摘要：目的设计合成(E)-N-取代亚甲基-3-[4-(吡啶-4-基)嘧啶-2-基]氨基苯甲酰肼衍生物,并对其抗癌的活性进行研究。方法3-氨基苯甲酸乙酯为起始原料,通过4步反应合成了一系列目标化合物7a~7p,并通过^(1)H-NMR、^(13)C-NMR和HRMS对所有目标化合物进行了结构鉴定。采用MTT法、免疫印迹法、细胞侵袭实验、损伤愈合实验和EdU染色试剂检测了合成化合物对于结肠癌细胞生长的抑制作用。结果目标化合物对于结肠癌细胞的生长具有一定的抑制活性,其中化合物7m活性最优,其抑制结肠癌细胞系HT-29和RKO的IC50值分别为(1.04±0.16)和(1.54±0.20)μmol·L^(-1),且7m对正常结肠上皮细胞的毒性较小(IC_(50)>100μmol·L^(-1))。此外,7m能与Nur77结合,并以浓度依赖的方式抑制结肠癌细胞中Nur77和p-mTOR蛋白的表达。进一步研究表明化合物7m能以Nur77依赖的方式抑制结肠癌细胞的EMT进程。结论该系列化合物具有较好的抗结肠癌的活性,具有进一步研究的意义。

摘要：目的:柯萨奇病毒-腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)介导腺病毒与靶细胞之间的粘附,是腺病毒转染靶细胞的限速因子。本文分析CAR在瘤旁上皮组织、结肠肿瘤原发灶和淋巴结转移灶中的表达,为设计腺病毒载体基因治疗方案提供依据。方法:采用免疫组织化学方法检测62例结肠癌组织中CAR的表达,分析CAR表达与临床病理特征的关系。结果:与瘤旁上皮组织相比,肿瘤组织普遍存在CAR表达下调,但CAR在原发灶和淋巴结转移灶的表达水平无明显差异。CAR的表达水平与患者年龄及肿瘤大小相关。结论:结肠癌组织中存在CAR表达下调,提示在设计腺病毒载体基因治疗方案时应充分考虑CAR表达变化对疗效的影响。

摘要：肿瘤干细胞对于肿瘤发生发展的研究将会产生很大影响,肿瘤治疗也必将以肿瘤干细胞为重要的靶标来设计方案。本文对结肠癌干细胞的分离方法与信号传导的相关性及结肠癌干细胞的研究进展作一简要综述。

摘要：化学方法合成是新药研发的一种重要途径。结合抗肿瘤药物的作用机制以及蒽醌类衍生物的构效关系,设计合成了一类新的蒽醌类衍生物1-硝基-2-酰基蒽醌-缬氨酸(简称C3),发现其具有很好的抗肿瘤活性。为了确定蒽醌类衍生物C3对结肠癌HCT116和HT29细胞的作用及其分子机制,首先通过MTT比色法检测C3对结肠癌HCT116和HT29细胞活性的影响。结果显示,C3对这两种结肠癌细胞具有明显的抑制作用,呈时间和剂量依赖性。60μg/mL的C3处理HCT116和HT29细胞48 h,细胞活性分别是50.67%和59.77%,达到了半抑制浓度;同时,其细胞形态和细胞核发生明显变化。进一步采用Western印迹和qRT-PCR技术,检测C3对DNA切除修复交叉互补1(excision repair cross-complementation group 1,ERCC1)转录水平和蛋白质水平表达及其稳定性的影响。结果表明,C3降低了ERCC1转录水平和蛋白质水平的表达,并且减弱了ERCC1转录水平和蛋白质水平的稳定性。最后,用U0126(MEK1/2抑制剂)和C3联合作用结肠癌HCT116和HT29细胞,通过Western印迹检测ERCC1蛋白质水平的表达。结果表明,C3通过降低p-ERK1/2的蛋白质水平的表达,从而抑制ERCC1的表达。上述结果证明,C3通过细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK1/2)信号通路,降低了ERCC1转录水平和蛋白质水平的稳定性,使ERCC1转录水平和蛋白质水平表达发生下调,进而抑制结肠癌HCT116和HT29细胞的活性。

