摘要：背景青光眼患者行小梁切除术后的疗效一直是眼科医师关注的问题，手术中羊膜植入的有效性评价成为目前该领域研究的热点之一。目的评价小梁切除术中应用羊膜（TE—AMT）和未应用羊膜（TE-noAMT）在青光眼治疗中的疗效和安全性。方法按照预先制定的检索策略，通过计算机检索The Cochrane Library、PubMed、CNKI、中国生物医学文献数据库等，并通过因特网和手工检索进行补充，检索时间从1965年1月至2010年12月，纳入小梁切除术中应用羊膜和未应用羊膜的临床随机对照试验的文献。参照Jadad量表评分标准对纳入的文献质量进行评价，并对纳入文献的相关参数和数据进行信息提取，包括文献作者、试验设计类型、国籍、眼数、患者数量、性别、随访时间、平均年龄、青光眼种类、基础眼压值、失访率；分析指标包括术后≥6个月的眼压下降率、手术成功率以及并发症情况，采用RevMan5．0软件进行Meta分析。结果共纳入19篇随机对照试验文献，其中15篇为Jadad量表评分2分以上，共纳入818例977眼。眼压的下降率在术后6个月和12个月的总体合并加权均数差（WMD=8．47％，95％CI：5．20～11．75，P=0．00）、（WMD=9．37％，95％CI：4．97～13．77，P=0．00）；完全手术成功率和条件手术成功率在术后6个月的总体相对危险度（RR）分别为（1．40，95％CI：1．19～1．65）、（0．47，95％CI：0．22～1．00）。并发症发生情况分析表明，术后浅前房、前房出血、低眼压、脉络膜脱离，术后6个月和12个月非功能性滤过泡的RR分别为0．51（95％CI：0．30～0．85）、0．43（95％C1：0．20～0．92）、0．51（95％C1：0．26～1．00）、0．57（95％CI：0．14～2．31）、0．31（95％CI：0．20～0．47）、0．31（95％CI：0．17～0．55）。结论Meta分析结果表明，与TE—noAMT手术比掂TE—AMT能审杆仲隆低吉＊瞩帛者的术后眼乐辊高窨令丰术甫功蜜{#隆低并枯症的带堆，宝．

摘要：目的探讨改良的翼状胬肉切除联合自体结膜和羊膜移植术及干扰素滴眼液治疗原发性翼状胬肉的临床疗效。方法前瞻性病例对照研究。连续入选2018年6月1日至12月31日于北京同仁眼科中心进行手术治疗的原发性翼状胬肉患者,按照随机区组设计分为试验组和对照组。试验组患者行改良结膜移植联合羊膜移植术,术后给予干扰素滴眼液;对照组患者行自体结膜移植术。所有患者术前观察翼状胬肉分型及大小,记录视力、眼压及眼前节情况;术后1、2周和1、3、6、12个月对患者进行随访,观察视力、角膜上皮愈合情况以及翼状胬肉复发等情况。本文数据均为计数资料,采用卡方检验和Fisher精确检验进行统计学分析。结果70例(77只眼)翼状胬肉患者纳入研究,其中男性30例,女性40例,年龄50~70岁。试验组35例(38只眼),对照组35例(39只眼)。术后12个月共54例(60只眼)数据完整,其中试验组28例(30只眼),对照组26例(30只眼)。两组各有1只眼的角膜上皮于术后7~14 d修复,其余患眼的角膜上皮均在术后7 d内完全修复。两组角膜上皮愈合情况分布的差异无统计学意义(P=1.00)。两组患者术前及术后视力下降(两组各2只眼)、稳定(试验组15只眼,对照组23只眼)和提高(试验组13只眼,对照组5只眼)的眼数分布比较,差异无统计学意义(P=0.053);术后12个月两组患者均未出现4级结膜增生真性翼状胬肉复发,结膜纤维组织增生1、2、3级患者两组间差异无统计学意义(P=0.405)。结论改良的翼状胬肉切除联合自体结膜和羊膜移植术及干扰素滴眼液治疗原发性翼状胬肉复发率低,对健康结膜组织损伤小,可为翼状胬肉的手术治疗提供新的选择.

