摘要：背景:维持正常的肝再生是避免肝纤维化和肝癌发生发展的关键环节,中医药调控肝再生主要反映在单味或复方中药对肝细胞、间质细胞、骨髓干细胞的增殖调控。目的:利用基因芯片技术探讨中药左归丸对同种异性骨髓移植小鼠肝再生相关基因信号通路的影响。设计、时间及地点:开放性实验,于2002-01/2007-12在湖北中医学院附属医院肝病研究所完成。材料:SPF级4周龄BABL/C小鼠,雄性10只,作为供体;雌性80只,作为受体,随机分为单纯骨髓移植组、左归丸治疗组,40只/组。小鼠16Kv1.0基因表达谱寡核苷酸芯片由上海生物芯片公司提供。左归丸由熟地、淮山药、枸杞子、山茱萸、菟丝子、川牛膝、鹿角胶、龟板胶组成。方法:两组受体小鼠接受60Co源γ射线照射后,经尾静脉输入供鼠单个核细胞悬液0.2mL(约2×106个细胞),移植后分别给予生理盐水、左归丸7g/(kg·d)灌胃,6个月后取肝组织标本。选用小鼠基因表达谱寡核苷酸芯片,提取液氮冻存肝组织总RNA,利用反转录酶合成掺有荧光标记的cDNA探针,将探针与基因表达谱芯片杂交,筛选样本之间杂交信号比值有差异表达的基因。利用GenBankID和UniGene数据库将差异表达基因聚类,按基因本体分类法对聚类的差异表达基因分类,并采用KEGG数据库查询差异表达基因所涉及的信号通路。主要观察指标:差异表达基因谱。与肝再生相关的代谢及信号通路。结果:①与单纯骨髓移植组相比,左归丸治疗组差异表达基因共1147条,已知功能基因有533条,其中209条基因涉及70种生物化学通路。②在差异表达基因涉及的代谢信号通路中,与肝再生相关的信号通路主要有Wnt信号通路、MAPK信号通路、TGFβ信号通路、Jak-STAT信号通路、凋亡、Toll样受体信号通路等,这些通路中Wnt1、EGF、FGF2、FGF16、MAPKK1、E2F、CSF3、Myd88、sFRP1、sFRP5、CSF2受体、CNTF受体、Caspase12等基因表达上调,MAPK9、Rac1、GSK3、Wnt10a、IL12a、蛋白激酶Cγ、Akt2、ActivinA受体等基因表达下调。结论:左归丸调控肝再生的作用机制可能在于网络式双向调控肝再生相关信号通路中的基因表达。

摘要：目的:采用循证医学方法对近10年来中医药调控肝再生的临床试验文献进行定性和定量分析。方法:参照Cochrane系统评价的要求,对选择纳入的临床试验进行方法学质量评价、数据提取和分析。对符合纳入标准的42篇涉及肝再生指标的(共3108例患者)包括中医药治疗暴发性肝炎、酒精性肝病、亚急性重型肝炎、慢性重型肝炎、肝纤维化、肝癌的随机或半随机对照试验文献纳入并进行系统评价。参照英国牛津大学循证医学中心的证据等级研究文献的证据等级作为评价标准。结果:42篇文献均为低质量的随机对照临床试验,即为2b级,其中仅1篇称随机对照多中心临床试验研究,但未详细报道具体的操作方法。结论:目前尚未见将中医药调控肝再生作为主要研究内容进行的临床试验,部分临床研究包含中医药调控肝再生的研究内容,但临床试验资料所采用的方法学质量和数据处理的可信度均偏低,设计方案不够完善和严谨。

摘要：目的探讨乙酰肝素酶(HPSE)siRNA对部分肝切除大鼠术后肝再生的抑制作用。方法设计合成HPSE siRNA,以vivo-jetPEI-Gal为载体转染70%肝切除大鼠,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后HPSE mRNA表达,以Western blot检测AFP、ALB、CK-18和CK-19蛋白表达,以原位末端标记法(Tunel)检测肝细胞凋亡,以免疫组化检测肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达,并测定肝再生率。结果与各对照组相比,siRNA干扰组HPSE mRNA表达明显降低,AFP、ALB、CK-18和CK-19蛋白表达明显降低,肝细胞凋亡指数明显增高,增殖指数明显降低,肝再生率明显降低,差别显著(P<0.05)。结论 siRNA沉默HPSE表达后,部分肝切除大鼠术后肝再生受到明显抑制,提示HPSE对肝再生具有调控作用。

摘要：目的　研究大鼠肝再生增强因子（ａｕｇｍｅｎｔｅｒ ｏｆ　ｌｉｖｅｒ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ＡＬＲ）在大鼠基因组中的存在方式。方法　以大鼠基因组ＤＮＡ为模板，根据ＡＬＲ ｃＤＮＡ序列设计引物，用多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物，连入 ｐＧＥＭ Ｔｅａｓｙ Ｖｅｃｔｏｒ后测序。结果 ＰＣＲ法扩增出两条产物，其一经测序发现为ＡＬＲ的假基因，预测氨基酸序列与ＡＬＲ的同源性为８８．８％。结论　作为肝细胞再生过程中重要的生长刺激因子，大鼠ＡＬＲ存在假基因，提示可能存在ＡＬＲ多基因家族。为研究ＡＬＲ分子的进化规律提供了依据。