摘要：目的·研究微小RNA-143(miR-143)在人结肠癌及癌周正常组织中的表达,探索其对结肠癌HCT116、RKO细胞功能的影响及下游靶基因的预测。方法·设计合成并构建miR-143慢病毒表达载体,稳定转染人结肠癌HCT116、RKO细胞。实时荧光定量PCR检测人结肠癌、癌周正常组织、慢病毒感染后HCT116和RKO细胞中miR-143的表达。Annexin V-APC单染法及流式细胞仪检测感染前后细胞凋亡能力。Transwell法检测感染前后HCT116、RKO细胞迁移能力的改变。Western blotting方法检测FOSL2蛋白的表达。结果·miR-143在结肠癌组织中的表达量显著低于癌周正常组织(0.339±0.454 vs 1.003±0.003)(U=16.000,Z=-4.231,P=0.000)。上调miR-143后,HCT116细胞凋亡率显著高于阴性对照组(P=0.000),RKO细胞凋亡率显著高于阴性对照组(P=0.000)。上调miR-143后,HCT116迁移细胞数显著低于阴性对照组(P=0.000)。miR-143下调后,RKO迁移细胞数显著高于阴性对照组(P=0.003)。miR-143下调后,FOSL2蛋白表达量升高。结论·miR-143在结肠癌组织中表达量显著下降。上调miR-143可促进结肠癌细胞凋亡,并抑制HCT116细胞迁移;下调miR-143可促进RKO细胞迁移;抑制miR-143功能可上调FOSL2蛋白表达。

摘要：目的研究iASPP多克隆抗体在结肠癌组织中的表达与结肠癌的组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移的关系。方法根据生物信息学软件分析人iASPP蛋白的二级结构、亲水性、疏水性和抗原性等理化性质,经同源性检索,综合考虑抗体设计的其他因素,设计一段多肽,制备iASPP多克隆抗体。利用ELISA、Western印迹、免疫组织化学等方法来测定其效价和特异性。应用免疫组化(S-P)法检测30例结肠癌组织及15例正常结肠组织中的iASPP表达,判定其与结肠癌的组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移等临床病理学特征的关系。结果制备了抗人iASPP多克隆抗体;利用ELISA,Western印迹和免疫组织化学染色的方法证实此抗体效价较高,特异性较强。iASPP在癌组织不同分化者iASPP阳性率不同。在浸润深度及有无淋巴结转移中的表达差异无显著性。结肠癌组织中iASPP的阳性表达率较正常结肠组织高(P<0.05)。结论 iASPP的表达异常与结肠癌的进展有关,其表达的失调在结肠癌的预后中发挥着重要作用。

摘要：癌胚抗原(CEA)作为肿瘤标志物,在多种恶性肿瘤中高表达.为探索CEA在肿瘤发生发展过程中的生物学作用,本研究以结肠癌细胞株8307为研究对象,应用RNAi技术抑制CEA在8307细胞中的表达,观察其对8307细胞生长的影响.依据siRNA设计原则,设计合成靶向CEA的shRNA并克隆到pSilencer2.1-U6 neo载体中,成功构建了CEA shRNA表达载体,通过脂质体介导转染8307细胞,经G418筛选出抑制CEA表达的稳定细胞.RT-PCR、Western印迹分别检测CEA mRNA及蛋白表达水平,MTT及集落形成实验检测细胞增殖活性.实验结果显示,构建的CEA shRNA表达载体明显抑制CEA mRNA及蛋白水平的表达.MTT实验中,CEA表达下调的8307细胞生长活性降低,与对照组相比,抑制率达39%(P<0.05),细胞集落形成能力也显著降低(P<0.05).上述结果初步证明,构建的CEA shRNA表达载体能明显降低CEA的表达,并抑制结肠癌细胞增殖活性.