摘要：目的探讨羊膜对眼眶爆裂性骨折导致的软组织损伤粘连的预防作用。设计实验性研究。研究对象26只新西兰兔。方法建立兔眼眶爆裂性骨折模型,20只动物右眶通过包裹羊膜的人造骨片进行修复(实验组),左眶直接应用羟基磷灰石(HA)进行修复(对照组),6只动物不进行任何修复(空白对照组)。分别在置入骨片后1周、1个月取骨片周围组织,比较三组的不同。主要指标软组织与骨片间粘连程度分级,组织炎症反应评分,胶原评估,TGF-β免疫组化分析。结果术后1周,HE和免疫组化显示实验组与对照组炎症反应差异无统计学意义(P=0.351,P=0.413),空白对照组与实验组差异有统计学意义(P=0.012,P=0.041);术后1个月,HE和免疫组化显示实验组与对照组炎症反应差异有统计学意义(P=0.037,P=0.048),空白对照组与实验组差异无统计学意义(P=0.285,P=0.472)。结论羊膜包裹人造骨片修复眼眶燥裂性骨折早期未见明显抗炎作用,中晚期则有明显抗炎抗粘连作用。

摘要：背景:有证据表明羊膜上皮细胞能够表达神经系统细胞的几乎全部特异性抗原,且可以分泌多种神经营养因子及递质。若羊膜上皮细胞能够代替神经细胞,其神经营养作用必将为治疗神经推行性病变带来广阔前景。目的:检测神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中是否表达?设计:重复测量设计。单位:吉林大学第二临床医学院,吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室。材料:实验于2004-10/2005-10在吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室完成。选取清洁级孕12～14d的Wistar大鼠1只,将分离出的羊膜上皮细胞用于实验。小鼠抗大鼠神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶单克隆抗体、兔抗大鼠神经元特异性烯醇化酶和NT-3多克隆抗体(武汉博士德公司);大鼠抗大鼠Musashi抗体(日本庆应义塾大学岗野荣之教授惠赠)。方法:取孕12～14d的Wistar大鼠胎盘,剥离羊膜获得上皮细胞,在37℃、体积分数为0.05的CO2环境下,胰蛋白酶消化5min,加入DMEM/F12培养液,以5×109L-1的浓度接种于培养瓶中。培养3d后,细胞以1×108L-1的浓度接种于预先涂有多聚赖氨酸的直径35mm平皿中,用质量浓度为40g/L的多聚甲醛固定20min。采用免疫细胞化学染色方法对神经元特异性抗原微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶在羊膜上皮细胞中的表达情况进行检测。主要观察指标:①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察。②神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况。结果:①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察:羊膜上皮细胞培养24h后,细胞扁平呈成纤维细胞样。3～5d后,胞体饱满,核大而圆,核仁清晰,突起发达,并互相连成网状。②神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况:培养4d后免疫细胞化学染色结果可见,羊膜上皮细胞表达Nestin、神经元特异性烯醇化酶、乙酰胆碱转移酶以及Musashi、神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白。结论:羊膜上皮细胞与神经组织细胞具有一定的同源性,可望作为治疗神经系统疾病新的细胞来源。

