摘要：通过参考GenBank中羊传染性脓疱病毒的F1L基因序列设计引物,应用PCR技术的特异性扩增了羊传染性脓疱病毒JLSY04株的F1L基因片段,测序得到了该病毒F1L基因序列,并与几个参考毒株序列进行比对.实验结果表明,羊传染性脓疱病毒JLSY04株与OV/Torino株同源性最低,为96.0%,与Jilin株同源性最高,为99.4%.即该羊传染性脓疱病毒JLSY04株F1L基因与其他参考毒株间的差异较小,可作为基因工程疫苗的目的基因.

摘要：针对羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因序列设计合成了1对引物,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测ORFV核酸的SYBRGreenⅠreal-timePCR方法。结果显示,该方法线性关系良好,标准曲线的相关系数为0.999;检测灵敏度可达9.4×104copies/μL;与绵羊痘病毒(SPV)不发生交叉反应,具有良好的特异性;组内Ct值相同,组间变异系数小于2%。应用建立的方法检测20份疑似羊传染性脓疱病病料,结果17份为阳性,同时用常规PCR进行检测,结果仅10份为阳性。结果表明,建立的实时荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可初步用于ORFV的检测。

摘要：参照GenBank中ORFV的毒力因子CBP基因的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,采用PCR方法扩增该基因片段,并克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中,经PCR、酶切鉴定和测序正确后,转入*** BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG进行诱导表达,并通过生物信息学软件进行分析。SDS-PAGE结果可见大小约为49 000的融合蛋白条带,抗原性分析表明其具有良好的免疫原性;此外,Western-blotting试验结果确证了GST-CBP融合蛋白的表达并证实其具有良好的免疫原性。结果表明,本研究成功诱导表达GST-CBP融合蛋白,这将为进一步研究CBP的功能及理化特性,以及开发以CBP为基础的诊断抗原奠定了物质基础。

摘要：采用冻干试验筛选出保护剂基础配方，再通过Plackett—Burman设计法筛选主要保护剂基质，然后通过Box-Behnken响应面分析法对羊传染性脓疱病毒（ORFV）耐热保护剂配方进一步优化，用冻干试验进一步验证筛选出1种针对ORFV保护效果最好的耐热冻干保护剂作为疫苗用候选配方。同时，依据前期试验获得的活疫苗冻干曲线，通过进一步优化，获得疫苗最佳冻千曲线。利用该冻干工艺冻干的疫苗，保护剂的保护率可达95．3％，且疫苗各项指标均达到《中华人民共和国兽用生物制品规程》要求。经37℃保存7，15，30d病毒滴度分别下降0．46，0．70，1．00；2～8℃保存3，6，12，24个月病毒滴度分别下降0．10，0．10，0．40，0．60，证明此配方制备的疫苗具有良好的热稳定性。本试验解决了ORFV细胞弱毒疫苗仅能在低温条件下保存和运输的瓶颈技术问题，使疫苗的储存、运输更为方便。

摘要：根据GenBank中的羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因序列,设计合成1对引物,通过对PCR条件的优化,敏感性、特异性试验,成功建立了ORFV的PCR检测方法。敏感性与特异性结果显示,最低核酸检测量为1.2 fg/μL,对口蹄疫病毒、山羊痘病毒、丝状支原体山羊亚种的扩增结果均为阴性。同时根据GenBank中的ORFV的CBP基因的序列,设计合成1对特异性引物,以ORFV贵州分离株作为模板,成功克隆出ORFV的CBP基因。同源性分析表明,核苷酸与GenBank中ORFV的CBP基因的核苷酸序列相似性99.4%～88.8%。本研究为ORFV感染的流行病学调查和CBP基因功能研究奠定基础。

摘要：根据羊传染性脓疱病毒F1L基因序列设计3条引物,建立了一种能鉴别诊断羊传染性脓疱病毒和绵羊痘病毒、山羊痘病毒的半套式PCR快速检测方法。采用该方法对羊传染脓疱病毒XC13株进行检测,结果半套式PCR扩增出450bp的特异性DNA片段,而对山羊痘病毒、绵羊痘病毒、禽痘病毒的扩增结果均为阴性;敏感性试验结果表明,所建立的PCR方法能检出3.64×101 copies/μL羊传染性脓疱病毒;重复性试验、临床样品检测试验结果表明,所建立的半套式PCR检测方法可用于羊传染性脓疱病毒感染的快速诊断与流行病学调查。

摘要：为建立快速、灵敏的羊传染性脓疱病毒(ORFV)检测方法,本研究利用新一代的TaqMan MGB探针技术,根据ORFV编码F1L蛋白的059基因保守序列设计了1对引物和1条探针,建立了基于羊传染性脓疱病毒059基因的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法,对该法进行灵敏性、重复性、特异性分析,检测了14份临床样品。结果显示,所建立的方法标准曲线斜率为-3.36,截距为38.36,相关性系数(R2)为0.995,灵敏性在3.2~32 copies/μL之间,组内与组间重复的变异系数均小于1.65%,与常见羊病的病原体无交叉反应,表明所建立的基于ORFV 059基因的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法适用于羊传染性脓疱病毒的快速检测。

摘要：根据GenBank公布的羊传染性脓疱病毒VIR基因序列(***666563.1),利用Beacon Designer 7.9软件设计1对特异性引物,建立羊传染性脓疱病毒VIR基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测羊传染性脓疱病毒,对羊常见病原无特异性扩增;最低检测限为100copies·μL^(-1);组内和组间变异系数均小于2%;应用该方法对39份临床样品进行检测,阳性率为94.9%(37/39)。以上结果表明该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,适合于羊传染性脓疱的病原学检测和流行病学调查。

摘要：本试验通过对羊传染性脓疱病毒内蒙分离株(OV/nm-05)进行总DNA提取,参考GeneBank中OrfVirus(Strain NZ2)株F1L基因序列设计一对引物,应用PCR技术特异性地扩增出该毒株的F1L基因的片段,并将其克隆到pGEM-Teasy载体后进行测序,得到该病毒F1L基因序列。应用计算机软件将测定序列与参考毒株OV/7、Strain NZ2、OV/C2、OV/mi-90、OV/Torino、OV/2的F1L基因序列进行比较。结果表明羊传染性脓疱病毒内蒙分离株与Strain NZ2同原性最高,达99.1%,与OV/Torino最低,但也为96.3%。说明羊传染性脓疱病毒内蒙分离株F1L基因与其他参考毒株之间差异不大。

摘要：为了克隆羊传染性脓疱病毒CEV112基因并对其进行原核表达,根据GenBank中CEV112基因序列信息设计1对引物,以CEV基因组为模板,采用PCR扩增出1条大小为867bp的CEV112基因,将其连接到pMD20-T载体上,构建pMD20-T-CEV112重组质粒,转化到大肠埃希菌(***)DH5α感受态细胞中,提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建重组质粒pET28a-CEV112,转化到*** BL21(DE3)感受态细胞中。经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果表明,成功构建了pET-28a-CEV112原核表达载体,并在*** BL21(DE3)中表达了CEV112基因,表达的融合蛋白大小约36ku,且主要以包涵体形式存在,为后续开展CEV112基因的功能研究奠定了基础。