摘要：目的利用反向遗传学原理构建B、E型肉毒神经毒素(BoNT)基因型特异性靶片段质粒、菌株。方法自GenBank获取BoNT基因序列,利用DNAMAN、Lasergene、Vector NTI等多种生物信息学分析软件和BLAST等网上数据分析平台进行综合分析,以锚定BoNT/B与BoNT/E基因中的型特异性靶片段,分别设计合成5条和10条DNA短链,经重叠PCR扩增获得完整的靶片段,纯化后连接到pMD18-T载体上,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,质粒提取后进行酶切和测序鉴定。结果分析了全球已报道的60条BoNT基因序列(A、B、E、F型),于BoNT/B与BoNT/E基因中,分别锚定了215bp和360bp的靶片段,并设计合成其特异的检测引物对,经酶切、测序确证,成功合成具有型特异性的BoNT/B与BoNT/E靶片段。结论获得含有型特异性BoNT/B与BoNT/E靶片段的重组质粒pMD18-T-BoNT/B,pMD18-T-BoNT/E及其菌株。

摘要：肉毒神经毒素分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ和Ｇ七个血清型，其中Ａ、Ｂ、Ｅ和Ｆ型引起人类肉毒中毒。为此，选取肉毒神经毒素的保守序列设计了一对简并引物，对１８株肉毒梭菌和８株相关梭菌进行了检测，表明该引物可特异扩增Ａ、Ｂ、Ｅ、Ｆ和Ｇ型肉毒梭菌及产Ｅ型肉毒神经毒素的丁酸梭菌，产物为２６４ｂｐ，敏感性达１０ｐｇ细菌ＤＮＡ。采有酚－氯仿抽提法、固相载体捕获法和热裂解法处理产毒菌株，结果表明热裂解法安全、简便、快速，所制模板扩增效果明显。因此，此ＰＣＲ方法可用于快速敏感地检测引起人类肉毒中毒的梭菌。

摘要：比较GenBank中4个不同毒株的A型肉毒神经毒素（BoNT／A）的基因组序列，发现其基因序列的一致性高迭92．2％-99．9％。基于保守性高的BoNT／A氨基酸序列，根据BioSun和LaserGene软件包中的表住分析相关参数，辅以对BoNT／A蛋白的二级结构的分析，综合预测BoNT／A的B细胞表位。结果表明，BoNT／A轻链的142-150、284-292区段，轻链的284-292，重链的440-450、465-480、538-549、699-710、751-760、1087-1095、1224-1231、1263-1270区段是B细胞表位优势区的可能性较大。多参数方案井结合不同软件综合预测BoNT／A蛋白的B细胞表位，为进一步实验鉴定BoNT／A的B细胞表位及其多表位疫苗设计和研究奠定了基础。