摘要：背景：以往利用羊膜提取间充质干细胞的研究多将注意力放在新鲜的羊膜标本上，由于地域和时间的限制，对羊膜进行保存是必须面对的实际问题。目的：实验拟比较从不同保存时间人羊膜标本中分离培养的羊膜间充质干细胞的增殖能力。设计、时间及地点：体外进行的细胞对照观察，于2007—01／200802在郑州大学医学院和生物工程系完成。材料：正常剖宫产的健康产妇志愿捐献的羊膜12份，孕38周，检测乙肝5项、HCV、HIV、梅毒等其他相关传染性指标均呈阴性。方法；无菌条件下将每份新鲜完整的羊膜平均分成3组，即新鲜1h组、4℃放置24～36h组、4℃放置48～60h组。将3组标本剪碎，胰蛋白酶-胶原酶联合消化，过滤后收集单细胞悬液，以2×10^8L^-1密度接种，加入含胎牛血清和碱性成纤维细胞生长因子的DMEM／F12培养基，贴壁法纯化扩增细胞。主要观察指标：倒置显微镜下观察细胞形态，绘制生长曲线。取第3代细胞进行免疫组织化学检测和流式细胞仪鉴定。结果：①3组标本消化后都含有多种单个细胞成分，呈圆形、菱形、短梭形、多角形，细胞折光性良好，此外还有多个上皮细胞聚集所成的细胞团。接种后1-3d各组细胞均为潜伏期：4～7d新鲜1h组与4℃放置24～36h组进入对数生长期，细胞增殖活跃，细胞数目呈指数级递增，4℃放置48～60h组仍处于潜伏期；7d后前两组细胞已铺满瓶底，4℃放置48～60h组刚开始指数级递增。②各组细胞神经元烯醇化酶、神经丝蛋白、巢蛋白均呈阳性表达，胶质纤维酸性蛋白呈阴性。各组细胞CD29，CD44均呈阳性表达。结论：保存时间在60h内的人羊膜都可以分离出具有增殖能力的间充质干细胞，但36h内的羊膜标本所分离的间充质干细胞具有较快的增殖能力。

摘要：背景:人羊膜为半透明的薄膜,含有多种促进细胞增殖的营养成分,是一种较好的负载角朊细胞的生物材料。目的:将人羊膜负载培养猪角朊细胞构建皮肤表皮替代物,并观察猪角朊细胞在人羊膜上生长增殖的形态特点。设计:以细胞为研究对象,单一样本研究,重复测量观察。单位:解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所。材料:实验于2001-01/11在创伤、烧伤和复合伤国家重点实验室,第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所完成。猪角朊细胞取自3月龄贵州小香猪。方法:将贵州小香猪的角朊细胞原代培养,传代扩增后,将角朊细胞以1.63×105/cm2的密度接种于人羊膜基质面,逐日于倒置显微镜下观察角朊细胞的生长增殖变化情况,并于培养3d与15d进行光镜、电镜观察,检测角朊细胞在人羊膜上的生长情况。主要观察指标:角朊细胞在人羊膜上的生长情况。结果:倒置显微镜下观察接种后30min内明显见到角朊细胞在人羊膜上黏附,24h内大部分黏附生长,3d形成单层完全覆盖人羊膜。光镜下人羊膜负载角朊细胞3d,可见角朊细胞在人羊膜基质面黏附呈单层生长,细胞扁平紧密排列。扫描电镜下可见胞体呈多边形,多见胞膜突起。透射电镜下可见角朊细胞与人羊膜黏附良好,生长在人羊膜上的角朊细胞内有许多角质丝。生长至15d,在倒置显微镜和扫描电镜下均可见,细胞因过于拥挤而隆起,因老化而形成较多碎片,部分细胞有空洞形成。结论:人羊膜是角朊细胞在体外培养的良好载体,对角朊细胞有明显的促增殖作用。但人羊膜负载角朊细胞生长至15d,因老化部分细胞有空洞形成。

摘要：背景:周围神经损伤部位的微环境状况是影响神经再生的重要因素之一。周围神经损伤后,良好的神经再生微环境有利于保护受损神经元、促进轴突的有效再生。目的:应用肌膜瓣包裹、羊膜管预置聚乳酸-羟基乙酸微丝,充填大鼠自体周围神经组织浆模拟周围神经再生微环境,探讨其修复坐骨神经缺损的可行性。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-06/2007-10在广东医学院实验动物中心完成。材料:清洁级2月龄SD大鼠30只,随机分为实验组、对照组、标准组3组,每组10只,右侧为实验侧,左侧为正常对照侧。取健康、足月、顺产的新鲜胎儿羊膜(产妇知情同意)制备羊膜基质膜。用医用Vicryl缝线和羊膜基质膜制备聚乳酸-羟基乙酸微丝桥接物。方法:大鼠切除坐骨神经6.0mm,自然回缩建立坐骨神经缺损模型。实验组采用带蒂肌膜瓣、人羊膜管预置Vicryl微丝并充填大鼠自体坐骨神经组织浆;对照组采用单纯人羊膜管充填大鼠自体坐骨神经组织浆;标准组采用自体神经移植,桥接大鼠坐骨神经缺损。主要观察指标:术后8,12周行大体观察、组织学检查、胫前肌湿质量、有髓神经纤维通过率及神经电生理学检测。结果:术后12周,实验组、标准组肌萎缩有所恢复,对照组则恢复不明显。实验、标准组患侧胫前肌色泽红润,饱满富有弹性;对照组色泽相对较暗,弹性度较差。术后8,12周3组胫前肌恢复率组间比较,术后12周3组有髓神经纤维总数、截面积,神经移植体血管数和血管截面积组间比较,以及小腿三头肌复合肌动作电位幅值组间比较,差异均有显著性意义(P<0.05),其中标准组神经纤维再生质量最佳,实验组优于对照组。结论:肌膜转位、羊膜管预置聚乳酸-羟基乙酸微丝,并填充大鼠自体周围神经组织浆导管能较好的模拟周围神经再生之微环境,促进神经纤维再生,但与自体神经移植尚有差距。

