全部或部分结构蛋白基因,并进一步揭示了 IBDV 抗原变异是由 VP2基因存在一个高度可变区引起的,不同毒株 VP3基因也有一定差异。单抗ELISA 和血清中和试验表明,中国 IBDV 有多种血清亚型,且与国外毒株存在一定差异。使用现有的疫苗有一定的盲目性。因此了解中国地方株分子流行病学、掌握其抗原变异监测方法及筛选疫苗用病毒编码基因十分必要。PCR 已被广泛地应用于 IBD 基因诊断和克隆表达。但由于中国 IBDV 地方株结构蛋白基因序列至今尚无公开报道。

摘要：根据GenBank中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株(ATCC VR-2332)基因序列分别设计合成了针对PRRSV ORF3、ORF5和ORF6基因的引物,利用RT-PCR从广东省送检的5份病料中均分别扩增得到了大小约787、630和550 bp的片段,将扩增的cDNA片段克隆入pMD 18-T载体并测序.应用DNAStar软件分析,并与国内外已发表毒株和疫苗株(RespPRRS/Repro、RespPRRS MLV)、LV4.2.1株的序列进行比较.结果显示,这5个毒株与CH-1a、HB-1(sh)、BJ-4、ATCC VR-2332、疫苗株等毒株ORF3、ORF5、ORF6的核苷酸同源性分别为87.2%～98.7%、85.4%～96.8%、91.8%～98.9%,推导的氨基酸同源性分别为84.6%～97.6%、84.5%～95.5%、94.8%～98.9%;而与LV4.2.1株的核苷酸同源性分别为56.1%～58.3%、54.4%～57.0%、62.2%～64.4%,推导的氨基酸同源性分别为53.9%～56.7%、54.0%～57.0%、78.0%～80.3%.基因系统发育树表明,广东省流行的PRRSV与HB-1(sh)株的亲缘关系比较近.

摘要：根据已发表的鹅细小病毒 ( GPV)核苷酸序列设计并合成了 1对引物 ,对 GPV主要结构蛋白 VP2和VP3基因进行扩增。所获得的 PCR产物与预期片段大小相符 ,约 1 .8kb。将该片段直接与真核表达 p CR3.1T载体连接 ,转化入感受态大肠杆菌 TOP1 0 F′中增殖。在对所提质粒进行快速鉴定、PCR扩增以及 Bam H 酶切线性化初步鉴定的基础上 ,经限制性内切酶 Sca 和 Eco R 分别酶切进行正反向鉴定 ,获得了 3个正向插入的克隆 ( PVPA)和 2个反向插入的克隆 ( PVPB)。将正向插入的克隆 PVPA1与原核表达载体 p ET-2 8b( + )分别用 Bam H 和 Xho 双酶切后 ,回收目的片段进行定向连接 ,并转化入感受态大肠杆菌 DH5α中。对所获得的重组质粒分别经 Sca 、Eco R 、Bam H / Xho 酶切 ,证实含有目的基因 ,且基因插入方向正确 ,成功地构建了含有 GPV主要结构蛋白基因的原核表达载体 。

摘要：根据已报道的传染性支气管炎病毒S基因序列设计了1对引物,利用从传染性支气管炎病毒TY1株中提取的RNA,经PCR扩增获得了300 bp的产物;序列测定与分析表明,所扩增产物是传染性支气管炎病毒结构蛋白基因的部分片段。将扩增片段插入pET32a构建表达载体,并于大肠埃希氏菌BL21中进行表达;结果表明,该片段在大肠埃希氏菌中成功表达,产物为30 ku、以可溶性形式存在的蛋白。Western-blotting分析表明,该蛋白可与传染性支气管炎病毒TY1株阳性血清发生反应。

摘要：根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)VR-2332毒株基因序列设计合成了6对引物,应用RT-PCR方法对PRRSVGS株部分片段进行基因的扩增、克隆和测序,将测序结果应用Blast和DNAStar软件进行拼接,并与国内外分离毒株进行核苷酸以及推导氨基酸序列同源性比较.结果发现PRRSVGS毒株结构蛋白基因全长3819bp,包括ORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7共6个阅读框,分别编码GP2、GP3、GP4、GP5、M和N蛋白;与BJ-4、CH-1a、HB-2(sh)/2002和VR-2332美洲株等核苷酸的同源性在87.9%～97.1%,推导的氨基酸同源性在88.3%～97.1%;而与LV和Euro毒株的同源性差异显著,核苷酸同源性在56.0%～70.0%,氨基酸同源性在54.9%～77.6%.构建的系统发育树证明该毒株在基因型上属于美洲型.