摘要：背景:肝细胞的再生主要受细胞因子的整体控制,肝细胞生长因子在肝细胞的再生过程中发挥着重要的作用,但其对肝星状细胞再生替代的研究较少。目的:观察肝细胞生长因子对大鼠肝部分切除后肝细胞再生及肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-11/2007-05在河南省组织再生重点实验室完成。材料:选用健康SD雌性大鼠52只,体质量(200±20)g,用于制造肝切除动物模型。肝细胞生长因子由北京生物药业有限公司提供。方法:将52只大鼠按随机数字表法分为3组,假手术组(n=12)打开腹腔,重新关腹,术后第2天腹腔注射生理盐水1mL/d;肝部分切除组(n=20)行肝部分切除,术后第2天腹腔注射生理盐水1mL/d;肝细胞生长因子组(n=20)肝部分切除术后第2天腹腔注射肝细胞生长因子12mg/(kg·d),1次/d。主要观察指标:各组分别于术后第1,2周末采血行血清学检测;取肝组织行苏木精-伊红及α-平滑肌肌动蛋白免疫组化染色,并行电镜观察。结果:52只大鼠全部进入结果分析。①与假手术组相比,术后第1周肝部分切除组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性升高,总蛋白含量降低,肝再生指数降低(P<0.05),肝细胞生长因子组上述指标明显改善(P<0.05)。②术后第1,2周各组肝组织α-平滑肌肌动蛋白表达灰度值相近。③术后第1周肝细胞生长因子组肝细胞内的粗面内质网、线粒体均明显增多。第2周后各组肝细胞超微结构无明显差异。结论:应用外源性肝细胞生长因子可以改善大鼠肝部分切除后的肝功能,促进肝细胞增殖,但在肝部分切除术后2周内对肝星状细胞无明显影响。

摘要：目的探讨保存不同时间的大鼠部分肝脏移植后的肝细胞再生及其可能机制。方法采用近交系雄性Lewis大鼠为供、受者，按照实验设计分别将供肝于4℃UW液中保存1h（冷缺血1h组）、8h（冷缺血8h组）和16h（冷缺血16h组）．然后进行原位肝移植，移植肝恢复血流前，用3-0丝线结扎供肝左侧巾央叶、左外叶及尾状叶，保留右侧的肝叶，即可制成大鼠50％体积肝脏（以下简称“半肝”）原位移植模型。术后观察各组移植肝的存活情况和肝细胞再生情况；采用逆转录聚合酶链反应测定肝组织中白细胞介素-6（1L-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达情况；采用Western印迹法检测肝组织中信号传导与转录因子-3（STAT-3）表达情况；采用免疫组织化学染色检测移植肝组织中细胞周期素D1（Cyclin D1）的表达和肝细胞摄取溴脱氧尿核苷（BrdU）情况。结果各组手术成功率均为100％。与冷缺血1h组相比，冷缺血8h组和冷缺血16h组移植肝组织中TNF-α（F=67．45，P〈0．05）和IL-6（F=287．73．P〈0．05）的表达明显增加。STAT-3的表达也明显增强。肝移植后24h．冷缺血8h组在胞浆和细胞核内均有Cyclin D1的表达，而冷缺血16h组移植肝组织中未见明显的Cyclin D1表达。移植后24h，冷缺血16h组的BrdU染色阳性的肝细胞数无明显增多，而在冷缺血8h组可见BrdU染色阳性的肝细胞明显增多（t=19．40，P〈0．05）。结论冷保存一定时限的大鼠部分肝脏在移植后可获得肝细胞再生，此过程可能通过TNF-α／IL-6／STAT-3／Cyclin D1／DNA合成的途径进行调节；当冷保存时间达16h后，肝细胞不能对肝脏再生早期信号起反应。

摘要：目的克隆大鼠及人肝再生增强因子的ｃＤＮＡ．方法按文献报道大鼠及人肝再生增强因子核苷酸序列设计合成引物．利用ｍＲＮＡ抽提试剂盒分别从乳鼠及人胎肝组织中提取ｍＲＮＡ，再逆转录聚合酶链反应扩增出需要的ｃＤＮＡ片段，经克隆入ｐＧＥＭＴ质粒后以Ｔ７ＤＮＡ聚合酶序列分析试剂盒测定ｃＤＮＡ的序列．结果经ＲＴＰＣＲ反应顺利扩增到４７０ｂｐ的鼠肝再生增加因子ｃＤＮＡ及３８４ｂｐ的人肝再生增强因子．