摘要：背景:有研究表明羊膜上皮细胞能够表达神经系统细胞的几乎全部特异性抗原,且可以分泌多种神经营养因子及递质,如果羊膜上皮细胞用于代替神经细胞,其神经营养作用必将为治疗脊髓损伤和神经退行性病变带来广阔前景。目的:观察大鼠羊膜上皮细胞移植入损伤脊髓后的存活、迁移及分泌情况。设计:观察实验。单位:吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室。材料:选用1只孕12～14d及18只成年雄性Wistar大鼠,体质量300～350g,由吉林大学实验动物中心提供。免疫组织化学染涂色试剂:小鼠抗大鼠溴核苷脱氧嘧啶单克隆抗体购自Sigma公司;兔抗大鼠神经营养素-3多克隆抗体和兔抗大鼠BDNF多克隆抗体(博士德公司);SP免疫组织化学染色试剂盒购自迈新公司。方法:实验于2005-07/10在吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室完成。①大鼠脊髓损伤模型的建立:大鼠麻醉后,分离皮下组织肌肉,用咬骨钳咬除棘突及椎板,暴露脊髓,用止血钳以一扣力度钳夹脊髓全截面3min,青霉素涂撒创口,缝合肌肉皮肤。术中根据需要吸入乙醚麻醉,1周后移植。②羊膜上皮细胞的获取和培养:取孕12～14d的Wistar大鼠胎盘剪成1mm×1mm×1mm的组织块,经消化培养后,机械吹打使其成为单细胞悬液接种于培养瓶中。③羊膜上皮细胞移植入损伤脊髓:切开原创口,暴露损伤脊髓,将5μL羊膜上皮细胞悬液以1×1012/L的浓度用微量注射器在距损伤处上缘3mm处注入,注入时间为3min,停针5min后缓慢拔出,缝合肌肉、皮肤。④取材及免疫组织化学分析:分别于羊膜上皮细胞移植入1,3周后取材,即室温下40g/L多聚甲醛灌流固定后在PBS缓冲液中浸泡20min,4℃下一抗孵育过夜,二抗生物素化抗小鼠或兔IgG37℃孵育20min,辣根过氧化物酶标记的三抗于37℃孵育20min,0.2g/L二甲基联苯氨显色或AEC显色。主要观察指标:羊膜上皮细胞移植入损伤脊髓1,3周后的存活、迁移及分泌情况。结果:羊膜上皮细胞移植1周后,羊膜上皮细胞仍多聚于软脊膜下,可见阳性细胞核;羊膜上皮细胞移植3周后,羊膜上皮细胞迁移更加广泛,中央管及周围灰质中有大量阳性细胞;同时可观察到在损伤脊髓中移植的羊膜上皮细胞能够表达神经营养素3,表现为显红色的阳性细胞和脑源性神经营养因子。结论:羊膜上皮细胞在大鼠损伤脊髓内能够至少存活3周并有广泛迁移,此外还能够分泌神经营养因子脑源性神经营养因子和神经营养素3。