摘要：目的:探讨计算机辅助药物设计合成研发的特异性多肽A28增强顺铂对结肠癌细胞的杀伤效应。方法:以结肠癌细胞HCT-116和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)为实验对象,设定A28浓度为20μmol/L,顺铂的浓度为10、30及90μmol/L。MTT法检测A28联合顺铂对HCT-116细胞和HUVEC细胞生长的影响,流式细胞术检测A28联合顺铂对HCT-116细胞凋亡的影响。结果:顺铂浓度依赖性地抑制HCT-116细胞的增殖,A28显著增强顺铂对HCT-116细胞增殖的抑制及致凋亡作用。A28联合10μmol/L顺铂对HCT-116细胞增殖的抑制率为(43.3±0.03)%,显著高于单用顺铂组的(15.6±0.10)%(P0.05)。A28联合1.1、3.3、10、30或90μmol/L顺铂时,HCT-116细胞的凋亡率[(6.0±0.07)%、(14.5±0.03)%、(34.7±0.07)%、(37.3±0.08)%、(40.6±0.02)%]高于单用顺铂组[(5.1±0.06)%、(8.3±0.02)%、(14.6±0.08)%、(19.8±0.07)%、(32.6±0.02)%](P<0.01)。10μmol/L顺铂联合20μmol/LA28可以有效杀伤HCT-116细胞,且对HUVEC的毒性作用较小。结论:多肽A28可提高顺铂对结肠癌细胞株HCT-116的杀伤效果,减轻对正常HUVEC的毒性作用。

摘要：目的制备ASPP1多克隆抗体,研究ASPP1在结肠癌组织中的表达,探讨其表达与结肠癌的组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移的关系,阐明ASPP1在结肠癌中的作用。方法根据生物信息学软件分析人ASPP1蛋白的二级结构、亲水性、疏水性和抗原性等理化性质,经同源性检索,综合考虑抗体设计的其他因素,设计一段多肽,制备多克隆抗体。利用ELISA、Western印迹、免疫组织化学方法测定其效价和特异性。应用免疫组化SP法检测30例结肠癌组织及15例正常结肠组织中的ASPP1表达,判定ASPP1表达与结肠癌的组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移等临床病理学特征的关系。结果成功分析预测ASPP1的抗原性;制备了抗人ASPP1多克隆抗体;利用ELISA、Western印迹和免疫组织化学染色方法证实此抗体效价较高,特异性较强。ASPP1在癌组织的高、中、低分化程度上的表达表现为分化程度越低,其表达越弱。在浸润深度及有无淋巴结转移中的表达无显著性差异,在结肠癌与正常结肠组织中比较无显著性差异(P>0.05)。结论利用生物信息学软件较好地预测出人ASPP1的抗原性,并成功制备了较高特异性的人ASPP1多克隆抗体。ASPP1的表达异常与结肠癌进展有关,其表达的失调在结肠癌的预后中发挥重要作用。

摘要：目的:探讨结肠癌组织中SLP-2蛋白的表达情况及SLP-2基因对结肠癌细胞HCT-116侵袭、迁移力的影响。方法:采用免疫组化法检测50对结肠癌及正常结肠黏膜组织中SLP-2蛋白的表达,分析患者临床病理特征与SLP-2蛋白表达的关系。设计合成SLP-2 siRNA,转染结肠癌HCT-116细胞,Transwell法及Matrigel基质实验检测转染SLP-2 siRNA对HCT-116细胞侵袭、迁移力的影响,RT-PCR及Western blot检测转染48 h后HCT-116细胞中SLP-2 mRNA及蛋白的表达情况。结果:正常结肠及结肠癌组织中SLP-2蛋白的高表达率比较,差异有统计学意义(χ2配对=23.188,P<0.001)。SLP-2蛋白表达与结肠癌TNM分期(χ2=10.474,P=0.001)及淋巴结转移(χ2=19.647,P<0.001)有关。SLP-2 siRNA转染组细胞迁移力、侵袭力、SLP-2 mRNA及蛋白表达水平均低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05)。结论:结肠癌组织中SLP-2高表达;SLP-2可能通过促进结肠癌细胞的侵袭、迁移能力,参与结肠癌的转移。