摘要：背景:如何获取来源丰富的高质量人源性肝细胞是生物人工肝和肝细胞移植共同面临的问题。骨髓干细胞在适当条件下可分化为肝细胞,为获取肝细胞提供了新的思路。目的:探讨人骨髓干细胞在大鼠体内诱导分化为肝细胞的方法,为解决临床肝脏移植和生物人工肝来源提供新的思路。设计:随机对照实验。单位:南方医科大学珠江医院普通外科。材料:实验于2004-05/2005-02在南方医科大学珠江医院中心实验室完成。选取雄性清洁级SD大鼠40只,随机分为5组:单纯模型组、造模+人骨髓干细胞移植14d组、造模+人骨髓干细胞移植28d组、造模+CL-1细胞(人肝细胞系)移植14d组、造模+CL-1细胞(人肝细胞系)移植28d组,8只/组。方法:①5组均建立2-乙酰氨基芴+四氯化碳+环磷酰胺肝损伤模型。②利用治疗性肝再生策略,将人骨髓干细胞移植到大鼠肝脏内诱导分化为肝细胞。造模+人骨髓干细胞移植14d组移植人骨髓干细胞后观察14d,造模+人骨髓干细胞移植28d组移植人骨髓干细胞后观察28d,造模+CL-1细胞移植14d组移植CL-1细胞后观察14d,造模+CL-1细胞移植28d组移植CL-1细胞后观察28d,单纯模型组未进行细胞移植。③各组在正常状态下以及移植前后进行血清标本的采集与肝功能检测。应用免疫组化、聚合酶链反应法、实时荧光定量反转录聚合酶链反应技术检测各组大鼠肝脏内人白蛋白的mRNA的表达。主要观察指标:①人骨髓干细胞移植对大鼠肝功能转氨酶及总胆红素含量的影响。②各组大鼠病理切片肝细胞形态检查结果。③各组大鼠肝脏中人主要组织相容性抗原-Ⅰ类阳性率。④各组大鼠肝脏中大鼠Sox11序列、人Alu-sx序列、人白蛋白mRNA基因的表达。结果:实验选用40只大鼠,全部进入结果分析。①人骨髓干细胞移植对大鼠肝功能转氨酶及总胆红素含量的影响:各细胞移植组在正常状态以及细胞移植前与单纯模型组基本相似(P>0.05);与正常状态比较,细胞移植前各组均显著增高(P<0.01);与细胞移植前比较,各细胞移植组在细胞移植后均显著降低(P<0.01),但仍高于正常状态下的转氨酶、总胆红素含量(P<0.01)。②各组大鼠病理切片肝细胞形态检查结果:正常情况下肝脏病理切片显示肝细胞排列成条索状,围绕中央静脉成放射状排列,汇管区无炎性细胞浸润;单纯模型组呈大片状坏死表现;人骨髓干细胞移植组可见一些坏死后增生性改变;CL-1细胞移植组可见卵圆细胞以及小胆管增生。③各组大鼠肝脏中人主要组织相容性抗原-Ⅰ类阳性率:单纯模型组为0,造模+人骨髓干细胞移植14d组为(13.03±0.18)%,造模+人骨髓干细胞移植28d组为(9.47±0.46)%,造模+CL-1细胞移植14d组为(10.27±0.50)%,造模+CL-1细胞移植28d组为(9.84±0.23)%。④各组大鼠肝脏中基因序列聚合酶链反应检测结果:单纯模型组大鼠肝脏中只检测到大鼠Sox11序列;而人骨髓干细胞移植、CL-1细胞移植各时间组均可检测到人Alu-sx序列和大鼠Sox11序列。⑤各组大鼠肝脏组织实时荧光定量反转录聚合酶链反应检测结果:单纯模型组大鼠肝脏组织中未检测到人白蛋白mRNA基因表达,人骨髓干细胞移植、CL-1细胞移植各时间组以及阳性对照均可检测到人白蛋白mRNA基因表达。结论:人骨髓干细胞移植能促进肝损伤大鼠的肝功能恢复,人源性细胞在肝损伤大鼠肝脏中的替代率约10%,提示人骨髓干细胞在异体内均可转化为肝细胞并可实现部分替代。

摘要：联合肝脏离断和门静脉结扎的二步肝切除术（ALPPS）是一个非常新的外科手术。该手术主要针对因未来剩余肝脏体积较小而不能接受大范围肝切除术的T分期较晚的肝癌患者而设计的。ALPPS第1步手术后，患者剩余肝脏对手术的反应非常强烈，使得肝脏体积急剧增生。因而可在第1步手术后1周左右施行第2步手术以切除所有肝内肿瘤（Ro切除）。本文追溯ALPPS的发展历史，描述该手术的传统步骤和手术的偏离等情况，分析该手术的短期疗效。尽管ALPPS后零死亡已有报道，但初步的研究结果表明：ALPPS的手术死亡率和并发症发生率仍然较高。ALPPS后尚没有明确的长远治疗肿瘤效果的报道。该手术在肝硬化肝癌患者中能否安全施行尚有疑问。