摘要：背景:近年来国内外对单纯羊膜移植和羊膜负载细胞移植治疗角膜损伤的研究逐渐增多,在动物实验中已取得确切疗效,但临床应用报道甚少。目的:拟制备人羊膜负载的自体骨髓间充质干细胞贴片,观察贴片移植后角膜损伤的改善。设计、时间及地点:细胞组织工程学体内观察,于2008-02在四平市中心医院中心实验室完成。对象:同期四平市中心医院收治的1例翼状胬肉患者。羊膜取自正常剖腹分娩产妇的胎盘。方法:无菌条件下钝性分离人羊膜与绒毛膜,胰蛋白酶消化去除羊膜表面上皮细胞,将硝酸纤维素膜剪成适合眼部大小的圆形支架贴于基底面,将膜片浸泡在α-MEM培养基中,上皮面向上,4℃保存备用。采集翼状胬肉患者自体骨髓,Ficoll法密度梯度分离骨髓单个核细胞,于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中孵育扩增,将鉴定后的第3代骨髓间充质干细胞按2×105密度接种至羊膜上,加入含10%血清的α-MEM培养基,细胞长满后进行移植。洗涤负载骨髓间充质干细胞的人羊膜贴片至无橙红液体,通过眼科手术去除病变组织后,将羊膜贴片细胞面向上覆盖于翼状胬肉患者角膜病变表面,缝合固定后,另缝合一层单纯羊膜用于保护移植细胞。主要观察指标:人羊膜负载的骨髓间充质干细胞鉴定结果,贴片移植效果。结果:接种到人羊膜上4h细胞开始贴壁,培养24h细胞变为梭形且数量增多,48h后细胞紧密排列,倒置显微镜下人羊膜上的骨髓间充质干细胞覆盖面积大于80%,锥虫蓝染色细胞存活率大于90%,免疫荧光染色细胞CD44和CD90阳性率均大于90%。人羊膜负载的骨髓间充质干细胞贴片移植后1周内,羊膜贴片无溶解和脱落,患者眼表透明,无水肿;移植后8个月内无新生血管生成。结论:骨髓间充质干细胞接种到人羊膜上生长状态良好,将该贴片移植至切除翼状胬肉患者后短期内未发生溶解和脱落,患者视力得到改善。

摘要：目的摸索锥虫蓝直接染色法在人羊膜细胞活力快速鉴定中的适宜浓度及染色时间。方法取健康剖宫产产妇的胎膜6张，浸泡后分离羊膜并剪成1cmX1Cm备用。（1）取部分制备好的羊膜分别浸泡于1、2、3、4g／L4种浓度的锥虫蓝溶液中，每个浓度下各浸泡1、3、4、10min后取出，在PBS中漂洗30s，更换PBS，继续漂洗30S。在光学显微镜下选取4个视野拍照，每个视野计数1000个细胞，同时计数蓝染细胞计算细胞死亡率。（2）另取部分制备好的羊膜浸泡于0．5g/L氯己定1h后行锥虫蓝直接染色，锥虫蓝溶液浓度与染色时间为前一实验结果选定的浓度、时间，并与1g／L锥虫蓝染色10ram对比。后续操作及检测同前一试验。对数据行两因素析因设计方差分析、Duncan多范围检验及LSD检验。结果（1）1、2、3g／L锥虫蓝染色1、3min后细胞死亡率相近（P值均大于0．05），染色4、10min后细胞死亡率明显高于1、3min（P值均小于0．05）。4g／L锥虫蓝染色l、3、4min后细胞死亡率相近（P值均大于0．05），染色10min后细胞死亡率显著高于1、3min（P值均小于0．05）。锥虫蓝浓度为2、3、4g／L时，各时相点细胞死亡率都显著高于1g／L（P值均小于0．05）。（2）对经0．5g／L氯己定浸泡1h羊膜染色显示，1g／L锥虫蓝染色1min细胞死亡率[（72．6±7．4）％]显著低于预计死亡率（100．0％，P〈0．05），染色3min细胞死亡率[（95．3±5．6）％]、染色10min细胞死亡率[（99．8±5．O）％]与预计死亡率相近（P值均大于0．05）。结论锥虫蓝直接染色法鉴定人羊膜细胞活力的适宜方案为浓度1g／L，染色时间3min。