摘要：根据GenBank中登录的美洲型PRRSV JXA1株基因组序列设计合成了4对引物,应用RT-PCR技术对PRRSV JX0708株结构蛋白基因进行扩增、克隆和测序,将测序结果应用Blast和DNAStar软件进行分析,并与国内外分离株进行核苷酸序列以及推导的氨基酸序列同源性比较.结果表明:PRRSV JX0708株结构蛋白基因长约3 186bp,分为ORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7共6个基因区;与国内分离的高致病性PRRSV美洲型毒株HuN、GD、JXA1、LN和普通毒株CH-1a以及经典毒株VR-2332和疫苗毒株pMLV的核苷酸及其推导的氨基酸同源性分别为88.0%～100.0%和83.5%～100.0%;而与欧洲型经典毒株LV和Euro-1的同源性差异显著,其核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为64.0%～69.7%和53.3%～79.9%.遗传进化分析表明,PRRSV JX0708株在基因型上属于美洲型,同时美洲型PRRSV的变异存在某种地域和时间跨度上的相关性,但每个结构蛋白基因的变异并不严格遵从这种规律,而有所差异.

摘要：目的:构建马动脉炎病毒读码框ORF5、ORF6、ORF7主要结构蛋白基因全长片段的克隆载体及汉逊酵母穿梭载体,并获得重组工程菌,为下一步酵母表达重组目的蛋白奠定基础。方法:应用RT-PCR方法从病毒核酸中扩增ORF5、ORF6和ORF7读码框的全长基因,产物回收后分别与PUC18和PMD18-T载体连接并转化DH5α***,经氨苄筛选及测序,建立克隆载体PUC18-GL、PUC18-M和PMD18T-ORF7;以构建的克隆载体为模板,用重新设计的引物构建了汉逊酵母分泌性穿梭载体,然后电转化至汉逊酵母基因组中。结果:所有重组质粒经PCR和酶切鉴定均出现目的片段,测序结果证实正确,目的基因ORF5、ORF6与酵母重组成功。结论:构建了含有目的基因ORF5、ORF6的重组酵母工程菌,为实现分泌表达目的蛋白,进而研制病毒亚单位疫苗及诊断试剂提供了物质基础。

摘要：根据GenBank登陆的鹅细小病毒B株全基因组的核苷酸序列,设计合成一对引物,用PCR方法对GPV LN-1/06株的主要结构蛋白基因进行克隆,并对克隆的片段进行序列测定,用生物信息学软件进行序列分析。结果表明:所扩增的GPV LN-1/06株的基因长度为1605bp,包括VP3完整的开放阅读框,共编码534个氨基酸。与登录的20株国内和国外的GPV的VP3基因序列进行同源性分析表明,GPV LN-1/06株与其他20株VP3基因的核苷酸同源性较高,从93%至99%,说明GPV的VP3基因较为保守。系统进化树分析表明GPV-LN01/06病毒株与HG5/82为一组,具有较近的亲缘关系。本试验首次获得辽宁地区鹅细小病毒流行株的主要结构蛋白基因(VP3)的核苷酸序列,为研究国内外GPV的遗传演化规律提供参考资料。

摘要：根据IBV病毒的已报道基因序列设计了用于扩增鸡传染性支气管炎病毒M41株S1基因和T株核衣壳蛋白基因(N)的引物,经RT-PCR得到了预期大小的扩增产物;将目的条带纯化并回收以后,克隆到pMD18-T质粒载体中,对插入片段进行序列测定,并与已发表的IBVS1、N基因序列进行了比较和分析,表明具有高度同源性。证明我们克隆了IBVS1和N结构蛋白基因。

摘要：根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）美洲株（VR-2332）基因序列，设计合成了ORF2a、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7基因的引物。利用RT-PCR扩增出PRRSV HS株各基因的cDNA片段，将扩增的各cDNA片段克隆入pMD18-T载体并测序。应用DNAMan软件，将测序结果与国内外已发表野毒株和疫苗株（VR-2332、Resp MLV、16244B、HN1、BJ-4、CH1-a、HB-1、HB-2、LV）的相应基因进行序列比较，并绘制系统进化树。结果表明，PRRSV HS株与美洲型的相应基因核苷酸同源性为83．6％～99．79／6，与LV株的相应基因核苷酸同源性为38．9％～49％；推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为86．6％～99．6％，与LV株的同源性为54．2％～78．2％。系统进化树表明，PRRSV HS株属于美洲型，与HN1、VR-2332、RespMLV、16244B、BJ-4亲缘关系较近。